一种组培与扦插结合的落羽杉快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种组培与扦插结合的落羽杉快繁方法，属于植物组培技术领域。本发明专利技术方法包括以下步骤：从落羽杉优良母树上采取外植体，外植体包括嫩叶、半木质化茎段和茎尖，对外植体进行消毒后接种至愈伤诱导培养基上。经过愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、愈伤组织的诱导不定芽、伸长生长及壮苗处理以及室内扦插生根培养，即可得到大量落羽杉小苗，可直接移植栽培。本发明专利技术组织培养操作步骤简单，成本低，能够快速增殖产生大量不定芽，高效繁育大量落羽杉苗木，有利于落羽杉优良品种在市场上的推广。广。广。

【技术实现步骤摘要】
一种组培与扦插结合的落羽杉快繁方法


[0001]本专利技术属于植物组培
，具体涉及一种组培与扦插结合的落羽杉快繁方法。

技术介绍

[0002]落羽杉(Taxodium distichum(L.)Rich.)为柏科落羽杉属的古老孑遗植物，其树形高大优美，叶片秀丽似羽毛，生长速度快且适应性强，能够耐水湿、低温、土壤贫瘠，病虫害少，广泛应用于生态防护、园林绿化和工业用材。此外，落羽杉叶片和果实中的挥发油具有明显的抑菌活性。
[0003]相关研究发现，落羽杉的种子败育率高，并且播种繁殖前需要对其进行沙藏处理，持续时间较长，操作繁琐；另外，扦插繁育时枝条的采集易受到数量与季节的限制。迄今为止，有关落羽杉的愈伤组织诱导及分化的方法尚未见报道。因此，通过组织培养技术开展落羽杉的无性繁殖研究非常重要，可为落羽杉良种的扩繁提供理论和技术支持。

