一种可调控烟叶钾含量的NtLHY1基因及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，涉及调控烟叶钾含量的基因，具体涉及一种可调控烟叶钾含量的NtLHY1基因及其应用。本发明专利技术提供一种调控烟叶钾含量的NtLHY1基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。还提供一种基于所述调控烟叶钾含量的NtLHY1基因的应用，通过CRISPR/cas9敲除该基因后烟叶钾含量与对照相比显著降低，可见NtLHY1基因参与了烟草钾含量的调控。本发明专利技术明确了NtLHY1基因对烟叶钾含量的调控功能，为解析烟草钾离子含量的分子调控提机制供了新的证据，也为通过基因表达调控培育钾含量提高的烟草提供新的思路。的烟草提供新的思路。

【技术实现步骤摘要】
一种可调控烟叶钾含量的NtLHY1基因及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，涉及调控烟叶钾含量的基因，具体涉及一种可调控烟叶钾含量的NtLHY1基因及其应用。

技术介绍

[0002]烟草是我国重要的叶用性经济作物，烟叶钾含量的高低严重影响着烟叶经济价值的大小。烟叶中的钾离子参与烟叶的生理生化反应，与烟株的抗逆性关系密切，对于烟草农业来说，它还影响着烟叶的内在品质和工业可用性，因此通常把钾含量作为衡量烟叶品质的重要指标。钾对烟叶成熟度、香吃味、燃烧性、安全性等方面均有重要影响，烟叶钾含量提高可以改善烟叶的组织结构，使烟叶结构细腻，而且还能提高烟叶外观色泽，使烟叶呈深橘黄色，香气足，吃味好，富有弹性和韧性，填充性增强；另外钾还可以增强烟叶糖类、色素类、芳香类物质的合成积累，因而钾含量越高，往往烟叶的质量越优。
[0003]针对我国烟叶钾含量偏低问题，传统的栽培施肥措施效果并不理想。有研究认为：高钾施用量增加了上部叶中的烟碱含量，如文献胡国松,王志彬,王凌,韩锦峰,穆琳.烤烟烟碱累积特点及部分营养元素对烟碱含量的影响[J].河本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可调控烟叶钾含量的NtLHY1基因，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。2.一种可调控烟叶钾含量的蛋白，其特征在于，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示；或根据权利要求1所述的NtLHY1基因编码为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的蛋白。3.一种可调控烟叶钾含量的NtLHY1基因的应用，其特征在于，使用权利要求1所述的NtLHY1基因或权利要求2所述的蛋白在调控烟草钾离子含量中的应用。4.一种利用CRISPR/cas9技术敲除权利要求1所述NtLHY1基因编辑后的烟草，或通过过表达权利要求1所述NtLHY1基因编辑后的烟草。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，利用CRISPR/cas9技术敲除所述NtLHY1基因并测量编辑后的烟草钾含量得应用，包括以下过程：(1)根据所述NtLHY1基因的基因组序列设计靶位点为：sgRNA:CGTAGCAGCTCCCTCATCAC；(2)根据步骤(1)中的靶位点设计引物，得到靶位点引物，所述靶位点引物的序列为：P1：ATTGCGTAGCAGCTCCCTCATCAC；P2：AAACGTGATGAGGGAGCTGCTACG；(3)根据步骤(1)中的所述靶位点，在靶位点两侧设计编辑材料的检测引物，得到检测引物，所述检测引物序列为：NtLHY1
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SdF：TTCCATAGAGACACCCAGCTCC；NtLHY1
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SdR：TTGCAAAGACTTTCCTGGGGAC；(4)制备dsDNA：根据步骤(2)中的所述的靶位点引物通过退火形成互补DNAoligo，得到dsDNA；(5)酶切pHSE401载体得到酶切产物，将所述酶切产物与步骤(4)中得到的dsDNA进行连接，得到连接产物；(6)测序验证：将步骤(5)中得到的连接产物转化为大肠杆菌，筛选阳性克隆并进行菌落PCR检测；经PCR检测验证正确的阳性克隆菌株培养扩增后进一步进行测序分析，得到所述CRISPR/cas9载体；(7)获得编辑材料：利用叶盘法将所述CRISPR/cas9载体转化野生型烟草，利用步骤(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦芳婵，高玉龙，王丙武，赵璐，隋学艺，宋中邦，孔光辉，张谊寒，吴兴富，李永平，
申请(专利权)人：云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：