一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液及其制备方法和用途；通过免洗脱细胞制剂复苏法制得细胞悬液，并结合质量分数10％的葡萄糖对细胞悬液进行稀释，制得高性能的细胞溶液，制备的细胞溶液中的细胞活力、凋亡水平等均得到了极大程度的改善，进而可将细胞溶液运用于治疗关节炎药剂中，提高关节软骨修复程度以及关节炎的疗效，还可以用于全身静脉输注，兼顾细胞制剂全身应用的适应症，为提高临床级间充质干细胞产品的疗效提供了解决方法。床级间充质干细胞产品的疗效提供了解决方法。

【技术实现步骤摘要】
一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液及其制备方法和用途


[0001]本专利技术涉及医药生物
，特别是一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(MSC)具有多向分化潜能，在组织工程、细胞替代治疗、再生医学、基因治疗等领域得到了日益广泛的应用。现有技术中，间充质干细胞的长期保存主要为冻存的方式，而临床使用的MSC均需要在复苏后注射或输注入人体，故需要使用临床级别的溶质对细胞悬液进行稀释。
[0003]现有技术中，间充质干细胞的复苏方法主要包括两个，(1)常规复苏法：37℃孵温完全培养基，从液氮罐中取出细胞冻存管，放入40℃水浴锅中，轻轻晃动管身，注意管帽始终高于液面；待冻存液融化，酒精消毒后转入超净台，打开盖子，轻轻吹打冻存管内细胞，转移入15mL离心管，按冻存液10倍体积加入完全培养基，300g离心5min，吸弃上清，加入新鲜培养基，临床使用则加入生理盐水等临床常用溶质；(2)免洗脱冻存液复苏法：从液氮罐中取出细胞冻存管，放入40℃水浴锅中，轻轻晃动管身，注意管帽始终高于液面；待冻存液融化，酒精消毒后转入超净台，打开盖子，轻轻吹打冻存管内细胞，转移入新鲜培养基，临床使用则加入生理盐水等临床常用溶质。
[0004]目前静脉输注常用的细胞复苏的稀释溶质为复方电解质液，用该溶质稀释后的复苏细胞的活力及增殖能力都下降，注射入关节腔后细胞功效会受到影响，因此一般不用于关节腔的注射；而现有技术中，关节腔注射常用的细胞复苏的稀释溶质为玻璃酸钠，因玻璃酸钠使用局限，其仅能用于局部注射，不利于按照药品管理制度下的适应症扩展。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液及其制备方法和用途；通过免洗脱细胞制剂复苏法，并采用质量分数为10％葡萄糖作为细胞复苏的稀释溶质，其制备的复苏细胞的活性、增殖活性以及凋亡水平均得到了极大程度的改善，能够直接注射入关节腔，提高关节软骨修复程度以及关节炎的疗效，还可以用于全身静脉输注，兼顾细胞制剂全身应用的适应症，为提高临床级间充质干细胞产品的疗效提供了解决方法。
[0006]本专利技术的第一个目的是通过以下技术方案来实现的：
[0007]一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液，由细胞悬液和10％的葡萄糖溶液等体积混合而成，所述细胞悬液由冻存的脂肪间充质干细胞复苏制得，所述冻存的脂肪间充质干细胞的额细胞密度为0.8
×
107/mL～1.2
×
107/mL。
[0008]优选的，所述的冻存的脂肪间充质干细胞的细胞密度为1.0
×
107/mL。
[0009]本专利技术提供的第二个目的为：提供一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液的制备方法，包括如下步骤：
[0010]S1从液氮罐中取出冻存有脂肪间充质干细胞的细胞冻存管；
[0011]S2将所述细胞冻存管水浴融化；
[0012]S3对所述细胞冻存管进行消毒；
[0013]S4打开细胞冻存管的盖子，轻轻吹打细胞冻存管内的细胞，制得细胞悬液；
[0014]其特征在于：所述步骤S1中，冻存的脂肪间充质干细胞的细胞密度为0.8
×
107/mL～1.2
×
10
7 /mL；所述步骤S2中的水浴融化过程中，水浴锅设定温度为42℃，且水浴锅锅盖保持打开状态，轻轻顺时针晃动管身；所述步骤S4后，将细胞悬液与质量分数为10％的葡萄糖溶液等体积混合，制得细胞溶液。
[0015]本专利技术提供的第三个目的为：提供一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液的用途，用于制备治疗关节炎的注射液。
[0016]本专利技术的有益效果是：
