一种用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒及其制备方法，其中生物试剂盒中包括生物胶基质，生物胶基质包括以下组分丙烯酰胺3％wt～10％wt；甲叉双丙烯酰胺0.05％wt～0.5％wt；6

【技术实现步骤摘要】
一种用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及细胞生物试剂盒
，具体涉及到一种用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]越来越多的研究表明，机械应力(Mechanical stress，Ms)在细胞增殖、分化、凋亡、基因表达以及组织生长、功能整合等生理过程和某些病理生理(如心肌肥大、动脉粥样硬化和皮肤扩张、骨折等创伤修复)过程中起着重要的作用。但是应力如何被细胞感受并传递至细胞内，最终导致细胞发生一系列生物学效应的确切响应机制仍处于探索阶段，并未完全阐明。
[0003]人体细胞生长在机体提供的微动力学环境中，机械应力不仅能引起细胞形态，结构变化，还能调控细胞的功能状态，影响细胞的增殖，分化及凋亡，在某些生理和病理过程中起着重要作用。
[0004]细胞机械应力响应的生物学基础和可能机制，指出细胞结构的张力完整性，整合素，第二信使系统，应力反应元件等是细胞机械应力响应的生物学基础，包括细胞膜离子通道(特别是牵拉激活的阳离子选择性通道，SA
‑
cat)，与G蛋白偶联的磷脂酶C通路，细胞内钙离子和细胞骨架等都参与了细胞的力学信号转导，胞外基质—整合素—细胞骨架复合体是主要的力学信号转导途径。
[0005]细胞对不同生长基质的机械力感应对细胞的自身调节具有重要生物学意义，例如细胞表面机械力感应通道Trpv4,Stom3,Stom1和Kcnk4等多种通道感应体内细胞生存的软硬基质。但是目前对于机械力如何调节细胞的自我生物学进程尚缺乏有效简易的体外模拟环境，这一领域尚缺乏很好的生物试剂盒研究工具。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒。
[0007]为达上述目的，本专利技术的一个实施例中提供了一种用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒，包括生物胶基质，生物胶基质包括以下组分：
[0008]丙烯酰胺3％wt～10％wt；甲叉双丙烯酰胺0.05％wt～0.5％wt；
[0009]6‑
丙烯酰氨基己酸30mmol/L～60mmol/L；硫酸铵0.5g/L～2g/L；
[0010]四甲基乙二胺2g/L～8g/L；溶剂为双蒸水。
[0011]本专利技术的另一个实施方案中采用了一种用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒，包括：
[0012]玻璃片；
[0013]包被液盒，用于存储一号包被液和二号包被液；
[0014]生物胶基质盒，用于存储制备生物胶基质的试剂；
[0015]多孔板；
[0016]灌洗液盒，用于存储一号灌洗液和二号灌洗液；
[0017]激活液盒，用于存储一号激活液和二号激活液；
[0018]基质孵育液，用于存储基质孵育液，基质孵育液包括基质包被液和Laminin试剂；
[0019]生物胶基质包括以下组分：
[0020]丙烯酰胺3％wt～10％wt；甲叉双丙烯酰胺0.05％wt～0.5％wt；
[0021]6‑
丙烯酰氨基己酸30mmol/L～60mmol/L；硫酸铵0.5g/L～2g/L；
[0022]四甲基乙二胺2g/L～8g/L；溶剂为双蒸水。
[0023]本专利技术优选的方案中，生物胶基质包括以下组分：
[0024]丙烯酰胺3％wt；甲叉双丙烯酰胺0.1％wt；
[0025]6‑
丙烯酰氨基己酸48mmol/L；硫酸铵1g/L；
[0026]四甲基乙二胺4g/L；溶剂为双蒸水。
[0027]基于上述生物试剂盒，本专利技术还公开了一种用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0028]步骤(1)、将玻璃片浸没在一号包被液中处理若干分钟后取出晾干；然后将玻璃片浸没在二号包被液中处理若干分钟后取出晾干，得到包被玻璃片；
[0029]步骤(2)、制备生物胶基质；
[0030]步骤(3)、将生物胶基质均匀的滴加至包被玻璃片上，然后将未包被玻璃片覆盖在生物胶基质上将其压平，自然晾干至凝固；凝固后揭开未包被玻璃片，生物胶基质黏附在包被玻璃片上；
[0031]步骤(4)、将黏附有生物胶基质的包被玻璃片放置在多孔板的孔中，使用一号灌洗液进行第一次灌洗；
[0032]步骤(5)、倒掉一号灌洗液，然后滴加一号激活液进行第一次激活，第一次激活后倒掉一号激活液，然后滴加二号激活液；
[0033]步骤(6)、倒掉二号激活液，滴加基质孵育液进行孵育；孵育完毕后倒掉基质孵育液，然后使用二号灌洗液进行第二次灌洗，灌洗完毕后倒掉二号灌洗液；然后封装。
