一种重组枯草芽孢杆菌高密度发酵生产DPE的方法技术

本发明专利技术公开了一种重组枯草芽孢杆菌高密度发酵生产DPE的方法，属于生物工程和发酵工程技术领域。本发明专利技术公开的一种重组枯草芽孢杆菌高密度发酵生产DPE的方法，以重组枯草芽孢杆菌为出发菌株，建立OD、酶活反馈调控发酵机制，经种子培养后转入发酵罐进行枯草杆菌高密度发酵生产D

【技术实现步骤摘要】
一种重组枯草芽孢杆菌高密度发酵生产DPE的方法


[0001]本专利技术涉及生物工程和发酵工程
，更具体的说是涉及一种重组枯草芽孢杆菌高密度发酵生产DPE的方法。

技术介绍

[0002]D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-psicose3-epimerase，简称DPE)是目前利用生物法将D-果糖转化到D-阿洛酮糖最有效的酶。
[0003]现有技术中，D-阿洛酮糖3-差向异构酶的生产主要来自DPE基因的大肠杆菌的外源表达，对D-阿洛酮糖3-差向异构酶家族酶的研究大多数以大肠杆菌为表达宿主；而枯草芽孢杆菌作为一种传统的工业生产菌株，具有高效的蛋白质分泌能力，是研究外源究蛋白表达和分泌的良好系统，同时它也是一种食品级微生物。重组枯草芽孢杆菌产D-阿洛酮糖3-差向异构酶，菌OD
600
＝10-15，酶活在15-20U/mL；且重组枯草芽孢杆菌，发酵周期长、菌OD低，蛋白表达量低。
[0004]因此，提供一种重组枯草芽孢杆菌高密度发酵生产DPE的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
专利技术内容
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组枯草芽孢杆菌高密度发酵生产DPE的方法，第一步，培养重组枯草芽孢杆菌，获得种子液；第二步，将第一步获得的种子液接种到发酵罐营养液中；第三步，建立OD、酶活反馈调控发酵机制，制得发酵液；第四步，将第三步所得发酵液进行离心、离交，得到D-阿洛酮糖3-差向异构酶液体；其特征在于，第三步，建立OD、酶活反馈调控发酵机制：
①
产酶前阶段：当发酵4h时，菌OD
600
＝14-15，补料速率为10-11ml/L/h；发酵4-8h期间，根据每4h菌OD
600
增量调节补料速率：OD
600
增量在10-15，调节流加补料速率15-17ml/L/h；OD
600
增量大于15，补料速率降低，调至12-14ml/L/h；OD
600
增量小于10，增加补料速率，调至18-20ml/L/h；
②
产酶阶段：发酵8h至发酵32h为产酶期，根据每8h菌OD
600
增量与酶活增量来调节补料速率，当酶活增量数值是OD
600
增量的2.5-3.0倍时，流加补料速率6-8ml/L/h；大于3.0倍时，流加补料速率3-5ml/L/h；小于2.5倍时，流加补料速率10-12ml/L/h；此阶段结束时，菌OD
600
＝90-95，酶活为190-195U/mL；
③
产酶末期：发酵32h至36h产酶量减少，每2h菌OD
600
增量5-10，酶活增量8-10U/mL，流加补料速率3-5ml/L/h；发酵结束，菌OD
600
＝100-110，酶活为200-210U/mL；将250g葡萄糖、5g七水硫酸镁、10mL PTM1微量元素混合，用水定容至...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ七四专利代理机构，
申请(专利权)人：山东福洋生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：