[0017]1、现有技术中常采用37～40℃水浴融化冻存液，因其温度较低，融化速度较慢，易导致水分渗入到细胞内，导致再次形成胞内结晶损伤细胞；而本专利技术采用42℃水浴融化冻存液，水溶融化过程中锅盖保持打开状态，能够使水浴温度保持略低于42℃，相较37～40℃，温度较高，能够极大程度减短复苏时间，保证细胞外结晶快速融化，减少细胞损伤，进一步提高复苏细胞的活性、增殖活性以及细胞性能等。
[0018]2.通过本专利技术中的免洗脱冻存液复苏法获得的细胞悬液具有极强的均一性和稳定性，其能很好的保持细胞的活性、增殖活性、分泌活性、细胞性能等；同时本专利技术中采用的溶质为质量分数为10％的葡萄糖，该浓度的葡萄糖是文献所查及的治疗OA的有效浓度的最低浓度，可以兼顾疗效的同时，最大限度减少对糖尿病患者的影响。并且，10％葡萄糖注射液已有临床级的产品，其不仅可以直接用于关节腔、局部注射，还可以静脉输注，不影响细胞的使用范围，是解决临床级细胞冻存后使用的“最佳伴侣”。
附图说明
[0019]图1：豚鼠的行为学测试图；
[0020]图2：豚鼠修复图；
[0021]图3：对比例3中复苏的活细胞比例图；
[0022]图4：实施例1中复苏的活细胞比例图；
[0023]图5：细胞因子水平测定图。
具体实施方式
[0024]下面结合实施例进一步详细描述本专利技术的技术方案，但本专利技术的保护范围不局限于以下。
[0025]一、实施例与对比例
[0026]实施例1
[0027]从液氮罐中取出1管细胞密度为1.0
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107/mL的细胞冻存管，放入42℃水浴锅中(水浴锅设定温度为42℃，并保持锅盖为打开状态)，轻轻顺时针晃动管身，使管帽始终高于液面；待冻存管中的细胞融化后，对冻存管进行酒精消毒，其后转入超净台，打开冻存管盖子，并轻轻吹打3次冻存管内细胞，制得细胞悬液，将细胞悬液与质量分数为10％的葡萄糖溶液(即稀释溶质)等体积混合，制得细胞溶液。
[0028]对比例1
[0029]将质量分数为10％的葡萄糖溶液换为质量分数为0.9％的生理盐水，其余步骤同实施例1。
[0030]对比例2
[0031]将质量分数为10％的葡萄糖溶液换为复方电解质液，其余步骤同实施例1。
[0032]对比例3
[0033]将42℃改为40℃，其余步骤同实施例1。
[0034]二、脂肪间充质干细胞的增殖活性、活性、凋亡率的实验方法
[0035]1.CCK8检测(细胞增殖活性)
[0036](1)细胞种板：取三只5ml离心管，分别加入实施例1和对比例1
‑
2中的细胞悬液和稀释溶质，制得细胞混合液，分别使用相应的稀释溶质调节三只离心管中细胞混合液的细胞密度，使细胞密度均为1
×
105/mL，将三只离心管中的细胞混合液分别以100μL/孔接种于96孔板中(边缘孔用无菌PBS填充)，每组4次重复，37℃、5％CO2恒温培养；
[0037](2)CCK8反应：培养4h、12h、24h、48h后，每孔加入10μL CCK8溶液，37℃、5％CO2恒温继续培养1h；
[0038](3)测吸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液，其特征在于，由细胞悬液和10％的葡萄糖溶液等体积混合而成，所述细胞悬液由冻存的脂肪间充质干细胞复苏制得，所述冻存的脂肪间充质干细胞的额细胞密度为0.8
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107/mL～1.2
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107/mL。2.根据权利要求1所述的一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液，其特征在于，所述的冻存的脂肪间充质干细胞的细胞密度为1.0
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107/mL。3.一种高性能的脂肪间充质干细胞溶液的制备方法，包括如下步骤：S1从液氮罐中取出冻存有脂肪间充质干细胞的细胞冻存管；S2将...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱依谆，
申请(专利权)人：成都拜美森生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：