测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的特异性肽段及方法技术

本发明专利技术公开了测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的特异性肽段，包括测定HPV

【技术实现步骤摘要】
测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的特异性肽段及方法


[0001]本专利技术涉及测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的特异性肽段及方法，具体涉及测定9价HPV疫苗中抗原蛋白HPV-6、HPV-11、HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-45、HPV-52和HPV-58含量的肽段和方法，属于疫苗质量评价


技术介绍

[0002]人乳头瘤病毒是引起女性宫颈癌病的主要因素，是世界范围内第四大导致女性癌症死亡的因素。人乳头瘤病毒疫苗(即HPV疫苗)的出现为预防人乳头瘤病毒感染引起的宫颈病变发挥了极大作用。据临床数据显示，2价HPV疫苗(HPV-16/18)可预防70％宫颈早期癌变感染，9价HPV疫苗(HPV-6/11/16/18/31/33/45/52/58)可预防95％以上宫颈早期癌变感染。疫苗中抗原蛋白的含量与疫苗的有效性和安全性直接相关：若抗原蛋白含量过低，会导致疫苗免疫原性较差，无法达到刺激免疫系统产生抗体的目的，因此有效性较差；若抗原蛋白过高，则可能导致一定的毒副作用，影响疫苗的安全性。因此，HPV疫苗中抗原蛋白的含量测定是HPV疫苗质量控制的关键参数之一。
[0003]由于不同型别HPV抗原蛋白对疾病的预防存在差异，需严格控制HPV疫苗中不同型别抗原蛋白的含量和比例，从而保障HPV疫苗的安全性和有效性。有文献报道用ELISA方法测定HPV抗原蛋白，但该方法受样品基质组成、测试条件、抗体质量的影响较大，从而导致方法重复性较差。此外，该方法难以解读影响疫苗质量差异的原因，从而无法为疫苗生产提供指导和改进建议。Lowry法也可用于抗原蛋白的含量测定，但该方法只能检测总蛋白含量，无法实现复杂基质中不同抗原蛋白含量检测。本专利技术的专利技术人所在实验室在前期的研究中开法了一种基于合成肽段的2价HPV疫苗抗原蛋白含量测定方法，该方法可在一定程度上实现HPV-16/18的抗原蛋白含量测定，但该方法需要购买合成肽段，成本较高，且测试准确性受酶解效率和合成肽段稳定性的影响。

