一种新琼二糖的生产方法技术

本发明专利技术属于新琼二糖生产领域，具体涉及一种新琼二糖的生产方法，该方法包括将琼胶水溶液在β

【技术实现步骤摘要】
一种新琼二糖的生产方法


[0001]本专利技术属于新琼二糖生产领域，具体涉及一种新琼二糖的生产方法。

技术介绍

[0002]琼脂多糖是从海洋红藻中分离得到的一种植物多糖，常见可从石花菜属、江蓠藻属等红藻中制备得到。琼脂多糖本质上是一种大分子物质，因而人体难以直接利用这一成分，只有将琼胶多糖转化为超低聚琼脂糖(DP＜100)或琼胶寡糖(2≤DP＜20)之后才能让人体有进一步利用的可能，并且也只有将其降解为小分子结构，才能更广泛地具备后续分子改造潜力。而现有的琼胶改性手段，通常只能获得超低聚琼脂糖，远远达不到目标水平。
[0003]在这些低聚结构中，新琼二糖(neoagarobiose，C
12
H
20
O
10
)是琼脂多糖的组成单体，其分子量仅为324.28，具备良好的生物活性以及生物安全性。据现有的文献报道，新琼二糖在肝损伤护理、癌症治疗、皮肤修护等领域具有广阔的应用前景。同时，新琼二糖还具备良好的药物改造前景，其与蛋白、脂质等生物活性物质的结合也具有潜在的成药可能。
[0004]常见琼脂多糖的降解方法主要有化学法、物理法以及酶解法。其中，化学法常见的有芬顿法以及酸解法，物理法常见的有辐射法。然而，由于化学法和物理法在琼胶多糖的降解位点上极为随机，因此产物降解度通常无法实现精准把控，并且此类方法通常对工艺的要求极为严苛，对环境也有一定损害，因此产业化实现价值不高。而酶解法由于环境友好度高、反应条件易控制，被学者们广泛研究。
[0005]由于琼脂多糖本身理化性质较为稳定，且陆地环境中少有高效降解的微生物，因此目前大部分获得的琼脂酶活性都不够理想，其主要降解产物也多集中在聚合度为4～20的琼胶寡糖上，难以获得新琼二糖占比较高的产物。少量研究报道发现了可降解得到新琼二糖的微生物或琼胶酶，但活性均较差且成品中大部分为降解不完全的多糖，新琼二糖的占比较低。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是为了克服采用现有的方法所得新琼二糖占比较低的缺陷，而提供一种新的新琼二糖的生产方法，该方法所得产物中新琼二糖的占比较高。
[0007]本专利技术的专利技术人经过深入研究之后发现，采用现有的酶解法无法精确降解获得新琼二糖的主要原因在于现有琼胶酶是通过随机内切或外切的方式对琼胶多糖进行酶解，而在降解得到小分子产物之后，琼胶酶的活性位点难以再与小分子实现进一步有效结合以继续降解，进而表现为无法获得新琼二糖或者新琼二糖的占比低。本专利技术的专利技术人经过深入研究之后还发现，采用基因序列为SEQ ID NO:1的β
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琼胶酶对琼胶进行酶解，并在酶解反应终点引入酸解工艺，如此获得的产物中新琼二糖的占比较高。基于此，完成了本专利技术。
[0008]具体地，本专利技术提供了一种新琼二糖的生产方法，该方法包括以下步骤：
[0009]S1、将琼胶水溶液在β
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琼胶酶的存在下酶解为低聚新琼寡糖液，所述β
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琼胶酶的基因序列为SEQ ID NO:1；
[0010]S2、往低聚新琼寡糖液中加入硫酸进行酸解反应，再往所得酸解产物中加入碳酸钡充分搅拌沉淀，之后将体系中的沉淀通过固液分离去除，所得上清液干燥后得到新琼二糖干粉。
[0011]根据本专利技术的一种具体实施方式，所述β
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琼胶酶通过克隆或化学合成法从所述菌属或菌种中获得酶基因，将该酶基因引入原核表达载体中得到重组载体，之后将所述重组载体转化至大肠杆菌得到重组菌株，所述重组菌株经发酵、分离纯化后得到所述β
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琼胶酶。所述β
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琼胶酶的基因序列为SEQ ID NO:1，其对应的氨基酸序列为SEQ ID NO:2。其中，通过克隆或化学合成法获得酶基因、将酶基因引入原核表达载体中得到重组载体、将重组载体转化至大肠杆菌得到重组菌株的方式均为本领域技术人员公知，在此不作赘述。所述原核表达载体例如可以为PET系列的表达载体(如PET
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14、PET
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21、PET
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22、PET
