一种重组酿酒酵母及提高重组酿酒酵母表面展示葡萄糖脱氢酶的酶活性的方法技术

本发明专利技术提供了一种重组酿酒酵母及提高重组酿酒酵母表面展示葡萄糖脱氢酶的酶活性的方法，属于基因工程技术领域，本发明专利技术以酿酒酵母EBY100作为载体，包含表达葡萄糖脱氢酶的重组质粒；所述重组质粒以pYD1作为原始质粒。本发明专利技术的重组酿酒酵母为表面展示系统，通过锚定蛋白Aga1与Aga2，将葡萄糖脱氢酶携带到重组酿酒酵母的细胞表面上，可不经纯化直接进行全细胞催化。基于构建的重组酿酒酵母表面展示的系统，本发明专利技术提出通过优化诱导表达的温度、pH和半乳糖浓度，提高表面展示葡萄糖脱氢酶的表达量以及提高酶催化效率(K

【技术实现步骤摘要】
一种重组酿酒酵母及提高重组酿酒酵母表面展示葡萄糖脱氢酶的酶活性的方法


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种重组酿酒酵母及提高重组酿酒酵母表面展示葡萄糖脱氢酶的酶活性的方法。

技术介绍

[0002]表面展示技术是通过锚定蛋白的特性，将酶携带到细胞表面上，可不经纯化直接进行全细胞催化。在细胞内到细胞壁这个过程，酶也会发生一定的折叠形变，使得酶催化效率(K
cat
/K
m
)提高了。通常使用的表面展示系统分为噬菌体表面展示系统、细菌表面展示系统和酵母表面展示系统。其中，酵母细胞表面展示表达系统是一种固定化表达异源蛋白质的真核展示系统，即把异源靶蛋白基因序列与特定的载体基因序列融合后导入酵母细胞，利用酿酒酵母细胞内蛋白转运到膜表面的机制(GPI锚定)使靶蛋白定位于酵母细胞表面并进行表达。它利用细胞表面展示技术使外源蛋白固定化于细胞表面，从而生产微生物细胞表面蛋白。
[0003]葡萄糖脱氢酶：是一种广泛存在于生物体内的氧化还原酶，经常用于生物传感器，生物燃料电池等方向，可以特异性的将催化D...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表面展示葡萄糖脱氢酶的重组酿酒酵母，以酿酒酵母EBY100作为载体，包含表达葡萄糖脱氢酶的重组质粒；所述重组质粒以pYD1作为原始质粒。2.根据权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述葡萄糖脱氢酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。3.根据权利要求2所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述葡萄糖脱氢酶编码基因插入在EcoR I和BamHI之间。4.权利要求1～3中任意一项所述重组酿酒酵母在制备葡萄糖脱氢酶中的应用。5.权利要求1～3中任意一项所述重组酿酒酵母的诱导表达方法，包括以下步骤：将所述重组酿酒酵母接种于诱导培...

【专利技术属性】
技术研发人员：敬科举，邓健樑，胡敏，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：