一种人芽囊原虫染色标本的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种人芽囊原虫染色标本的制备方法及其应用，该方法包括：将检测样品在检测基材表面推成薄片，在70

【技术实现步骤摘要】
一种人芽囊原虫染色标本的制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及医学检验领域，具体涉及一种人芽囊原虫染色标本的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]人芽囊原虫是一种寄生在人和动物肠道的单细胞原生生物，呈世界性分布。人芽囊原虫可侵入肠粘膜上皮。临床表现轻重不一，部分有合并感染或者免疫力受损的人芽囊原虫感染者可出现腹痛、腹泻、恶心等消化道与胃肠道反应，严重感染者会出现发热等情况，严重时甚至可能危及生命。
[0003]相关技术中，人芽囊原虫的检出方法主要是生理盐水涂片法、碘液染色法、体外培养法和PCR产物测序法。使用生理盐水涂片法和碘液染色法检测人芽囊原虫时，经验不足的形态检测人员易将人芽囊原虫和白细胞、红细胞和粪渣等其他内容物混淆，因此，存在需要专业人员操作和因容易漏检误检而导致准确性不高等问题。而体外培养法和PCR产物测序法在检出率上相对生理盐水涂片法和碘液染色法高，但使用体外培养法和PCR产物测序法的检测时间长，成本高，需要特定环境和设备，不利于基层医院和临床快速简单检出。
[0004]因此，开发一种有效提高人芽囊原虫检出率且检测时间短、成本低廉的人芽囊原虫检测方法对于人芽囊原虫大规模快速检测具有极为重要的意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种人芽囊原虫染色标本的制备方法及其应用，该方法能够克服常规检测方法中对于染色样本中人芽囊原虫辨识度低的缺陷，从而提高人芽囊原虫的检出准确率，从而可以实现人芽囊原虫的快速现场检测。
[0006]本专利技术的第一个方面，提供一种人芽囊原虫染色标本的制备方法，包括如下步骤：
[0007](1)将检测样品固定于检测基材表面，在70
±
5℃条件下进行干燥处理；
[0008](2)对干燥后的检测样品进行瑞氏染色。
[0009]根据本专利技术的第一个方面，在本专利技术的一些实施方式中，步骤(1)中所述干燥的时间为30～60s。
[0010]根据本专利技术的第一个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述检测基材包括玻片，具体为载玻片。所述固定具体为：将检测样品在载玻片上推成薄片。
[0011]在本专利技术中，70
±
5℃迅速干片使人芽囊原虫膜蛋白迅速固定粘贴于玻片上，保持了人芽囊原虫囊泡完整形态，利于染色镜检识别。
[0012]根据本专利技术的第一个方面，在本专利技术的一些实施方式中，步骤(2)中所述瑞氏染色的步骤为：
[0013]在干燥后的检测样品上滴加瑞氏染色液A液，然后滴加瑞氏染色液B液进行染色，洗去染色液，干燥，即可。
[0014]瑞氏染色液又称瑞氏
‑
吉姆萨染色液，由A液和B液组成。
[0015]瑞氏染色是最常用而又最简单的染色方法。瑞氏试剂是含有酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成的复合染料，对原生质的染色有很好的区别作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，其会与酸性染料伊红结合，染粉红色。细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料亚甲蓝结合后，染紫蓝色或蓝色。中性颗粒呈等电状态，与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色。
[0016]根据本专利技术的第一个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述瑞氏染色液A液与瑞氏染色液B液的体积比为1:3～5。
[0017]根据本专利技术的第一个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述染色的时间为5～10min。
[0018]根据本专利技术的第一个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述检测样品包括粪便样品和实验室培养样品中的任意一种。
