一种蜜环菌狭义种的生产方法技术

本发明专利技术公开一种蜜环菌狭义种的生产方法，属于蜜环菌生产技术领域。所述蜜环菌狭义种的生产方法在菌种来源明确的情况下，筛选出低成本且高效的Ⅱ级菌种培养和Ⅲ级菌种培养培养基，其中Ⅱ级菌种培养的培养基配方每升中包含：玉米粉15

【技术实现步骤摘要】
一种蜜环菌狭义种的生产方法


[0001]本专利技术涉及蜜环菌生产
，尤其涉及一种蜜环菌狭义种的生产方法。

技术介绍

[0002]蜜环菌隶属担子菌亚门(Basidomycotina)，层菌纲(Hymenomycetes)，伞菌目(Agaricales)，口蘑科(Tricholomataceae)，兼性寄生真菌。在全球范围内，蜜环菌在欧美报道有17种，非洲5种，澳洲5种，亚洲19种，我国分布有15种(王汉臣2010；赵俊2008；2005；2000；孙立夫2003；秦国夫2000；1999；贺伟1996)。
[0003]蜜环菌(Armillaria species)是一种药食兼用菌，也是高度退化的兰科中药材天麻(Gastrodia elata Bl.)生长发育的第一营养来源，其质量好坏影响着天麻的品质和产量。目前国内发现的蜜环菌生物种中，并非所有菌种都适合天麻栽培，而蜜环菌的种类影响着天麻的产量和品质。多个研究表明高卢蜜环菌菌索茂密、粗壮，生长迅速，寄生性不强，有利于天麻的栽培生产(Kim HJ 1997；Cha JY 1995a)。不同种类的蜜环菌对天麻产量和天麻素含量都有较大的影响(陈明义2004；孙士青2003；王秋颖2001)。综合蜜环菌报道来看，与天麻共生的蜜环菌有高卢蜜环菌(长白山，云南昭通，贵州)、头柄蜜环菌(贵州)、北方蜜环菌、奥氏蜜环菌(日本)、北海道蜜环菌(日本)、芥黄蜜环菌(云南昭通)、单生蜜环菌(日本)、假蜜环菌、A.nabsnona和蜜环菌狭义种(贵州，云南昭通)(黄万兵2014；彭述敏2011；Sekizaki H 2008；Cha J Y 1995a；1995b)。Guo et al.(2016)认为可用于天麻栽培的蜜环菌分为7个支系，分别为支系1、支系2(CBS O)、支系3(CBS L)、A.nabsnona、Nag.E、头柄蜜环菌和支系6，其中Nag.E为首次发现可与天麻共生。
[0004]由于市场上使用的蜜环菌种类不明，生产方法不当，质量参差不齐，生产中也常遇到蜜环菌菌种变异、退化以及种类使用不当造成天麻产量下降或空窝等问题。因此，建立蜜环菌菌种明确并配套适宜生产方法，是提高天麻产量和质量的可行方法之一。
[0005]蜜环菌生产方法包含：Ⅰ级菌种培养；Ⅱ级菌种(原种)培养和Ⅲ级菌种(生产种)培养，详见陈顺方(2009)。但研究发现：不同菌株对不同培养基表现出不同喜好。例如：宋淼等(2012)以葡萄糖、蔗糖、玉米淀粉、可溶性淀粉为碳源，液体培养蜜环菌，发现玉米淀粉为最佳碳源。贺建超等(2018)通过添加葡萄糖、麦芽糊精、红薯淀粉、马铃薯淀粉、可溶性淀粉等碳源培养蜜环菌时发现，最佳碳源为麦芽糊精。彭述敏(2010)对贵州两株蜜环菌最适的生长条件进行研究发现，葡萄糖为最佳碳源，酵母膏和蛋白胨为最佳氮源，最适无机盐为KH2PO4。而闫军等(2016)试验同样表明培养蜜环菌时，最佳碳源是葡萄糖，最佳氮源是蛋白胨。闫军、彭述敏试验表明蛋白胨是蜜环菌最佳氮源；梁艳等(2018)研究发现，培养基中添加牛肉膏时蜜环菌萌发时间最短。而且研究发现，Ⅱ级菌种(原种)培养对Ⅲ级菌种(生产种)培养有显著影响，例如姜月华等(1996)研究发现液体培养所得二级蜜环菌接种到菌棒或菌枝上比接种固体培养所得二级蜜环菌，培养三级菌种菌材的时间要短。因此，开发成本低、生产效率高，且质量稳定的蜜环菌生产方法是当前亟需解决的问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术概述
[0007]本专利技术的目的是提供一种蜜环菌狭义种的生产方法。
[0008]本专利技术所述蜜环菌狭义种为拉丁名为A.mellea(Vahl:Fr.)P.Kumm.
[0009]所述蜜环菌狭义种的生产方法包含：Ⅰ级菌种培养；Ⅱ级菌种(原种)培养和Ⅲ级菌种(生产种)培养。
[0010]所述蜜环菌狭义种的生产方法中，蜜环菌狭义种培养条件为22
‑
28℃，全黑暗。
[0011]所述蜜环菌狭义种的生产方法中，Ⅱ级菌种(原种)培养的培养基配方每升中包含：玉米粉15
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25g，酵母粉8
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12g，磷酸二氢钾1
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3g，余量为水。