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25、PET
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28)、PGEX系列的表达载体(如PGEX
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4T
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2、PGEX
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6T
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1)等。所述大肠杆菌例如可以为大肠杆菌BL21(DE3)。
[0012]SEQ ID NO:1：
[0013]ATGCATCATCATCATCATCATCGACCTAAGTTCATAAACTTTCACGCAAAGTCCCACGATAAAGACGTGACCGCTTTCTACGAAGAATATGACGTATACCTTGGCCGAGGCTTCTGGGGAATGATTAAAACAGTGCTGCGCAAGGGATTTACAAAACGCTCCACGGTGGGTATACACGTTGACACAGCAGACGTCGGCTCGACTTATCCGAATTCTACTATAATTGATAAATCAACGGACGTCAAGGAGGTCTCTAATCTCATAGGAACAGAACACGAGAAACCGTTTTGGCCGGATGCTGGAGAAATGTCGCTGATGGACGCATCTACCTCGGGGGACTTTATGGGTCAGTTTTTTAACGAGTTTGTCGATGCAGGTGCTACTAACTCGGATGATCGGCCAAAATACGTCGAAATCATCAATGAACCCTTTTGGCATGCTCATGACTTTTATGAGATTACTGCAAAGGAGATGGCGGAACTCTTTGGTACTATCGCAGCGCAAGTTCACGATACTCCGTCGCTCGGAAAGATGAAGGTTGGTGGCTATTGTACCGGTTTCCCAGATTTTGAAATCAATAACTTTGCACATTGGGAAGATAATATGAAAATGTTCATGGATGTGGCGGGAGATGATATGGACTTTTGGTCTATACACCTATACGATTTTCCTTCGGGAATAACCCAGAACAATAATCGCTCGGGATCCAACATGGAAGCGGTTCTAGATCTTATAGAGACGTATTCGATGTGGAAGGGAGGCAAGGTCAAACCTCATGCGATCACACAATACGGGGTTATCACCCATGGTTTCGACAATTACACACCGTATCGGGATTGGCTTCACATCAAATCAACAAATTCTATGCTGATGCAGTTTATGGAGCGCACGGACAATATATGCTATGCAATGCCGTTTGCCATGGATAAATCCACGTGGCACCTAACGGAGAATAATGGGCAGCCTGGTGCACTCTTCATACCTACCAATATCGGTGAAAAGGAAGTAGAGCAGTGGGTGTTCACGGAAATGATCAAATTCTATCAACTTTGGAAGACCGGAGTT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新琼二糖的生产方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：S1、将琼胶水溶液在β
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琼胶酶的存在下酶解为低聚新琼寡糖液，所述β
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琼胶酶的基因序列为SEQ ID NO:1；S2、往低聚新琼寡糖液中加入硫酸进行酸解反应，再往所得酸解产物中加入碳酸钡充分搅拌沉淀，之后将体系中的沉淀通过固液分离去除，所得上清液干燥后得到新琼二糖干粉。2.根据权利要求1所述的新琼二糖的生产方法，其特征在于，步骤S1中，所述酶解的条件使所得低聚新琼寡糖液的聚合度为20以下。3.根据权利要求1所述的新琼二糖的生产方法，其特征在于，步骤S1中，所述酶解的条件使所得低聚新琼寡糖液的主要成分为新琼四糖和/或新琼六糖。4.根据权利要求1所述的新琼二糖的生产方法，其特征在于，步骤S1中，所述酶解的条件包括温度为40～50℃，时间为3～8h。5.根据权利要求1所述的新琼二糖的生产方法，其特征在于，步骤S1中，以琼胶水溶液的总重量为100g计，所述β...

【专利技术属性】
技术研发人员：何雄飞，侯艳平，易志伟，产竹华，张春毅，王斐，
申请(专利权)人：蓝脑科技厦门有限公司，
类型：发明
国别省市：