一种定量检测生物样本中精神类药物的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种采用UPLC

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测生物样本中精神类药物的试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及精神科药物检测试剂盒
，具体涉及一种定量检测生物样本中精神类药物的试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]抗精神病药物(Antipsychotic drugs)又称强安定药或神经阻滞剂(Neuroleptic)，是一组用于治疗精神分裂症及其它精神病性精神障碍的药物。在通常的治疗剂量并不影响患者的智力和意识，却能有效地控制患者的精神运动兴奋、幻觉、妄想、敌对情绪、思维障碍和异常行为等精神症状。病人通常存在睡眠障碍，常常同时服用镇静安神类药物，为此需要在检测时将二者分离，以获得稳定的抗精神病药物的血药浓度检测值，避免其余临床合并用药的干扰。精神科病人常用的临床治疗药物有：奥氮平、9
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OH利培酮、氯氮平、去甲氯氮平、利培酮、富马酸喹硫平、盐酸氯丙嗪、盐酸曲唑酮、米氮平、氨磺必利、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑，而为了配合治疗，病人通常也会合并使用如阿普唑仑、氯硝西泮、佐匹克隆、艾司唑仑等镇静安眠类药物，如果检测方法种不能实现同时分离此类合并用药，会导致精神科药物浓度定量不准，因此将镇静安眠类药物与抗精神病药物同时实现在线分离具有非常重要的临床应用价值。
[0003]治疗药物浓度监测是指在临床进行的药物治疗中，在指定的时间间隔测量患者血液中特定药物的浓度。现阶段国内临床血药浓度监测的方法：主要有高效液相色谱法(HPLC)、放射免疫法(RIA)、气相色谱法(GC)和液相串联质谱法(LC
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MS)等。由于临床病人常常同时服用多种精神基本疾病类药物，而不同性质的药物检测方法一般不同，使用的检测设备也存在差异。因此在检测时，需要不停地切换设备或者更换流动相，更换完后还得平衡仪器，不仅拉长了检测时间，也不利于临床检测人员操作。
[0004]另外，高效液相色谱紫外检测方法检测时经常不能完全实现药物的色谱分离，容易存在干扰，影响定量结果；高效液相色谱串联质谱法是以质谱仪为检测手段，集高效液相色谱仪的高分离能力、质谱仪的高灵敏度和高选择性于一体的强有力分析检测工具，质谱作为检测手段虽可以准确定量，但是一方面设备较贵，另一方面同位素内标耗材也非常昂贵且对环境不友好。因此，本领域亟需一种将多种精神科药物同时实现在线分离、且分离时间短、效果好的检测方法，并且将其制备成试剂盒有助于临床检测使用。

技术实现思路

[0005]为克服现有技术缺陷，本专利技术采用了以下技术方案：
[0006]本专利技术第一方面提供了一种同时定量检测生物样本中精神类药物或其代谢物的方法，所述方法为采用超高效液相色谱
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紫外检测法，包括以下步骤：
[0007]S1色谱条件：(1)色谱柱：C
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色谱柱；(2)流动相：A相为甲酸
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水溶液，B相为甲酸
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甲醇溶液；(3)检测器为紫外(UV)检测器；
[0008]S2工作溶液的配制：
[0009]S21内标溶液的制备：
[0010]S211胃复安内标工作溶液：精密吸取适量胃复安标准品，先用少量甲醇溶解，再用甲醇
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水溶液定容，配制成胃复安标准品溶液，再用甲醇
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水溶液稀释定容，即得内标1
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胃复安工作溶液；
[0011]S212卡马西平内标工作溶液：精密吸取适量卡马西平标准品，先用少量甲醇溶解，再用甲醇
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水溶液定容，配制成卡马西平标准品溶液，再用甲醇
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水溶液稀释至定容，即得内标2
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卡马西平工作溶液；
[0012]S22混合标准品溶液的制备：
[0013]S221混标母液的配制：分别精密称定适量精神科常用药物或其代谢物氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑、奥氮平、米氮平、利培酮、9
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OH利培酮、曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平，混合后先用适量溶剂溶解后，再采用甲醇
‑
水溶液稀释定容配制成混标母液；进一步的，所述混标母液的配制包括：分别精密称定适量神科常用药物或其代谢物氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑、奥氮平、米氮平、利培酮、9
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OH利培酮、曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平1～30mg，混合后先用1～30mL溶剂溶解后，再采用40～70％v/v甲醇
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水溶液稀释定容配制成含氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑浓度为400μg/mL，含奥氮平、米氮平、利培酮、9
‑
OH利培酮浓度为100μg/mL，含曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平浓度为200μg/mL混标母液；
[0014]S222定量混合标准曲线工作溶液的配制：将上述混标母液用浓度为的40～70％v/v甲醇
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水溶液按一定比例稀释，分别配制上述药物的7个浓度的标准曲线溶液，所述溶液中分别含氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑浓度为100、50、20、10、4、2、1μg/mL，含奥氮平、米氮平、利培酮、9