[0012]所述蜜环菌狭义种的生产方法中，一种Ⅲ级菌种(生产种)培养的培养基配方按质量百分比计算包括有：栎木枝条35
‑
45％，马铃薯汁55
‑
65％；
[0013]其中，所述马铃薯汁由去皮马铃薯200g/L水煮沸制成。
[0014]所述蜜环菌狭义种的生产方法中，另一种Ⅲ级菌种(生产种)培养的培养基配方按质量百分比计算包括有：栎木木屑45
‑
55％，棉籽壳25
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35％，麸皮15
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20％，石膏0.5
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1.5％，生石灰0.2
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0.7％，蔗糖0.3
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0.5％，磷酸二氢钾0.05
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0.15％；其中所述培养基配方中料水比1:1.4kg/L。
[0015]本专利技术详述
[0016]本专利技术所述蜜环菌狭义种，通过rDNA
‑
ITS序列分析，所述蜜环菌狭义种与Armillaria mellea FJ501582.1不仅有99％覆盖率和99.75％以上的一致性，同时在进化树上有99％以上的可信度聚为一类。
[0017]所述蜜环菌狭义种的生产方法包含：Ⅰ级菌种培养；Ⅱ级菌种(原种)培养和Ⅲ级菌种(生产种)培养。
[0018]所述蜜环菌狭义种的生产方法中，蜜环菌培养条件为25℃，全黑暗。
[0019]所述蜜环菌狭义种的生产方法中，Ⅱ级菌种(原种)培养可以采用固体培养基、半固体培养基或液体培养基。
[0020]优选为，所述Ⅱ级菌种(原种)培养采用液体培养基
[0021]所述液体培养基配方每升中包含：玉米粉15
‑
25g，酵母粉8
‑
12g，磷酸二氢钾1
‑
3g，余量为水。
[0022]进一步优选的，所述液体培养基配方为每升中包含：玉米粉20g，酵母粉10g，KH2PO
4 2g，余量为水。
[0023]所述蜜环菌狭义种的生产方法中，Ⅲ级菌种(生产种)培养采用袋料培养基和/或枝条培养基。
[0024]所述Ⅲ级菌种(生产种)培养中袋料和/或枝条培养基配方按质量百分比计算包括有：栎木枝条35
‑
45％，马铃薯汁55
‑
65％；
[0025]其中，所述马铃薯汁由去皮马铃薯200g/L水煮沸制成。
[0026]优选的，所述Ⅲ级菌种(生产种)培养中袋料和/或枝条培养基配方由按质量百分比计算包括：栎木枝条40％，马铃薯汁60％；
[0027]其中一种实施方式为，650mL细口组培瓶，每瓶210g枝条，315mL马铃薯汁。
[0028]所述Ⅲ级菌种(生产种)培养中袋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蜜环菌狭义种的生产方法，包含：Ⅰ级菌种培养；Ⅱ级菌种培养和Ⅲ级菌种(生产种)培养,其特征在于，所述Ⅱ级菌种培养的培养基配方每升中包含：玉米粉15
‑
25g，酵母粉8
‑
12g，磷酸二氢钾1
‑
3g，余量为水。2.根据权利要求1所述蜜环菌狭义种的生产方法，其特征在于所述Ⅲ级菌种培养的培养基配方按质量百分比计算包括有：栎木枝条35
‑
45％，马铃薯汁55
‑
65％。3.根据权利要求1所述蜜环菌狭义种的生产方法，其特征在于所述Ⅲ级菌种培养的培养基配方按质量百分比计算包括有：木屑45
‑
55％、棉籽壳25
‑
35％、麸皮15
‑
20％、石膏0.5
‑
1.5％、生石灰0.2
‑
0.7％、蔗糖0.3
‑
0.5％、磷酸二氢钾0.05
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0.15％。4.根据权利要求1所述蜜环菌狭义种的生产方法，其特征在于通过rDNA
‑
ITS序列分析，所述蜜环菌狭义种与Armillaria mellea FJ501582.1不仅有99％覆盖率和99.75％以上的一致性，同时在进化树上有99％的可信度聚为一类。5.根据权利要求1所述蜜环菌狭义种的生产方法，其特征在于所述Ⅲ级菌种(生产种)培养采用袋料培养基和/或枝条培养基。6.根据权利要求5所述蜜环菌狭义种的生产方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：张跃进，刘玲，陆博，孙建华，吴娜，李小虎，刘彦铎，
申请(专利权)人：柞水县科技开发中心陕西汉王略阳中药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：