寡核苷酸在抑制新冠病毒所致的多组织器官细胞损伤中的应用制造技术

本发明专利技术公开了寡核苷酸在抑制新冠病毒以及其它原因所致的多组织器官细胞损伤中的应用、抑制lncRNA EPB41L4A

【技术实现步骤摘要】
寡核苷酸在抑制新冠病毒所致的多组织器官细胞损伤中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及寡核苷酸在抑制新冠病毒以及其它原因所致 的多组织器官细胞损伤中的应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)的感染所致疾病的预防，诊断和治疗为亟待解决 的重大社会公共卫生安全问题。
[0003]SARS
‑
CoV
‑
2主要通过其Spike蛋白的受体结合域结合人细胞表面受体ACE2蛋白 来侵染细胞，入侵细胞后，SARS
‑
CoV
‑
2会导致ACE2水平的下降，而ACE2作为肾 素
‑
血管紧张素的重要因子，除调节人体血压外，还与细胞的增殖、炎症反应和细胞凋 亡有关。其中ACE2的失调而导致细胞凋亡可能是新冠患者多组织损伤的一个重要原 因。
[0004]非编码核酸(ncRNA)是一类由RNA聚合酶II转录所产生的不具备编码蛋白的 RNA转录本，其中长度大于200个核酸的非编码核酸称为长链非编码核酸(lncRNA)。 近年来的研究发现lncRNA在调节机体的生理和病理过程中发挥重要作用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一在于提供抑制lncRNA EPB41L4A
‑
AS1基因表达的物质的应用。
[0006]本专利技术提供了抑制lncRNA EPB41L4A
‑
AS1基因表达的物质在如下任一中的应用：
[0007](1)制备抑制细胞凋亡的产品；
[0008](2)抑制细胞凋亡；
[0009](3)制备提高ACE2蛋白含量的产品；
[0010](4)提高ACE2蛋白含量；
[0011](5)制备促进ACE2基因表达的产品；
[0012](6)促进ACE2基因表达；
[0013](7)制备抑制组织器官细胞损伤的产品；
[0014](8)抑制组织器官细胞损伤。
[0015]所述lncRNA EPB41L4A
‑
AS1的序列为SEQ ID No.1所示。
[0016]所述抑制lncRNAEPB41L4A
‑
AS1基因表达可通过基因敲除实现或通过基因沉默 实现。
[0017]所述基因敲除(gene knockout)是通过DNA序列的改变使特定靶基因失活。
[0018]所述基因沉默是指在不损伤原有DNA的情况下使基因不表达或低表达的现象。 基因沉默以不改变DNA序列为前提，使基因不表达或低表达。基因沉默可发生在两 种水平上，一种是由于DNA甲基化、异染色质化以及位置效应等引起的转录水平的 基因沉默，另一种是转录后基因沉默，即在基因转录后的水平上通过对靶标RNA进行 特异性抑制而使基因失活，包括反义RNA、共抑制(co
‑
suppression)、基因压抑 (quelling)、RNA干扰(RNAi)和微小
RNA(miRNA)介导的翻译抑制等。
[0019]可选地，根据上述的应用，所述抑制lncRNAEPB41L4A
‑
AS1基因表达的物质为 如下任一种：
[0020]1)靶向所述lncRNA EPB41L4A
‑
AS1的寡核苷酸；
[0021]2)产生靶向所述lncRNAEPB41L4A
‑
AS1的寡核苷酸的DNA分子；
[0022]3)产生靶向所述lncRNAEPB41L4A
‑
AS1的寡核苷酸的表达载体；
[0023]4)产生靶向所述lncRNA EPB41L4A
‑
AS1的寡核苷酸的重组微生物。
[0024]可选地，根据上述的应用，所述靶向所述lncRNA EPB41L4A
‑
AS1的寡核苷酸的 靶序列为SEQ ID No.20所示序列的第841
‑
861位和/或SEQ ID No.20所示序列的第 917
‑
937位。
[0025]可选地，根据上述的应用，其特征在于，所述寡核苷酸为sgRNA、siRNA、shRNA、 miRNA或反义RNA。
[0026]可选地，根据上述的应用，所述siRNA的序列如SEQ ID No.12或SEQ ID No.14 所示。所述shRNA的序列可如SEQ ID No.8或SEQ ID No.9所示。
