一种基于快速前处理技术测定鱼体中土臭素和二甲基异莰醇的方法技术

本发明专利技术属于面向水产养殖和食品监测技术领域，公开了一种基于快速前处理技术测定鱼体中土臭素和二甲基异莰醇的方法，建立了分散固相萃取

【技术实现步骤摘要】
一种基于快速前处理技术测定鱼体中土臭素和二甲基异莰醇的方法


[0001]本专利技术涉及了一种基于快速前处理测定鱼体中土腥味物质的方法，属于面向水产养殖和食品监测
，主要涉及淡水鱼和海水鱼等。主要基于分散固相萃取技术，采用改良的分散萃取和净化方法完成样品中土臭素和二甲基异莰醇的的有效提取，再进行GC/MS定量分析，可实现对养殖鱼和野生鱼体内土臭素和二甲基异莰醇的快速提取和检测，能够有效节省分析时间并节约分析成本。

技术介绍

[0002]水产品中的土腥味问题由来已久，水产品中的土腥味物质对水产品的养殖、加工、销售和消费等环节影响深远，会给相关产业造成的严重的经济损失。土腥味物质是多种化学物质的总称，组成复杂，这其中土臭素(geosmin,GSM)和二甲基异莰醇(2
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methylisoborneol,2
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MIB)被认为是造成土腥味的两种主要物质，其相关研究也最多。GSM和2
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MIB的产生多数是由环境因素导致，同时也包括水产动物体内发生的相关生化反应，如脂肪酸的氧化、含硫含氮前体物质的酶催化转化、鱼体内三甲胺在微生物和酶作用下的降解等。
[0003]研究表明，在水环境中GSM和2
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MIB的含量分别达到9ng/L和4ng/L，就会使水产品产生土腥味。在鱼肉中GSM或2
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MIB任一含量超过0.7μg/kg，这种鱼类就带有土腥味。目前大量的研究集中于水体中GSM和2
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MIB的含量分析，我国也已于2016年颁布针对生活饮用水臭味物质GSM和2
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MIB的标准检验方法《GB/T 32470
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2016》，相对而言针对鱼体内的GSM和2
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MIB进行有效分析的研究较少，就目前已开发的方法主要包括感官分析法和仪器分析法。感官分析法被认为是最直接、最简便的方法，但是不能达到定量检测的目的，也无法多次重复实验结果，因此该方法具有很大局限性；而仪器分析法可以达到准确定性定量。目前常采用气相色谱技术(GC)或气相色谱
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质谱联用技术(GC
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MS)对GSM和2
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MIB开展仪器分析，但由于鱼体内土腥味物质都是痕量存在的，对样品中GSM和2
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MIB进行富集、浓缩等一系列前处理显得尤为重要。现有的针对鱼组织样品的前处理方法主要包括微波蒸馏提取法(MAD
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SE)、搅拌棒吸附法(SBSE)、固相微萃取法(SPME)、顶空固相微萃取法(HSPME)和吹扫捕集法(P&T)等，这些前处理技术的开发直接影响鱼组织中土腥味物质检测的应用推广。
[0004]在国内外所涉及到的前处理技术中，微波蒸馏、固相微萃取法是当前主要采用的前处理方法。这其中微波蒸馏，操作步骤相对简单，但对于土腥味物质等挥发性较强的有机物，富集效果较差。微波蒸馏
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固相微萃取能够充分提取鱼体内的挥发性成分，无需有机溶剂，无需浓缩，但萃取时间较长，萃取头价格较为昂贵，且使用寿命较短不适宜大批量检测分析。微波蒸馏
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吹扫捕集，无需有机溶剂，节约时间，但提取溶剂氯化钠浓度过高，会对仪器造成堵塞，技术不完全成熟。搅拌棒吸附，无需有机溶剂，但需更长的时间才能达到吸附平衡，依据样品量，短则平衡需1h，长可达3～4h才能达到吸附平衡。动态顶空萃取，可进行连续气相萃取，但样品基质会干扰分析结果，吸附和解吸过程可能出现样品组分丢失，重现
性差。综上分析这些前处理方法对配套仪器依赖性较大，检测成时长和检测成本高，对于大规模采样分析适用性不强。
[0005]也正由于上述原因，积极开发鱼组织中GSM和2
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MIB的快速、廉价、有效的前处理技术来满足大规模检测分析正在引起人们的关注。其中液液萃取、分散固相萃取方法因操作简便、快速、可重复性高正在重新引起人们的重视。在最近的方法研究中，研究者开发出采用正己烷提取的前处理技术。但由于正己烷提取时除目标物GSM和2