技术实现思路

[0004]针对现有技术存在的上述问题，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种组培与扦插结合的落羽杉快繁方法，可快速产生大量落羽杉小苗。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案如下：
[0006]一种组培与扦插结合的落羽杉快繁方法，包括以下步骤：
[0007]1)从落羽杉优良母树上采取外植体，外植体为嫩叶、半木质化茎段或茎尖，对外植体进行消毒；
[0008]2)将步骤1)所得无菌外植体接入愈伤组织诱导培养基中，诱导出愈伤组织；
[0009]3)将步骤2)所得愈伤组织接种至增殖培养基中进行愈伤组织增殖培养；
[0010]4)将增殖后的愈伤组织接种至不定芽诱导培养基中，诱导出不定芽；
[0011]5)对不定芽进行伸长生长及壮苗处理后，将其切下进行扦插生根培养，获得落羽杉小苗。
[0012]进一步地，步骤1)中，所述外植体为半木质化的茎段，茎段切口为45℃斜角。
[0013]进一步地，步骤2)中，所述愈伤组织诱导培养基为MS+TDZ 0.3mg/L+6
‑
BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+VC 5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。
[0014]进一步地，步骤3)中，所述愈伤组织增殖培养基为MS+NAA 0.1～0.3mg/L+6
‑
BA 0.2mg/L+TDZ 0.2～0.3mg/L+VC 5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。
[0015]进一步地，步骤3)中，愈伤组织增殖培养过程中愈伤组织25d继代一次。
[0016]进一步地，步骤4)中，所述不定芽诱导培养基为：基本培养基+6
‑
BA 0.3mg/L+NAA 0.1mg/L+VC 5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，所述基本培养基为MS、WPM或MLV。
[0017]进一步地，步骤5)中，所述不定芽伸长生长与壮苗处理所用的培养基为DCR基本培养基+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。
[0018]进一步地，步骤5)中，枝条扦插前在3
‰
的IAA溶液中浸泡2min。
[0019]进一步地，步骤5)中，扦插基质为泥炭土和珍珠岩混合而成(体积比：2∶1)。
[0020]进一步地，步骤2)～5)的培养条件具体为：组培时培养温度为25℃，光照采用白炽灯光源，光照时间16h/d，光强为260
±
30μmol
·
m
‑2·
s
‑1，空气相对湿度42～43％；扦插培养时将空气相对湿度调整为70～80％，其余条件同组培。
[0021]相比于现有技术，本专利技术的有益效果为：
[0022]相比于现有技术，本专利技术的组培与扦插结合的落羽杉快繁方法，所用的外植体材料为落羽杉的嫩叶、半木质化茎段和茎尖，其中，半木质化的茎段诱导愈伤组织的效果较好，后期诱导不定芽时繁殖效率高，也不受季节限制。
[0023]针对落羽杉组培生根慢的问题，该方法中我们采用室内扦插生根的方法，操作简单、成本低，约3周即可快速诱导出大量的白色肉质根，大大缩短了生根周期。此外，室内扦插的方法不受季节限制且省去了以往组培苗的炼苗环节，显著提高了成活率。
[0024]经过愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、愈伤组织的诱导不定芽、伸长生长及壮苗处理以及扦插生根培养，即可得到大量落羽杉小苗，有效解决了落羽杉通过愈伤组织途径实现植株再生的问题。建立了落羽杉高效、稳定的组培体系，结合扦插的方式解决了其良种扩繁问题，利于落羽杉优良品种在市场上的推广。
附图说明
[0025]图1是不同基本培养基对茎段愈伤组织增殖的影响；
[0026]图2是4种茎段愈伤组织的状态；
[0027]图3是MS基本培养基附加激素对茎段愈伤组织诱导不定芽的影响；
[0028]图4是WPM基本培养基附加激素对茎段愈伤组织诱导不定芽的影响；
[0029]图5是MLV基本培养基附加激素对茎段愈伤组织诱导不定芽的影响；
[0030]图6是不定芽伸长生长及壮苗后的状态；
[0031]图7是不定芽扦插生根的状态。
具体实施方式
[0032]下面结合具体实施例对本专利技术进一步进行描述。
[0033]从落羽杉优良母树上采取外植体，外植体包括嫩叶、半木质化茎段和茎尖，对外植体进行消毒；用75％乙醇消毒1min，2.5％次氯酸钠消毒8min，并加入适量的吐温，消毒过程中要不断晃动，使消毒液与外植体充分接触，倒去次氯酸钠溶液，用无菌水冲洗3～4次。将无菌的外植体置于干燥的滤纸上，吸去表面的水分，之后将它们接种至愈伤诱导培养基上。培养条件为25℃，空气相对湿度42～43％，光照采用白炽灯光源，光照时间16h/d，光强为260
±
30μmol
·
m
‑2·
s
‑1。
[0034]实施例中所有愈伤组织诱导、增殖及不定芽诱导的培养基组合中，均设置至少30个重复。
[0035]数据统计与分析：采用GraphPad Prism Version 8.0(GraphPad software，La Jolla，CA，USA)对试验数据进行统计处理并制表作图，图表中所示数据均为重复测定的平均值和标准误差。
[0036][0037][0038][0039]实施例1：一种组培与扦插结合的落羽杉快繁方法，包括以下步骤：
[0040](1)愈伤组织诱导：
[0041]愈伤组织诱导的培养基配方为：基本培养基+TDZ 0.3mg/L+6
‑
BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+VC 5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L；培养条件为25℃，空气相对湿度42～43％，光照采用白炽灯光源，光照时间16h/d，光强为260
±
30μmol
·
m
‑2·
s
‑1。
[0042]从表1中可以发现，嫩叶在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种组培与扦插结合的落羽杉快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：1)从落羽杉优良母树上采取外植体，外植体为嫩叶、半木质化茎段或茎尖，对外植体进行消毒；2)将步骤1)所得无菌外植体接入愈伤组织诱导培养基中，诱导出愈伤组织；3)将步骤2)所得愈伤组织接种至增殖培养基中进行愈伤组织增殖培养；4)将增殖后的愈伤组织接种至不定芽诱导培养基中，诱导出不定芽；5)对不定芽进行伸长生长及壮苗处理后，将其切下进行扦插生根培养，获得落羽杉小苗。2.根据权利要求1所述的落羽杉组培与扦插结合的快繁方法，其特征在于：步骤1)中，所述外植体为半木质化的茎段，茎段切口为45℃斜角。3.根据权利要求1所述的组培与扦插结合的落羽杉快繁方法，其特征在于：步骤2)中，所述愈伤组织诱导培养基为MS+TDZ 0.3mg/L+6
‑
BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+VC 5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。4.根据权利要求1所述的组培与扦插结合的落羽杉快繁方法，其特征在于：步骤3)中，所述愈伤组织增殖培养基为MS+NAA 0.1～0.3mg/L+6
‑
BA 0.2mg/L+TDZ 0.2～0.3mg/L+VC 5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。5.根据权利要求1所述的组培与扦插结合的落羽杉快繁方法，其特征在于：步骤3)中，愈伤组...

【专利技术属性】
技术研发人员：华建峰，张娅，郭金博，宣磊，陈婷婷，殷云龙，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：