一种重组表达载体、基因工程菌及菌的培养方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种腈水合酶基因表达的基因工程菌，具体涉及一种重组表达载体、基因工程菌及菌的培养方法和应用，重组表达载体含有一段腈水合酶基因，该腈水合酶基因序列如SEQ ID NO.1所示；基因工程菌为携带该重组表达载体的宿主微生物；培养方法为将宿主微生物在LB培养基中培养得到种子液，之后将种子液接种到发酵培养基中进行培养，得到基因工程菌。与现有技术相比，本发明专利技术的腈水合酶基因能够在工程菌中实现高效表达并且其酶活性极好，经测定比酶活可达50U/mg以上，在优选条件下可以达到100U/mg，因而催化合成烟酰胺效率高，转化率可达99％以上，生产效率达到720g/(L

【技术实现步骤摘要】
一种重组表达载体、基因工程菌及菌的培养方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种腈水合酶基因表达的基因工程菌，具体涉及一种重组表达载体、基因工程菌及菌的培养方法和应用。

技术介绍

[0002]烟酰胺又称尼克酰胺，维生素B3，英文Nicotinamide，是烟酸的酰胺化合物，为白色的结晶性粉末，无臭或几乎无臭，味苦，略有引湿性。易溶于水、乙醇和甘油。临床上主要用于防治糙皮病、口炎、舌炎、病态窦房结综合征、房室传导阻滞等问题。工业上主要作为饲料的营养性添加剂，也用于食品、医药、染料的中间体，同时用作电镀液的添加剂和生化试剂。此外，烟酰胺在皮肤科相关产业也有较多应用，是近年来护肤和美白产品的热门成分。
[0003]工业上烟酰胺主要是以吡啶类化合物为原料生产的，世界上烟酰胺的生产主要集中在西欧和美国，日本也有少量生产。目前生产烟酰胺的工艺分为两大类，一种是化学合成法，另外一种是生物合成法。化学法生产工艺比较成熟，但该方法所用的原料和催化剂价格昂贵，消耗量大，加之其生产成本高，产品收率低，对环境的污染很大，因此需要寻找一种能够克服上述缺陷的方法进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组表达载体，其特征在于，所述的重组表达载体含有一段腈水合酶基因，该腈水合酶基因序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的一种重组表达载体，其特征在于，所述的腈水合酶基因连接在pET24a(+)质粒的限制性酶切位点上。3.一种基因工程菌，其特征在于，所述的基因工程菌为携带如权利要求1或2所述的重组表达载体的宿主微生物。4.根据权利要求3所述的一种基因工程菌，其特征在于，所述的宿主微生物为大肠埃希氏菌BL21(DE3)。5.一种培养如权利要求3或4的基因工程菌的培养方法，其特征在于，将宿主微生物在LB培养基中培养得到种子液，之后将种子液接种到发酵培养基中进行培养，得到所述的基因工程菌。6.根据权利要求5所述的一种基因工程菌的培养方法，其特征在于，所述的LB培养基包括10g/L胰蛋白胨、10g/L酵母提取物、5g/L NaCl和50μg/mL卡那霉素，所述的LB培养基初始pH为7....

【专利技术属性】
技术研发人员：徐毅，王自稳，吴小梅，马宝娣，高峰，
申请(专利权)人：上海应用技术大学，
类型：发明
国别省市：