一种基于高通量测序的线粒体基因组测序文库的构建方法及扩增引物技术

本发明专利技术公开了一种基于高通量测序的线粒体基因组测序文库的构建方法及扩增引物。该扩增引物包括引物对1和引物对2；引物对1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和2所示，引物对2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和4所示。本发明专利技术只需两对扩增引物，通过一次PCR扩增，即可获得足量的线粒体DNA样本，大大减少了繁杂的引物量和成本的投入，并简化操作。本发明专利技术通过两对引物的扩增产物混合建库，提高了mtDNA的完整性和准确性，保证数据分析的有效性。保证数据分析的有效性。保证数据分析的有效性。

【技术实现步骤摘要】
NO.2所示，所述引物对2的上游引物MT2
‑
F如SEQ ID NO.3所示，下游引物MT2
‑
R如SEQ ID NO.4所示。
[0008]本专利技术还提供了一种用于构建线粒体基因组测序文库的试剂盒，其包括所述的人线粒体扩增引物。
[0009]本专利技术另一方面提供了一种人线粒体基因组扩增方法，其包括如下步骤：
[0010]以全血DNA为模板，采用所述的人线粒体扩增引物进行PCR扩增。
[0011]优选地，所述PCR扩增的PCR反应体系包括：5
×
PrimeSTAR GXL Buffer 10μL，dNTP Mixture(2.5mM each)4μL，PrimeSTAR GXL DNAPolymerase 1μL，模板DNA 1μL，10μM MT1
‑
F/MT2
‑
F 1μL，10μM MT1
‑
R/MT2
‑
R 1μL，NF
·
H2O32μL。
[0012]优选地，所述PCR扩增的PCR反应程序为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人线粒体扩增引物，其特征在于，包括引物对1和引物对2；所述引物对1的上游引物MT1
‑
F如SEQ ID NO.1所示，下游引物MT1
‑
R如SEQ ID NO.2所示，所述引物对2的上游引物MT2
‑
F如SEQ ID NO.3所示，下游引物MT2
‑
R如SEQ ID NO.4所示。2.一种人线粒体基因组扩增方法，其特征在于包括如下步骤：以全血DNA为模板，采用权利要求1所述的人线粒体扩增引物进行PCR扩增。3.根据权利要求2所述的扩增方法，其特征在于，所述PCR扩增的PCR反应体系包括：5
×
PrimeSTAR GXL Buffer 10μL，dNTP Mixture(2.5mM each)4μL，PrimeSTAR GXL DNA Polymerase 1μL，模板DNA 1μL，10μM MT1
‑
F/MT2
‑
F 1μL，10μM MT1
‑
R/MT2
‑
R 1μL，NF
·
H2O 32μL。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：雷继海，华大颂，肖锐，
申请(专利权)人：杭州博圣医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：