一种发酵生产白喉毒素无毒形式CRM197蛋白菌种的冻干方法技术

本申请涉及生物工程领域，更具体地说，涉及一种发酵生产白喉毒素无毒形式CRM197蛋白菌种的冻干方法，包括以下步骤：S1、将含有冻干保护剂的菌液平铺于冻干不锈钢盘中，将所述冻干不锈钢盘置于真空冷冻干隔板上；S2、升华干燥；S2.1、一阶升华，冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上；S2.2、二阶升华，冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上；S3、解析干燥，冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上，制得CRM197菌种冻干粉；本申请具有提高CRM197菌种冻干粉的冻干后细菌浓度的效果。冻干粉的冻干后细菌浓度的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种发酵生产白喉毒素无毒形式CRM197蛋白菌种的冻干方法


[0001]本申请涉及生物工程领域，更具体地说，涉及一种发酵生产白喉毒素无毒形式CRM197蛋白菌种的冻干方法。

技术介绍

[0002]CRM197是一种将52位的甘氨酸替换为谷氨酸的单一突变的无毒性的白喉毒素突变体(文献1，2)，致使白喉毒素酶活性位点发生改变，从而不能对细胞产生毒性作用，但在抗原性和免疫原性上仍和天然白喉毒素保持一致。CRM197是一种研究明确的蛋白质，作为多糖和半抗原的载体使其具有免疫原性。它被用作一种载体蛋白，用于许多已经被批准的疫苗，比如脑膜炎球菌、乙型流感嗜血杆菌和肺炎球菌感染的结合疫苗。
[0003]基于CRM197蛋白的多种优点，越来越多的企业利用发酵生产白喉毒素无毒形式CRM197蛋白菌种冻干粉为原料生产生物制品。
[0004]但是，目前CRM197蛋白菌种冻干粉的冻干后细菌浓度较低。因此，提高CRM197菌种冻干粉的冻干后细菌浓度是目前亟需解决的问题。

技术实现思路

[0005]为了提高CRM197菌种冻干粉的冻干后细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种发酵生产白喉毒素无毒形式CRM197蛋白的菌种冻干方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、预冻将含有冻干保护剂的菌液平铺于冻干不锈钢盘中，将所述冻干不锈钢盘置于真空冷冻干隔板上，预冻条件为：冷阱温度≤
‑
40℃，预冻温度
‑
40℃，维持2～20h；S2、升华干燥S2.1、一阶升华所述冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上，一阶升华条件为：冷阱温度≤
‑
40℃，真空度0～1000pa，升温速率0.01～5℃/min，升温至
‑
20℃～
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50℃，并维持2～20h；S2.2、二阶升华所述冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上，二阶升华条件为：冷阱温度≤
‑
40℃，真空度0～1000pa，升温速率0.01～5℃/min，升温至
‑
10～
‑
20℃，并维持1～3h；S3、解析干燥所述冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上，解析干燥条件为：冷阱温度≤
‑
40℃，真空度0～100pa，升温速率0.01～5℃/min，升温至10～35℃，并维持2～20h，制得CRM197菌种冻干粉；所述菌液细菌浓度为1
×
106cfu/mL～5
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109cfu/mL。2.根据权利要求1所述的发酵生产白喉毒素无毒形式CRM197蛋白的菌种冻干方法，其特征在于，预冻条件为：冷阱温度≤
ꢀ‑
80℃，预冻温度～70℃，真空度0pa，维持4h。3.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱楠，马伟，
申请(专利权)人：艾美卫信生物药业浙江有限公司，
类型：发明
国别省市：