DNA水凝胶、制备方法、水凝胶组合物及其应用技术

本发明专利技术公开了DNA水凝胶、制备方法、水凝胶组合物及其应用，其中DNA水凝胶，至少由RCA产物一、RCA产物二共混后形成，所述RCA产物一、RCA产物二共混的体积比为1：(1

【技术实现步骤摘要】
DNA水凝胶、制备方法、水凝胶组合物及其应用


[0001]本专利技术是关于生物免疫技术，尤其是T细胞的分离与培养等方面的技术，特别是关于一种应用于T细胞分离的DNA水凝胶、制备方法、水凝胶组合物及其应用。

技术介绍

[0002]免疫细胞可通过直接杀伤肿瘤细胞或触发适应性免疫反应来抑制肿瘤的进展，其中肿瘤微环境中的肿瘤浸润淋巴细胞与肿瘤的进展密切相关。因此，高效分离高纯度、低损伤的肿瘤浸润淋巴细胞对于研究其在免疫治疗方面的应用具有重要意义，同时具有很高的挑战。目前，在肿瘤浸润淋巴细胞的分离技术中主要有密度梯度离心、免疫磁珠富集法和荧光激活细胞分选技术等。密度梯度离心是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离，从而达到细胞分离的目的。免疫磁珠富集法是通过在磁珠表面修饰抗体后，在外加磁场的作用下洗脱进行细胞分离。荧光激活细胞分选技术是使用靶细胞特异性荧光染料将待分离细胞群染色后进行流式细胞术分选，从而将表面荧光染色靶细胞和未被染色的非靶细胞分离开。这些分离技术虽有着较高的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA水凝胶，用于T细胞分离，其特征在于，至少由RCA产物一、RCA产物二共混后形成，所述RCA产物一、RCA产物二共混的体积比为1：(1
‑
5)，其中，所述RCA产物一其组成至少包括，以每100微升计：(5
×
10
‑3～1
×
10
‑2)nmol的环状DNA模板一、(3～5)U的phi 29 DNA聚合酶、终浓度为1
×
phi 29 DNA聚合酶缓冲液、终浓度为(0.1～0.4)微克/微升的BSA、(0.05～0.1)nmol的dNTPs、终浓度(60～80)mmol/L的NaCl；所述RCA产物二其组成至少包括，以每100微升计：(5
×
10
‑3～1
×
10
‑2)nmol的环状DNA模板二，(3～5)U的phi 29 DNA聚合酶，终浓度为1
×
phi29 DNA聚合酶缓冲液，终浓度为(0.1～0.4)微克/微升的BSA，(0.05～0.1)nmol的dNTPs，终浓度(60～80)mmol/L的NaCl。2.如权利要求1所述的DNA水凝胶，其特征在于，所述环状DNA模板一为由具有末端缺口的环状DNA
‑
1与T4 DNA连接酶反应获得，所述环状DNA
‑
1为经5
’
端磷酸化修饰的ssDNA
‑
1和引物1反应获得，所述ssDNA
‑
1的碱基数为92～158，所述引物1的碱基数为16～37，并且所述ssDNA
‑
1的5
’
端和3
’
端分别与引物1的3
’
端和5
’
端互补配对。3.如权利要求1所述的DNA水凝胶，其特征在于，所述环状DNA模板二为由具有末端缺口的环状DNA
‑
2与T4 DNA连接酶反应获得，所述环状DNA
‑
2为经5
’
端磷酸化修饰的ssDNA
‑
2和引物2反应获得，所述ssDNA
‑
2的碱基数为92～158，所述引物2的碱...

【专利技术属性】
技术研发人员：仰大勇，姚池，贾雪梅，
申请(专利权)人：天津大学浙江研究院，
类型：发明
国别省市：