用于HLA-DPB*0202基因检测的引物组、试剂盒及其方法技术

本申请公开了一种用于HLA

【技术实现步骤摘要】
用于HLA
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DPB*0202基因检测的引物组、试剂盒及其方法


[0001]本申请涉及生物医药工程的
，尤其是涉及一种用于HLA
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DPB*0202基因检测的引物组、试剂盒及其方法。

技术介绍

[0002]格雷夫斯病(GD)又称为毒性弥漫性甲状腺肿，是一种自身免疫紊乱的免疫学疾病，其临床表现不仅限于甲状腺，而是一种多系统的综合征，包括高代谢症候群、弥漫性甲状腺肿、眼征、皮损以及甲状腺肢端病；且GD在家族中可见到先后发病的病例，其与遗传基因有密切的联系，科学家推测GD可能是一种受到人类白细胞抗原(HLA)基因调控的疾病。HLA是人类的主要组织相容性复合体(MHC)的表达产物，具有224个基因座，并且已经发现了2000多个等位基因，是人类迄今为止最复杂的基因群，根据分布和功能可将其分为Ⅰ类抗原和Ⅱ抗原。其中，II类抗原主要分布在抗原呈递细胞、胸腺上皮细胞和活化的T细胞表面，由6号染色体上的HLA
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D区编码，其包括HLA
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DPB、HLA
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DQB以及HLA
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DRB等类型，是由一条被糖基化的α重链和β轻链非共价结合而成的异源二聚体糖蛋白。根据II类抗原的位置，可将其分为胞外区、跨膜区以及胞内区；其中，胞外区可进一步分为肽结合区以及多肽性区，II类抗原的抗原多态性取决于多肽性区上的β1结构域。II类抗原的肽结合区和多态性区协作配合结合、提呈外源性抗原肽给CD4
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T细胞，具有调节T细胞分化的功能。
[0003]据研究表明，GD患者体内出现异常的自身免疫反应，B细胞分泌甲状腺刺激性免疫球蛋白(TSAb)，TSAb与甲状腺滤泡细胞结合诱导甲状腺激素不受控制地分泌，使得炎症细胞浸润到甲状腺组织，导致甲状腺炎症的发生；同时，患者体内还会分泌抑制性促甲状腺激素结合免疫球蛋白(TBII)，TBII对B细胞分泌TSAb起负反馈调节作用。因此在一般的GD患者体内可检测到TSAb以及TBII阳性，但是在最近的研究中发现具有HLA
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A*0201、HLA
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A*0207以及HLA
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DPB*0202等基因的患者血液中呈TBII阴性，且TBII呈阴性的患者在临床治疗中的治疗效果比呈阳性的患者的效果好，依据TBII可将GD分为典型性和非典型性，借助对HLA
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A*0201、HLA
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A*0207以及HLA
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DPB*0202等基因的检测可实现对GD的分类。
[0004]基因扩增是分子生物学领域的基本研究手段之一，传统的聚合酶链式反应(PCR)以及在基础上发展起来的Sanger测序法、荧光PCR等技术能够实现对生物体核酸的有效扩增与检测。
[0005]目前，对于HLA
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DPB*0202基因的检测一般采用Sanger测序法，Sanger测序法利用因双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)缺乏PCR延伸所需的3
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OH导致链延伸终止的原理。但是Sanger测序法通过进行多次扩增得到多段DNA片段，且需要对扩增得到的DNA进行电泳，操作较为繁琐，检测所需要的时间长。

技术实现思路

[0006]为了对HLA
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DBP*0202基因进行快速检测，缩短检测时间，本申请提供一种用于HLA
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DPB*0202基因检测的引物组、试剂盒及其方法。
[0007]第一方面，本申请提供的一种用于HLA
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DPB*0202基因LAMP检测的引物组采用如下的技术方案：一种用于HLA
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DPB*0202基因检测的引物组，包括前向外引物F3、前向内引物FIP、后向外引物B3以及后向内引物BIP；所述前向外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述前向内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述后向外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述后向内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。
[0008]第二方面，本申请提供的试剂盒采用如下的技术方案：一种试剂盒，包括上述用于HLA
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DPB*0202基因检测的引物组。
[0009]优选的，还包括dNTP、Bst DNA聚合酶、甜菜碱以及无核酸酶水。
[0010]通过采用上述技术方案，进行检测时，使用含有引物组、dNTP、Bst DNA聚合酶、甜菜碱以及无核酸酶水的试剂盒，若待测样品中含有HLA
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DPB*0202基因，便可实现对HLA
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DPB*0202基因的特异性扩增；并且试剂盒中含有四种引物，对于HLA
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DPB*0202基因的扩增特异性更强，提高了检测的准确性。
[0011]优选的，还包括指示剂。
[0012]优选的，所述指示剂为可溶性镁盐。
[0013]通过采用上述技术方案，使用上述试剂盒进行检测时，若样品中含有HLA
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DPB*0202基因会发生扩增反应，在扩增反应的过程中会产生副产物焦磷酸离子，焦磷酸离子会与试剂盒中的可溶性镁盐反应生成焦磷酸镁沉淀，通过判断是否有白色沉淀生成，便可判断待测样品中是否含有HLA
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DPB*0202基因，使得不需要再借助其他仪器对检测结果进行判定，简化检测操作，提高检测效率。
[0014]优选的，所述指示剂为染料。
[0015]优选的，所述染料独立选自羟基萘酚蓝指示染料以及钙黄绿素指示染料。
[0016]通过采用上述技术方案，扩增体系中存在扩增产物时，染料会有特异性显色反应，通过体系对体系颜色的判断，便可判断待测样品中是否含有HLA
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DPB*0202基因，便于检测结果的判定；当染料为羟基萘酚蓝指示染料时，待测样品中含有HLA
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DPB*0202基因时，反应体系发生特异性扩增呈天蓝色，反之则为紫罗兰色；当染料为钙黄绿素指示染料时，待测样品中呈HLA
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DPB*0202阳性时，反应体系发生特异性扩增呈绿色，反之则为橘黄色。
[0017]优选的，还包括阳性对照品和阴性对照品。
[0018]优选的，所述阳性对照品为人工合成的含有HLA
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DPB*0202等位基因的DNA片段，所述DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的，所述阴性对照品为无核酸酶水。
[0019]通过采用上述技术方案，在试剂盒中加入阳性对照品和阴性对照品，含有人工合成的HLA
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DPB*0202等位基因的DNA片段的阳性对照品可排除因假阴性导致检测结果出现错误的情况，而阴性对照品无核酸酶水用来判断扩增体系中是否存在污染导致假阳性的情况，阳性对照品和阴性对照品的配合使用，可提高HLA
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DPB*0202基因检测的准确性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于HLA
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DPB*0202基因检测的引物组，其特征在于，包括前向外引物F3、前向内引物FIP、后向外引物B3以及后向内引物BIP；所述前向外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述前向内引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述后向外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述后向内引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。2.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的用于HLA
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DPB*0202基因检测的引物组。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括dNTP、Bst DNA聚合酶、甜菜碱以及无核酸酶水。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括指示剂。5.根据权利要求4...

【专利技术属性】
技术研发人员：林祥华，林泽曦，
申请(专利权)人：厦门倍博特医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：