技术实现思路

[0004]针对上述现有技术，本专利技术提供了测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的特异性肽段，以及具体的测定方法。本专利技术筛选到了适合作为抗原蛋白定量测定的特异性肽段，采用高效液相色谱串联质谱方法，建立了一种高通量、高选择性、高灵敏度的9价HPV疫苗有效成分HPV-6/11/16/18/31/33/45/52/58的定量方法，用于9价HPV疫苗中HPV-6/11/16/18/31/33/45/52/58的定量分析。该方法可用于9价HPV疫苗定量对照品筛查，同一厂家不同批次疫苗成品稳定性评价，不同厂家疫苗成品对比，疫苗上清液中游离抗原蛋白检测。
[0005]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的特异性肽段，包括测定HPV-6、HPV-11、HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-45、HPV-52和HPV-58(HPV疫苗中所含的9种抗原蛋白)的9种肽段，具体如下：
[0007]测定HPV6的肽段：选自SDVPIDICGTTCK，AGEVGEPVPDTLIIK，FSSELDQYPLGR中的至少
一条；
[0008]测定HPV11的肽段：选自GQPLGVGVSGHPLLNK，LFFYLR，AGTVGEPVPDDLLVK，FSSELDQFPLGR中的至少一条；
[0009]测定HPV16的肽段：选自LLAVGHPYFPIK，SEVPLDICTSICK，AGAVGENVPDDLYIK中的至少一条；
[0010]测定HPV18的肽段：选自QTQLCILGCAPAIGEHWAK，AGTMGDTVPQSLYIK，FSLDLDQYPLGR中的至少一条；
[0011]测定HPV31的肽段：选自LLTVGHPYYSIPK，GSPCSNNAITPGDCPPLELK，SNVPLDICNSICK，SGTVGESVPTDLYIK，FLLQAGYR中的至少一条；
[0012]测定HPV33的肽段：选自SDVPIDICGSTCK，YTFWEVDLK，FLLQAGLK中的至少一条；
[0013]测定HPV45的肽段：选自GQPLGIGLSGHPFYNK，GTLCKPAQLQPGDCPPLELK，FWTVDLK，FSSDLDQYPLGR中的至少一条；
[0014]测定HPV52的肽段：选自LLTVGHPYFSIK，FGFPDTSFYNPETQR，SDVPIDICSSVCK中的至少一条；
[0015]测定HPV58的肽段：选自LLAVGNPYFSIK，SDVPIDICNSTCK，LGEAVPDDLYIK，FLLQSGLK中的至少一条。
[0016]进一步的，所述测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的特异性肽段，包括以下肽段：
[0017]测定HPV6的肽段：SDVPIDICGTTCK，AGEVGEPVPDTLIIK，FSSELDQYPLGR；
[0018]测定HPV11的肽段：GQPLGVGVSGHPLLNK，LFFYLR，AGTVGEPVPDDLLVK，FSSELDQFPLGR；
[0019]测定HPV16的肽段：LLAVGHPYFPIK，SEVPLDICTSICK，AGAVGENVPDDLYIK；
[0020]测定HPV18的肽段：QTQLCILGCAPAIGEHWAK，AGTMGDTVPQSLYIK，FSLDLDQYPLGR；
[0021]测定HPV31的肽段：LLTVGHPYYSIPK，GSPCSNNAITPGDCPPLELK，SNVPLDICNSICK，SGTVGESVPTDLYIK，FLLQAGYR；
[0022]测定HPV33的肽段：SDVPIDICGSTCK，YTFWEVDLK，FLLQAGLK；
[0023]测定HPV45的肽段：GQPLGIGLSGHPFYNK，GTLCKPAQLQPGDCPPLELK，FWTVDLK，FSSDLDQYPLGR；
[0024]测定HPV52的肽段：LLTVGHPYFSIK，FGFPDTSFYNPETQR，SDVPIDICSSVCK；
[0025]测定HPV58的肽段：LLAVGNPYFSIK，SDVPIDICNSTCK，LGEAVPDDLYIK，FLLQSGLK。
[0026]上述特异性肽段作为定量肽段在测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量中的应用。
[0027]一种9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的测定方法：对待测样品进行胰蛋白酶酶解，得酶解液，对酶解液进行高效液相色谱串联质谱分析(LC-MS/MS分析)，得色谱图，计算上述9种特异性肽段的响应峰面积，代入标准工作曲线，计算得出待测样品中HPV-6/11/16/18/31/33/45/52/58的含量。本领域技术人员应当理解，对于任意一种特异性肽段，若包含多于一条肽段，计算的响应峰面积为各条肽段的响应峰面积之和。
[0028]所述标本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的特异性肽段，其特征在于：包括测定HPV-6、HPV-11、HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-45、HPV-52和HPV-58的9种肽段，具体如下：测定HPV6的肽段：选自SDVPIDICGTTCK，AGEVGEPVPDTLIIK，FSSELDQYPLGR中的至少一条；测定HPV11的肽段：选自GQPLGVGVSGHPLLNK，LFFYLR，AGTVGEPVPDDLLVK，FSSELDQFPLGR中的至少一条；测定HPV16的肽段：选自LLAVGHPYFPIK，SEVPLDICTSICK，AGAVGENVPDDLYIK中的至少一条；测定HPV18的肽段：选自QTQLCILGCAPAIGEHWAK，AGTMGDTVPQSLYIK，FSLDLDQYPLGR中的至少一条；测定HPV31的肽段：选自LLTVGHPYYSIPK，GSPCSNNAITPGDCPPLELK，SNVPLDICNSICK，SGTVGESVPTDLYIK，FLLQAGYR中的至少一条；测定HPV33的肽段：选自SDVPIDICGSTCK，YTFWEVDLK，FLLQAGLK中的至少一条；测定HPV45的肽段：选自GQPLGIGLSGHPFYNK，GTLCKPAQLQPGDCPPLELK，FWTVDLK，FSSDLDQYPLGR中的至少一条；测定HPV52的肽段：选自LLTVGHPYFSIK，FGFPDTSFYNPETQR，SDVPIDICSSVCK中的至少一条；测定HPV58的肽段：选自LLAVGNPYFSIK，SDVPIDICNSTCK，LGEAVPDDLYIK，FLLQSGLK中的至少一条。2.根据权利要求1所述的测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的特异性肽段，其特征在于：所述测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的特异性肽段，包括以下肽段：测定HPV6的肽段：SDVPIDICGTTCK，AGEVGEPVPDTLIIK，FSSELDQYPLGR；测定HPV11的肽段：GQPLGVGVSGHPLLNK，LFFYLR，AGTVGEPVPDDLLVK，FSSELDQFPLGR；测定HPV16的肽段：LLAVGHPYFPIK，SEVPLDICTSICK，AGAVGENVPDDLYIK；测定HPV18的肽段：QTQLCILGCAPAIGEHWAK，AGTMGDTVPQSLYIK，FSLDLDQYPLGR；测定HPV31的肽段：LLTVGHPYYSIPK，GSPCSNNAITPGDCPPLELK，SNVPLDICNSICK，SGTVGESVPTDLYIK，FLLQAGYR；测定HPV33的肽段：SDVPIDICGSTCK，YTFWEVDLK，FLLQAGLK；测定HPV45的肽段：GQPLGIGLSGHPFYNK，GTLCKPAQLQPGDCPPLELK，FWTVDLK，FSSDLDQYPLGR；测定HPV52的肽段：LLTVGHPYFSIK，FGFPDTSFYNPETQR，SDVPIDICSSVCK；测定HPV58的肽段：LLAVGNPYFSIK，SDVPIDICNSTCK，LGEAVPDDLYIK，FLLQSGLK。3.权利要求1或2所述的特异性肽段作为定量肽段在测定9价HPV疫苗中抗原蛋白含量中的应用。4.9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的测定方法，其特征在于：对待测样品进行胰蛋白酶酶解，得酶解液，对酶解液进行高效液相色谱串联质谱分析，得色谱图，计算权利要求1或2所述的9种特异性肽段的响应峰面积，代入标准工作曲线，计算得出待测样品中HPV-6/11/16/18/31/33/45/52/58的含量；所述标准工作曲线，是通过以下方法得到的：取9种抗原蛋白的标准对照品，9种抗原蛋
白分别为：HPV-6、HPV-11、HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-45、HPV-52和HPV-58；混合配制成系列浓度的标准品溶液，进行胰蛋白酶酶解，得酶解液，对酶解液进行高效液相色谱串联质谱分析，得色谱图，计算权利要求1或2所述的9种特异性肽段的响应峰面积，以浓度-响应峰面积制作标准工作曲线。5.根据权利要求4所述的9价HPV疫苗中抗原蛋白含量的测定方法，其特征在于：所述对待测样品进行胰蛋白酶酶解的具体步骤如下：(
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【专利技术属性】
技术研发人员：王佑春，龙珍，黄维金，李长坤，李晓玉，聂建辉，李月琪，黄涛宏，
申请(专利权)人：岛津企业管理中国有限公司，
类型：发明
国别省市：