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OH利培酮浓度为25、12.5、5、2.5、1、0.5、0.25μg/mL，含曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平浓度为50、25、10、5、2、1、0.5μg/mL；
[0015]S223混合标准品溶液的制备：分别精密吸取上述定量混合标准曲线工作溶液10～40μL，然后精密加入上述内标1
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胃复安工作溶液以及内标2
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卡马西平工作溶液各10～40μL，干燥后加入适量空白血液、血浆、血清或唾液以及甲基叔丁基醚，第一次涡旋，然后加入100
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500μL的浓度为1
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3mol/L的氢氧化钠水溶液以及甲基叔丁基醚第二次涡旋并离心，获得上清液，将所述上清液干燥后再加入含甲酸的甲醇
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水溶液复溶、涡旋、过滤，即得；
[0016]S23供试品溶液的制备包括：
[0017]S231血液、血浆、血清或唾液供试品溶液的制备：分别精密吸取S21制备的内标1
‑
胃复安工作溶液以及内标2
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卡马西平工作溶液各10～40μL，干燥后与适量待测血液、血浆、血清或唾液混合，第一次涡旋，加入100～500μL氢氧化钠水溶液以及甲基叔丁基醚进行第二次涡旋，涡旋后离心获得上清液，取上清液干燥后再加入含甲酸的甲醇
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水溶液复溶、涡旋、过滤即得；
[0018]或S232头发供试品溶液的制备：分别精密吸取S21制备的内标1
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胃复安工作溶液以及内标2
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卡马西平工作溶液各10～40μL，干燥后与适量待测头发样本混合，第一次涡旋，加入100～500μL氢氧化钠水溶液，超声或静置，然后加入甲基叔丁基醚进行第二次涡旋，涡旋后离心获得上清液，取上清液干燥后加入含甲酸的甲醇
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水溶液复溶、涡旋、过滤，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时定量检测生物样本中精神类药物或其代谢物的方法，其特征在于，所述方法为采用超高效液相色谱
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紫外检测法，其特征在于，包括以下步骤：S1色谱条件：(1)色谱柱：C
18
色谱柱；(2)流动相：A相为甲酸
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水溶液，B相为甲酸
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甲醇溶液；(3)检测器为紫外(UV)检测器；S2工作溶液的配制：S21内标溶液的制备：S211内标1
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胃复安工作溶液：精密吸取适量胃复安标准品，先用少量甲醇溶解，再用甲醇
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水溶液定容，配制成胃复安标准品溶液，再用甲醇
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水溶液稀释定容，即得内标1
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胃复安工作溶液；S212内标2
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卡马西平内标工作溶液：精密吸取适量卡马西平标准品，先用少量甲醇溶解，再用甲醇
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水溶液定容，配制成卡马西平标准品溶液，再用甲醇
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水溶液稀释至定容，即得内标2
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卡马西平工作溶液；S22混合标准品溶液的制备：S221混标母液的配制：分别精密称定适量精神科常用药物或其代谢物氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑、奥氮平、米氮平、利培酮、9
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OH利培酮、曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平，混合后先用适量溶剂溶解后，再采用甲醇
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水溶液稀释定容配制成混标母液；进一步的，所述混标母液的配制包括：分别精密称定适量神科常用药物或其代谢物氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑、奥氮平、米氮平、利培酮、9
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OH利培酮、曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平1～30mg，混合后先用1～30mL溶剂溶解后，再采用40～70％v/v甲醇
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水溶液稀释定容配制成含氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑浓度为400μg/mL，含奥氮平、米氮平、利培酮、9
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OH利培酮浓度为100μg/mL，含曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平浓度为200μg/mL的混标母液；S222定量混合标准曲线工作溶液的配制：将上述混标母液用浓度为的40～70％v/v甲醇
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水溶液按一定比例稀释，分别配制成含上述药物的7个浓度的标准曲线溶液，所述溶液中分别含氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脱氢阿立哌唑浓度为100、50、20、10、4、2、1μg/mL，含奥氮平、米氮平、利培酮、9