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MIB被提取外，其亲脂性会导致鱼组织中的脂肪及亲脂性化合物也被提取，故操作中需增加SPE柱净化的处理工艺，导致前处理提取时间增长，工艺增加，检测成本提高。本研究技术基于分散固相萃取原理，采用乙腈和水体系，在常温常压下即能够完成目标物GSM和2
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MIB的快速提取，再经快速净化后进行仪器分析，能显著降低检测成本，节省检测时长，可重复性高，适合于鱼组织中GSM和2
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MIB大批量快速检测。
[0006]鱼类是人类消费的主要食物来源之一，长期以来鱼体中存在的土腥味物质始终影响从养殖(或捕捞)到餐桌的全过程，针对鱼体中土腥味物质的客观评价以及消减技术的开发严重依赖于相关检测技术的发展。为了降低检测成本，节省检测时长，针对典型土腥味物质GSM和2
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MIB，开发快速、简便适于大批量检测的前处理技术非常有必要性。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的正是基于上述现有技术状况而提供了一种快速、简便、高效测定鱼体中GSM和2
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MIB的方法。
[0008]本专利技术的技术方案：
[0009]一种基于快速前处理技术测定鱼体中土臭素和二甲基异莰醇的方法，包括以下步骤：
[0010](1)液固萃取：向匀浆后的鱼组织样品中加入乙腈进行萃取，涡旋振荡30～60s；
[0011](2)盐析反萃：向步骤(1)得到的样品中加入氯化钠，每2g鱼组织样品中添加1～2g氯化钠，涡旋振荡30～60s，8000～12000r/min离心3～5min；
[0012](3)脱水净化：向步骤(2)得到待净化液中加入无水硫酸钠，每2g鱼组织样品中添加4～6g无水硫酸钠，涡旋振荡30～60s，8000～12000r/min离心3～5min，上清液转移；
[0013](4)吸附净化：向步骤(3)得到的上清液中加入吸附净化剂，涡旋振荡30～60s，8000～12000r/min离心3～5min，上清液转移；吸附净化剂为PSA和活性碳，每2g鱼组织样品中分别添加0.1g；
[0014](5)过膜净化：将步骤(4)得到的上清液过滤膜，净化后上机；
[0015](6)标准溶液配制：首先，称取10mg的2
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MIB用甲醇定容至10mL，配置成1mg/mL的标准品储备液，称取10mg的GSM用甲醇定容至10mL，配置成1mg/mL的标准品储备液。分别量取适量的GSM和2
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MIB,用甲醇配制成浓度为1mg/L的混合标准中间液。吸取混合标准中间液适量，用甲醇将其稀释为含GSM和2
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MIB分别为1ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL的标准系列工作溶液，内标2
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异丁基
‑3‑
甲氧基吡嗪含量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于快速前处理技术测定鱼体中土臭素和二甲基异莰醇的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)液固萃取：向匀浆后的鱼组织样品中加入乙腈进行萃取，涡旋振荡30～60s；(2)盐析反萃：向步骤(1)得到的样品中加入氯化钠，每2g鱼组织样品中添加1～2g氯化钠，涡旋振荡30～60s，8000～12000r/min离心3～5min；(3)脱水净化：向步骤(2)得到待净化液中加入无水硫酸钠，每2g鱼组织样品中添加4～6g无水硫酸钠，涡旋振荡30～60s，8000～12000r/min离心3～5min，上清液转移；(4)吸附净化：向步骤(3)得到的上清液中加入吸附净化剂，涡旋振荡30～60s，8000～12000r/min离心3～5min，上清液转移；吸附净化剂为PSA和活性碳，每2g鱼组织样品中分别添加0.1g；(5)过膜净化：将步骤(4)得到的上清液过滤膜，净化后上机；(6)标准系列溶液配制：用甲醇溶液配制含土臭素和二甲基异莰醇分别为0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL的标准系列上机工作溶液；(7)定性定量分析：将待分析液进入气相色谱
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质谱联用仪，采用SIM扫描模式监测，内标法定量。2...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲宝成，王侯宇，谢晴，赵洪霞，刘鹰，岳扬，王炫凯，张敬波，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：