一种近岸海水中弧菌的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种近岸海水中弧菌的检测方法，包括如下步骤：1)针对弧菌特有基因设计上、下游引物；对阳性对照弧菌进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行电泳检测，将呈现的目的条带切胶回收，进行测序；2)构建标准质粒模板；3)建立Q

【技术实现步骤摘要】
一种近岸海水中弧菌的检测方法


[0001]本专利技术涉及常见菌检测
，特别涉及近岸海水中弧菌的检测方法。

技术介绍

[0002]弧菌(Vibrio.spp)是一种革兰阴性嗜盐菌，主要存在于近海岸的海水、海水沉积物和鱼虾、贝类等海产品中。一方面，食用被弧菌污染的海产品会导致急性肠胃炎、反应性关节炎等疾病，严重时甚至能引起败血症。另一方面，弧菌能够导致扇贝、虾等水产养殖产品患病，引发养殖病害。目前，选择性培养方法检测弧菌耗时长，人力物力消耗大。因此，亟需一种高效率、短时间就可检测到不可培养的弧菌数量的检测方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种高效率、检测时间短的近岸海水中弧菌的检测方法。
[0004]本专利技术的技术方案概述如下：
[0005]一种近岸海水中弧菌的检测方法，包括如下步骤：
[0006]1)针对弧菌特有基因设计SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物；对阳性对照弧菌进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行1％的琼脂糖凝本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种近岸海水中弧菌的检测方法，其特征是包括如下步骤：1)针对弧菌特有基因设计SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物；对阳性对照弧菌进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行1％的琼脂糖凝胶电泳检测，将呈现的目的条带切胶回收，进行测序；2)构建标准质粒模板：将步骤1)切胶回收的DNA片段与PGM-T载体连接后导入大肠杆菌，增菌培养后涂布于含有浓度为50μg/ml氨苄青霉素的LB选择平板上过夜培养；用无菌牙签随机挑取单菌落，在含有浓度为50μg/ml氨苄青霉素的LB液体选择培养基中震荡培养2h，以菌液为模板，以SEQ ID NO.1所示的上游引物和和SEQ ID NO.2所示的下游引物进行PCR筛选阳性克隆，以1％的琼脂糖凝胶电泳检测阳性克隆，将阳性克隆对应的菌液，在含有100μg/mL氨苄青霉素的LB液体选择培养液中过夜培养，提取质粒测序；3)建立Q-PCR定量标准曲线：将步骤2)获得的质粒用核酸含量测定仪测出质粒的浓度，并用在线计算软件：http://cels.uri.edu/gsc/cndna.html计算出质...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪光义，森法昌伊塔文，何艺科，郭嘉懿，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：