[0027]可选地，根据上述的应用，所述产生靶向所述lncRNA EPB41L4A
‑
AS1的shRNA 的DNA分子序列如SEQ ID No.3或SEQ ID No.5所示。
[0028]上述重组微生物可为重组慢病毒，具体可为实施例所述表达靶向 EPB41L4A
‑
AS1
‑
1 shRNA的质粒和/或表达靶向EPB41L4A
‑
AS1
‑
2shRNA的质粒。
[0029]可选地，根据上述的应用，所述组织器官细胞损伤由新型冠状病毒所引起。
[0030]可选地，根据上述的应用，所述组织器官细胞损伤为肺细胞损伤、肝细胞损伤和/ 或血管内皮细胞损伤。
[0031]本专利技术还提供了一种产品，包含上述的抑制lncRNAEPB41L4A
‑
AS1基因表达的 物质，所述产品具有如下至少一种功能：
[0032](1)抑制细胞凋亡；
[0033](2)提高ACE2蛋白含量；
[0034](3)促进ACE2基因表达；
[0035](4)抑制组织器官细胞损伤。
[0036]本专利技术还提供了抑制lncRNA EPB41L4A
‑
AS1基因表达的物质和抑制ACE2基因 表达的物质在制备促进细胞凋亡产品或促进细胞凋亡中的应用。
[0037]上文中，所述细胞具体可为肺细胞、肝细胞和/或血管内皮细胞，例如HepG2、 A549和/或HUVEC细胞。
[0038]本专利技术实施例表明lncRNA EPB4114A
‑
AS1在新冠病毒以及其它因素所致的多组 织器官细胞损伤中起着重要作用。在本专利技术实施例中，与对照相比，SARS
‑
CoV
‑
2的 侵染或低氧处理能显著上调lncRNA EPB41L4A
‑
AS1的表达，同时伴随着ACE2表达 水平的下降，提示两者之间可能存在某种调控关系。本专利技术实施例表明，lncRNAEPB4114A
‑
AS1的抑制能显著增强ACE2的表达，抑制细胞的凋亡。本专利技术提供的抑 制lncRNAEPB41L4A
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AS1的寡核苷酸可以通过上调ACE2的表达而应用于抑制新冠 病毒所致的多组织器官细胞损伤中。
附图说明
[0039本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抑制lncRNA EPB41L4A
‑
AS1基因表达的物质在如下任一中的应用：(1)制备抑制细胞凋亡的产品；(2)抑制细胞凋亡；(3)制备提高ACE2蛋白含量的产品；(4)提高ACE2蛋白含量；(5)制备促进ACE2基因表达的产品；(6)促进ACE2基因表达；(7)制备抑制组织器官细胞损伤的产品；(8)抑制组织器官细胞损伤；所述lncRNA EPB41L4A
‑
AS1的序列为SEQ ID No.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述抑制lncRNA EPB41L4A
‑
AS1基因表达的物质为如下任一种：1)靶向所述lncRNA EPB41L4A
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AS1的寡核苷酸；2)产生靶向所述lncRNAEPB41L4A
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AS1的寡核苷酸的DNA分子；3)产生靶向所述lncRNA EPB41L4A
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AS1的寡核苷酸的表达载体；4)产生靶向所述lncRNA EPB41L4A
‑
AS1的寡核苷酸的重组微生物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述靶向所述lncRNA EPB41L4A
‑
AS1的寡核苷酸的靶序列为SEQ ID No.20所示序列的第841
‑
861位和/或SEQ ID No.20所示序列的第917
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【专利技术属性】
技术研发人员：廖卫捷，张雅鸥，张世宽，许乃寒，谢伟东，
申请(专利权)人：清华大学深圳国际研究生院，
类型：发明
国别省市：