[0034]本专利技术优选的方案中，步骤(1)中玻璃片在一号包被液的浸没时间为5min～20min；玻璃片在二号包被液的浸没时间为5min～20min；
[0035]一号包被液为70％乙醇溶液，一号包被液中含有0.1mol/L～0.3mol/L的NaOH；
[0036]二号包被液为95％乙醇溶液，二号包被液中含有亲和硅烷0.5％wt～1.5％wt和冰醋酸3％wt～6wt％。
[0037]本专利技术优选的方案中，步骤(1)中玻璃片在一号包被液的浸没时间为10min；玻璃片在二号包被液的浸没时间为10min；
[0038]一号包被液为70％乙醇溶液，一号包被液中含有0.2ol/L的NaOH；
[0039]二号包被液为95％乙醇溶液，二号包被液中含有亲和硅烷1.2％wt和冰醋酸5％wt。
[0040]本专利技术优选的方案中，生物胶基质由以下原料制备得到：
[0041]丙烯酰胺3％wt～10％wt；甲叉双丙烯酰胺0.05％wt～0.5％wt；
[0042]6‑
丙烯酰氨基己酸30mmol/L～60mmol/L；硫酸铵0.5g/L～2g/L；
[0043]四甲基乙二胺2g/L～8g/L；溶剂为双蒸水；
[0044]将生物胶基质的原料依次加入后混匀即可得到生物胶基质。
[0045]本专利技术优选的方案中，生物胶基质由以下原料制备得到：
[0046]丙烯酰胺3％wt；甲叉双丙烯酰胺0.1％wt；
[0047]6‑
丙烯酰氨基己酸48mmol/L；硫酸铵1g/L；
[0048]四甲基乙二胺4g/L；溶剂为双蒸水。
[0049]本专利技术优选的方案中，一号灌洗液为甲醇；
[0050]二号灌洗液为无血清的DMEM溶液；
[0051]一号激活液的溶剂为双蒸水，含有吗啉乙磺酸10mmol/L和Nacl500mmol/L；
[0052]二号激活液的溶剂为双蒸水，含有吗啉乙磺酸10mmol/L、Nacl500mmol/L、N
‑
羟基丁二酰亚胺0.48mol/L；N
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)
‑
N
’‑
乙基碳二亚胺盐酸盐0.2mol/L。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒，其特征在于，包括生物胶基质，所述生物胶基质包括以下组分：丙烯酰胺3％wt～10％wt；甲叉双丙烯酰胺0.05％wt～0.5％wt；6
‑
丙烯酰氨基己酸30mmol/L～60mmol/L；硫酸铵0.5g/L～2g/L；四甲基乙二胺2g/L～8g/L；溶剂为双蒸水。2.一种用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒，其特征在于，包括：玻璃片；包被液盒，用于存储一号包被液和二号包被液；生物胶基质盒，用于存储制备生物胶基质的试剂；多孔板；灌洗液盒，用于存储一号灌洗液和二号灌洗液；激活液盒，用于存储一号激活液和二号激活液；基质孵育液，用于存储基质孵育液，基质孵育液包括基质包被液和Laminin试剂；所述生物胶基质包括以下组分：丙烯酰胺3％wt～10％wt；甲叉双丙烯酰胺0.05％wt～0.5％wt；6
‑
丙烯酰氨基己酸30mmol/L～60mmol/L；硫酸铵0.5g/L～2g/L；四甲基乙二胺2g/L～8g/L；溶剂为双蒸水。3.如权利要求1或2所述的用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒，其特征在于：所述生物胶基质包括以下组分：丙烯酰胺3％wt；甲叉双丙烯酰胺0.1％wt；6
‑
丙烯酰氨基己酸48mmol/L；硫酸铵1g/L；四甲基乙二胺4g/L；溶剂为双蒸水。4.一种用于研究细胞机械力感应的生物试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)、将玻璃片浸没在一号包被液中处理若干分钟后取出晾干；然后将玻璃片浸没在二号包被液中处理若干分钟后取出晾干，得到包被玻璃片；步骤(2)、制备生物胶基质；步骤(3)、将生物胶基质均匀的滴加至包被玻璃片上，然后将未包被玻璃片覆盖在生物胶基质上将其压平，自然晾干至凝固；凝固后揭开未包被玻璃片，生物胶基质黏附在包被玻璃片上；步骤(4)、将黏附有生物胶基质的包被玻璃片放置在多孔板的孔中，使用一号灌洗液进行第一次灌洗；步骤(5)、倒掉一号灌洗液，然后滴加一号激活液进行第一次激活，第一次激活后倒掉一号激活液，然后滴加二号激活液；步骤(6)、倒掉二号激活液，滴加基质孵育液进行孵育；孵育完毕后倒掉基质孵育液，然后使用二号灌洗液进行第二次灌洗，灌洗完毕后倒掉二号灌洗液；然后封装。5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中玻璃片在一号包被液的浸没时间为5min～20min；玻璃片在二号包被液的浸没时间为5min～20min；所述一号包被液...

【专利技术属性】
技术研发人员：王胜，朱泓瑞，沈慧丹，王嘉欣，
申请(专利权)人：安徽省立医院中国科学技术大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：