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OH利培酮浓度为25、12.5、5、2.5、1、0.5、0.25μg/mL，含曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平浓度为50、25、10、5、2、1、0.5μg/mL，即得；S223混合标准品溶液的制备：分别精密吸取上述定量混合标准曲线工作溶液10～40μL，然后精密加入上述内标1
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胃复安工作溶液以及内标2
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卡马西平工作溶液各10～40μL，干燥后加入适量空白血液、血浆、血清或唾液以及甲基叔丁基醚，第一次涡旋，然后加入100～500μL的浓度为1～3mol/L的氢氧化钠水溶液以及甲基叔丁基醚第二次涡旋并离心，获得上清液，将所述上清液干燥后再加入含甲酸的甲醇
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水溶液复溶、涡旋、过滤，即得；S23供试品溶液的制备包括：S231血液、血浆、血清或唾液供试品溶液的制备：分别精密吸取S21制备的内标1
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胃复安工作溶液以及内标2
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卡马西平工作溶液各10～40μL，干燥后与适量待测血液、血浆、血清或唾液混合，第一次涡旋，加入100～500μL氢氧化钠水溶液以及甲基叔丁基醚进行第二次涡旋，涡旋后离心获得上清液，取上清液干燥后再加入含甲酸的甲醇
‑
水溶液复溶、涡旋、过滤即得；或S232头发供试品溶液的制备：分别精密吸取S21制备的内标1
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胃复安工作溶液以及
内标2
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卡马西平工作溶液各10～40μL，干燥后与适量待测头发样本混合，第一次涡旋，加入100～500μL氢氧化钠水溶液，超声或静置，然后加入甲基叔丁基醚进行第二次涡旋，涡旋后离心获得上清液，取上清液干燥后加入含甲酸的甲醇
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水溶液复溶、涡旋、过滤，即得；S3测定法：将S22制备的混合标准品溶液、以及S23制备的供试品溶液分别注入超高效液相色谱仪，采用梯度洗脱程序，分别得到7个浓度的混合标准品溶液色谱图以及供试品溶液色谱图，分别获得所述精神类药物及其代谢物标准品和供试品的保留时间t
R
、峰面积积分，将所述混合标准品溶液中的浓度与其对应峰面积/内标面积比值建立标准曲线，然后根据供试品溶液的峰面积积分、上述标准曲线获得供试品溶液的浓度。2.根据权利要求1所述同时定量检测生物样本中精神类药物或其代谢物的方法，其特征在于，所述生物样本选自血液、血浆、血清、唾液、头发中的任意一种或几种；进一步优选的，所述生物样本选自血浆、血清、头发中的任意一种或几种。3.根据权利要求1所述同时定量检测生物样本中精神类药物或其代谢物的方法，其特征在于，S1所述的色谱条件中：流动相：A相为0.05v/v％甲酸
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水溶液；且B相为0.05v/v％甲酸
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甲醇溶液。4.根据权利要求1所述同时定量检测生物样本中精神类药物或其代谢物的方法，其特征在于，S1所述的色谱条件中：紫外检测器为VWD或DAD检测器；进一步优选的，所述紫外检测器的检测波长为254nm、285nm或全波长扫描。5.根据权利要求1所述同时定量检测生物样本中精神类药物或其代谢物的方法，其特征在于，S1所述的色谱条件还包括：(4)流动相流速为0.1～0.5mL/min；(5)柱温为35～45℃；(6)工作溶液的进样量均为1.0～20.0μL。6.根据权利要求1所述同时定量检测生物样本中精神类药物或其代谢物的方法，其特征在于，步骤S21中，所述内标溶液的制备具体包括：S211胃复安内标工作溶液：精密称定1～30mg胃复安标准品，先用1～30mL甲醇溶解，再用40～70％v/v甲醇
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水溶液定容，配制成浓度为0.1～0.5mg/mL的胃复安储备溶液，再用40～70％v/v甲醇
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水溶液稀释至10～40μg/mL，即得内标1
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胃复安工作溶液；S212卡马西平内标工作溶液：精密称定1～30mg卡马西平标准品，先用1～30mL甲醇溶解，再用40～70％v/v甲醇
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水溶液定容，配制成浓度为0.1～0.5mg/mL的卡马西平储备溶液，再用40～70％v/v甲醇
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水溶液稀释至1～5μg/mL，即得内标2
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卡马西平工作溶液。7.根据权利要求1所述同时定量检测生物样本中精神类药物或其代谢物的方法，其特征在于，所述S231血液、血浆、血清或唾液供试品溶液的制备包括以下步骤：分别精密吸取S21制备的内标1
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胃复安工作溶液以及内标2
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卡马西平工作溶液各10～40μL，氮气吹干后与400～1000μL融化后的待测冷冻血液、血浆、血清或唾液样品混合至7～10mL离心管中，第一次涡旋0.5～2min，加入100～500μL浓度为1～3mol/L的氢氧化钠水溶液，以及甲基叔丁基醚2～7mL，再进行第二次涡旋2～5min，然后将涡旋后离心管以速度为2500～5000转/分离心4～10min，取离心后的上清液氮气吹干后加入60～250μL含0.05～0.15v/v％甲酸、且浓度为10～20v/v％甲醇
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水溶液复溶，涡旋0.5～2min，尼龙滤膜过滤，即得。8.根据权利要求1所述同时定量检测生物样本中精神类药物或其代谢物的方法，其特
征在于，所述S232头发供试品溶液的制备包括以下步骤：取待测头发用丙酮、水依次清洗，干燥后剪碎，分别精密吸取S21制备的内标1
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胃复...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙秀佳，张晨，李华芳，
申请(专利权)人：上海市精神卫生中心上海市心理咨询培训中心，
类型：发明
国别省市：