【技术实现步骤摘要】
酵母细胞线粒体移植乳腺肿瘤细胞的构建培养方法
[0001]本专利技术属于工程细胞的构建和培养领域,具体涉及一种酵母细胞线粒体移植乳腺肿瘤细胞的构建培养方法。
技术介绍
[0002]随着肿瘤疾病在人类疾病当中的发病率以及致死率的日益升高,攻克癌症这一世界性难题,已经困扰了人类数十年,其中,乳腺肿瘤细胞尤为突出,其在女性当中的发病率呈现逐年升高,发病年龄逐年降低的态势,世界各国科研工作者和医学工作者,都在为研制新型抗癌药物夜以继日的工作。随着每一种新型药物的研发,其先导一定是以相对应的体外肿瘤细胞作为试验对象,所以,能够在更短的时间内,获得试验所要求的肿瘤细胞数量至关重要,研制过程每缩短一秒钟,就意味着可以多挽救一个生命。
[0003]酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),又称面包酵母或者出芽酵母。酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母,用于制作面包和馒头等食品及酿酒。酿酒酵母的细胞为球形或者卵形,直径5
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10μm。其繁殖的方法为出芽生殖。酿酒酵母与同为真核生物的动物和植物细胞具有很多相同的结构,又容易培养,酵母被用作研究真核生物的模式生物。酿酒酵母被认为是最具潜力的大规模生产菌种。 酿酒酵母是第一个完成基因组测序的真核生物,测序工作于1996年完成。酿酒酵母具有生长周期短、发酵能力强、容易进行大规模培养以及含有多种蛋白质、氨基酸、维生素、生物活性物质等丰富的营养成分等优点,一直是基础及应用研究的主要对象,在食品、医药等领域应用广泛。
[0004]线粒体(mito ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种酵母细胞线粒体移植乳腺肿瘤细胞的构建培养方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将平板培养基上的酿酒酵母菌接种于液体培养基中,放置于摇床培养至对数生长期,得酿酒酵母细胞;(2)将液体培养基倒入离心管中,经多步差速离心法,获得酵母细胞线粒体粗提物;(3)将酵母细胞线粒体粗提物置于超速离心管中,利用蔗糖密度梯度离心法,获取纯化的酵母细胞线粒体;(4)将纯化的酵母细胞线粒体以190μg/ml的浓度添加至96孔板培养的MDA
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MB
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231乳腺肿瘤细胞的培养液中,共孵育培养12小时,即得到含有酵母细胞线粒体的乳腺肿瘤细胞。2.根据权利要求1所述的构建培养方法,其特征在于,步骤(1)中,所述酿酒酵母细胞具体的培养方法为:1)称取2.5%葡糖糖、2.5%蛋白胨、1%酵母浸粉,用蒸馏水溶解,定容;2)将培养基分装至锥形瓶中,经115℃高压灭菌15
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20分钟,按2
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10%的接种量将酿酒酵母菌接入培养基中,30
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35℃摇床培养36
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48小时即可。3.根据权利要求1所述的构建培养方法,其特征在于,步骤(2)中,所述酵母细胞线粒体粗提物的具体获取步骤为:1)将液体培养基4000g
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5min离心,收集细胞;2)采用蒸馏水重悬细胞,洗去细胞表面的培养基,重复一次;3)称量细胞重量,按照2.5ml/g细胞加缓冲液A重悬细胞,30
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35℃振摇20
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30分钟,而后4000g
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5min离心收集细胞;4)将收集的细胞用缓冲液重悬,将细胞洗两次;5)将每克细胞(湿重)中加入35mg蜗牛酶,并按照4ml/g加入缓冲液B,在37℃保温1
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2h,获得原生质体,然后10000g
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10min离心,收集沉淀;6)加入与原生质体体积相等的玻璃珠,并按照5ml/g加入缓冲液C,在旋涡震荡仪上破碎细胞,而后1500g
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5min离心,收集上清液,将沉淀重复破碎离心一次,合并两次的上清液;7)将上清液4000g
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5min离心,收集沉淀...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨革,刘璐,车程川,刘金锋,巩志金,
申请(专利权)人:曲阜师范大学,
类型:发明
国别省市:
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