一种靶向抑制circLATS2基因表达的siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体公开了一种靶向抑制circLATS2基因表达的siRNA及其应用。本发明专利技术提供环状RNA circ0007590抑制剂在制备治疗胰腺癌的药物中的应用，环状RNA circ0007590抑制剂包括抑制circ LATS2基因表达的si

【技术实现步骤摘要】
ID NO.3所示。
[0009]本专利技术基于环状RNA circ0007590设计出特异siRNA，实验发现，在HPAF
‑
II细胞系中，敲低环状RNAcirc0007590的表达水平显著抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭水平，即下调表达环状RNA circ0007590可以抑制胰腺癌细胞株的生长。
[0010]第二目的，本专利技术提供了一种胰腺癌的治疗药物，所述治疗药物包括环状RNA circ0007590抑制剂。
[0011]作为本专利技术所述胰腺癌的治疗药物的优选实施方式，所述治疗药物还包括药物上可接受的载体。
[0012]在上述技术方案中，药物上可接受的载体包括任何和所有生理上相容的溶剂、分散介质、包衣料、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延缓剂等。药学上可接受的载体的实例包括水、盐水、磷酸缓冲盐水、右旋糖酐、甘油、乙醇等中的一个或多个以及它们的组合。在很多情况下，优选的是将等渗剂例如糖、多元醇或氯化钠包括在组合物中。药学上可接受的载体还可包含少量的能提高抗体或抗体部分的货架期或有效性的辅助物质，如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲液。
[0013]第三目的，本专利技术提供了一种靶向抑制circLATS2基因表达的siRNA，所述siRNA包括si
‑
circLATS2
‑
1、si
‑
circLATS2
‑
2和si
‑
circLATS2
‑
3中的至少一种，所述si
‑
circLATS2
‑
1的序列如SEQ ID NO.1所示，所述si
‑
circLATS2
‑
2的序列如SEQ ID NO.2所示，所述si
‑
circLATS2
‑
3的序列如SEQ ID NO.3所示。
[0014]本专利技术设计的三条siRNA有着较高的干扰效率(>70％)，si
‑
circLATS2
‑
1和si
‑
circLATS2
‑
2干扰效率可达到80％。
[0015]作为本专利技术所述靶向抑制circLATS2基因表达的siRNA的优选实施方式，circLATS2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0016]第四目的，本专利技术提供了上述siRNA在制备治疗胰腺癌药物中的应用。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0018]本专利技术提供环状RNA circ0007590抑制剂在制备治疗胰腺癌的药物中的应用，环状RNA circ0007590抑制剂包括抑制circLATS2基因表达的si
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circLATS2
‑
1、si
‑
circLATS2
‑
2和si
‑
circLATS2
‑
3中的至少一种，三条siRNA有着较高的干扰效率(>70％)，si
‑
circLATS2
‑
1和si
‑
circLATS2
‑
2干扰效率可达到80％；在HPAF
‑
II细胞系中，敲低环状RNA circ0007590的表达水平显著抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭水平，即下调表达环状RNA circ0007590可以抑制胰腺癌细胞株的生长。
附图说明
[0019]图1为采用qRT
‑
PCR检测HPAF
‑
II细胞系中环状RNA circ0007590的表达水平结果图；
[0020]图2为采用CCK
‑
8实验检测应用si
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circLATS2
‑
1、si
‑
circLATS2
‑
2和si
‑
circLATS2
‑
3干扰circLATS2后胰腺癌细胞系HPAF
‑
II增殖能力的变化图；
[0021]图3为采用transwell迁移实验检测应用si
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circLATS2
‑
1、si
‑
circLATS2
‑
2和si
‑
circLATS2
‑
3干扰circLATS2后胰腺癌细胞系HPAF
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II迁移能力的变化图(右下标为100μm)；
[0022]图4为采用transwell侵袭实验检测应用si
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circLATS2
‑
1、si
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circLATS2
‑
2和si
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circLATS2
‑
3干扰circLATS2后胰腺癌细胞系HPAF
‑
II侵袭能力的变化图(右下标为100μm)。
具体实施方式
[0023]为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明。
[0024]在以下实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0025]选用环状RNA circ0007590对应的基因circLATS2基因(583nt)为靶基因，circLATS2基因(>hsa_circ_0007590；NM_014572；583nt)的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0026]实施例1
[0027]1、设计siRNA
[0028]1)从转录本(hsa
‑
circ
‑
0007590)的AUG起始密码开始，寻找“AA”二连序列，并记下其3
’
端的19个碱基序列，作为潜在的siRNA靶位点，正义链和反义链都采用这19个碱基(不包括AA)来设计。
[0029]2)避免在起始密码子或无义区域附近选择目的序列。
[0030]3)siRNA序列的GC含量应为30％
‑
60％左右。
[0031]4)在设计siRNA时不要针对5
’
和3
’
端的非编码区(UTRs)，因为这些地方有丰富的调控蛋白结合区域，而这些UTR结合蛋白或者翻译起始复合物可能会影响siRNA核酸内切酶复合物结合靶标RNA，从而影响siRNA的效果。
[0032]5)将挑选的序列在公共数据库中进行比较以确保目的序列与其他基因没有同源性。
[0033]6)将潜在的序列和相应的基因组数据库进行比较，排除那些和其他编码序列/EST同源的序列。
[0034]7)选出合适的目标序列进行合成，共设计3个靶序列的siRNA，以找到最本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.环状RNA circ0007590抑制剂在制备治疗胰腺癌的药物中的应用，其特征在于，环状RNA circ0007590对应的亲本基因为LATS2基因，所述环状RNA circ0007590抑制剂包括抑制circ LATS2基因表达的siRNA。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述siRNA包括si
‑
circLATS2
‑
1、si
‑
circLATS2
‑
2和si
‑
circLATS2
‑
3中的至少一种，所述si
‑
circLATS2
‑
1的序列如SEQ ID NO.1所示，所述si
‑
circLATS2
‑
2的序列如SEQ ID NO.2所示，所述si
‑
circLATS2
‑
3的序列如SEQ ID NO.3所示。3.一种胰腺癌的治疗药物，其特征在于，所述治疗药物包括环状RNA circ...

【专利技术属性】
技术研发人员：张世能，郑丹丹，黄凤婷，庄燕妍，
申请(专利权)人：中山大学孙逸仙纪念医院，
类型：发明
国别省市：