[0019]在本专利技术的一些优选实施方式中，所述检测基材为玻片。
[0020]在本专利技术的一些优选实施方式中，所述人芽囊原虫染色标本的具体制备方法为：
[0021](1)使用采集器采集检测样品(在本领域中，常规以粪便样品作为检测人芽囊原虫的检测样品，因此，常规使用粪便采集器采集粪便(约3g))。加入5～8mL生理盐水或者市售粪便稀释液进行混合，以充分溶解或稀释，得到粪便稀释液。
[0022](2)取1～2滴步骤(1)中制得的粪便稀释液，滴加于玻片的一端，另取一干净的玻片(盖玻片)为推片，平稳推至玻片另一端(均匀推成薄片即可)，得到样品玻片。
[0023](3)将步骤(3)中得到的样品玻片在70
±
5℃条件下进行干燥处理(干燥30～60s)，然后将高温干燥后的玻片进行瑞氏染色，即得。
[0024]其中，使用瑞氏染色法进行染色时，使用的瑞氏染色液A液与B液的体积比为1：3～5，染色时间为5～10min。
[0025]本专利技术的第二个方面，提供一套人芽囊原虫检测设备，所述人芽囊原虫检测设备包括干燥装置、染色装置和观测装置。
[0026]根据本专利技术的第二个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述染色装置内装填有瑞氏染色液A和B。
[0027]根据本专利技术的第二个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述染色装置用于对检测样品进行瑞氏染色。
[0028]根据本专利技术的第二个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述观测装置用于染色样品的观测和计数。
[0029]本专利技术的第三个方面，提供本专利技术第一个方面所述的人芽囊原虫染色标本的制备方法在寄生虫检测中的应用。
[0030]根据本专利技术的第三个方面，在本专利技术的一些实施方式中，所述寄生虫为人芽囊原虫。
[0031]本专利技术的有益效果是：
[0032]1.本专利技术中的人芽囊原虫高温快速干片检测法操作简单，对技术人员的操作要求低，检测时间短，检测成本低，可适用于大规模快速检测。
[0033]2.本专利技术中的人芽囊原虫高温快速干片检测法相较于传统检测方法或常规的瑞
氏染色，阳性检出准确率更高，检测更加准确，对于样本内容物情况复杂、检测准确度要求较高的检测具有极好的适用性。
附图说明
[0034]图1为生理盐水涂片法人芽囊原虫的镜检图像，其中，放大倍数为20
×
40；
[0035]图2为碘液染色法的人芽囊原虫镜检图像，其中，放大倍数为20
×
40；
[0036]图3为常规瑞氏染色法中的白细胞染色镜检图像，其中，放大倍数为20
×
100；
[0037]图4为常规瑞氏染色法中的粪便样品人芽囊原虫的镜检图像，其中，放大倍数为20
×
100；
[0038]图5为本专利技术实施例中的人芽囊原虫高温快速干片检测法中的粪便样品的镜检图像，其中，放大倍数为20
×
100
×
1.5。
具体实施方式
[0039]为了使本专利技术的专利技术目的、技术方案及其技术效果更加清晰，以下结合具体实施方式，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本专利技术，并非为了限定本专利技术。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人芽囊原虫染色标本的制备方法，包括如下步骤：(1)将检测样品固定在检测基材表面，在70
±
5℃条件下进行干燥处理；(2)对干燥后的检测样品进行瑞氏染色。2.根据权利要求1所述的人芽囊原虫染色标本的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述干燥的时间为30～60s。3.根据权利要求1所述的人芽囊原虫染色标本的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述瑞氏染色的步骤为：在干燥后的检测样品上滴加瑞氏染色液A液，然后滴加瑞氏染色液B液进行染色，洗去染色液，干燥，即可。4.根据权利要求3所述的人芽囊原虫染色标本的制备方法，其特征在于，所述瑞氏染色液A液与瑞氏染色液B液的体积比为1:3～5。5.根据权利要求3所述的人芽囊原虫染色标本的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小晴，邹小红，王慧婷，李振华，
申请(专利权)人：中山大学附属第八医院深圳福田，
类型：发明
国别省市：