一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法技术

本发明专利技术属于植物无性繁殖技术领域，具体涉及一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法；利用组织培养技术快速繁殖无刺刺梨苗，通过对外植体进行消毒处理、腋芽诱导、增殖培养、生根培养，短时间内获得大量性状一致、脱毒的无刺刺梨无菌苗，保持了母本的优良特性，为无刺刺梨优良种质资源快速繁殖保存、良种选育以及产业发展提供科技支撑。供科技支撑。

【技术实现步骤摘要】
一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法


[0001]本专利技术属于植物无性繁殖
，具体涉及一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法。

技术介绍

[0002]无刺刺梨(R.roxburghii f.eseiosa Ku)是刺梨的近缘种，植株形态、果实口感等方面与刺梨相差无异，但果子外观及果实营养价值与刺梨存在较大的差异，具有明显的特殊性状和较大的开发利用潜力。该种质无刺，便于采收及加工，具有极高的经济价值，是培育刺梨优良品种的重要种质资源，相对于目前的种植品种具有极大的发展优势。无刺刺梨生长快，根系发达，适宜山地造林，特别是山区可作为重要的经济树种进行开发。但无刺刺梨属野生资源，分布范围窄，资源稀少，仅存的资源也遭受严重的破坏。采用传统的扦插方法进行种苗繁育，其繁殖速度相对较慢，需要材料多，特别是对于优良无性系材料的扩繁，材料少短时间内很难有效的繁育保存其资源。对此，利用组织培养技术进行无性繁殖，简便、迅速且繁殖速度快，既可以保持母本的优良遗传特性，还可以大规模繁育，对保护无刺刺梨种质资源具有重要意义，也为刺梨良种培育奠定基础。
[0003]目前尚未有关于无刺刺梨组培繁殖的研究，有一些针对刺梨进行组培繁殖的研究，如申请号为CN201210541995.3的专利文件公开了一种无籽刺梨种苗快速扩繁的方法，其是采用刺梨当年生嫩茎作为外植体经过消毒、腋芽诱导、腋芽增殖、组培苗生根、生根苗移栽等步骤。参照该专利试验方案无刺刺梨达不到理想的快速繁殖效果，且无刺刺梨与无籽刺梨不同，从植物学分类上便不同。
[0004]如申请号为CN201310010358.8的专利文件公开了一种无籽刺梨的栽培方法，其是采用茎尖作为外植体经过消毒处理、诱导培养、生根培养出植物苗。参照该专利试验方案无刺刺梨达不到理想的快速繁殖效果，且无刺刺梨与无籽刺梨不同，从植物学分类上便不同。

技术实现思路

[0005]本专利技术为解决上述问题，提供了一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法。
[0006]具体是通过以下技术方案来实现的：
[0007]一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法，包括以下步骤：
[0008]1、外植体采集：选取长势良好的当年生无病虫害无刺刺梨嫩茎。
[0009]2、外植体消毒：
[0010]a.将采集的嫩茎剪成4
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5cm的带叶腋的茎段，去除叶子置于洁净的烧杯中，用洗洁精水清洗茎段表面灰尘污垢后，再用流水冲洗干净备用；
[0011]b.将处理后的茎段置于超净工作台中，先用75％酒精浸泡10s，用无菌水漂洗1次，再用0.1％升汞浸泡消毒处理10min，无菌水漂洗3次。
[0012]3、腋芽诱导：将消毒后的茎段用无菌滤纸吸干材料上残留的水分，再将茎段两端切除，切成长2.5～3.0cm带1～2个叶腋，竖直插入诱导培养基中培养，培养时间为28
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35d。
在实际培养过程中，7d后腋芽开始萌发，30d后腋芽即可长到2～3cm高。
[0013]进一步，所述的诱导培养基，其组成为：MS+BA0.8～1.2mg/L+NAA0.5～0.1 mg/L+琼脂5.5～6.5g/L+蔗糖30g/L，培养基pH为5.8，于121℃101KPa灭菌 20min制得。
[0014]4、增殖培养：切取上述步骤3中诱导出的腋芽，切掉腋芽多余的叶片后接种于增殖培养基中，增殖培养时间为45
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55d，在实际培养过程中，50d左右即可培养一代。
[0015]进一步，所述的增殖培养基，其组成为：MS+BA0.5～2.0mg/L+NAA0.01～ 0.1mg/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L，培养基pH为5.8，于121℃101KPa灭菌 20min制得。
[0016]5、生根培养：选取上述步骤4中获得的健壮苗，切取顶端长2cm左右接入生根培养基中进行生根培养，15d后开始生根。
[0017]进一步，所述的生根培养基，其组成为：1/2MS+IBA0.1～0.3mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+活性炭0.3g/L+琼脂6.0g/L+蔗糖30g/L，培养基pH为5.8，于121℃ 101KPa灭菌20min制得。
[0018]进一步，上述接种工作均在超净工作台中操作，组培苗的培养均在培养室内进行，其培养条件为：温度24～26℃，湿度70～80％，光照强度1500～1800lx，每天光照时间10h。
[0019]综上所述，本专利技术的有益效果在于：本专利技术是首次对无刺刺梨进行离体快繁技术技术研究，利用组织培养技术繁殖无刺刺梨无菌苗，并在传统方法的基础上进行优化改进，实验过程简单易操作。通过对外植体进行消毒处理后，接种于诱导培养基中诱导腋芽发生，继而将腋芽接种在附加不同种类及浓度外源激素的培养基中进行培养，根据增殖和生根情况，筛选无刺刺梨适宜的增殖及生根培养基。使得短期内即可获得大量性状一致的无刺刺梨无菌苗，充分对无刺刺梨进行利用，并保持了母本的优良特性，在为无刺刺梨资源保护、良种选育以及产业发展提供科技支撑。
[0020]一、增殖培养基筛选
[0021]增殖培养基以MS为基础培养基，采用6
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BA和NAA两种激素不同浓度配比设计方案，进行无刺刺梨增殖培养基的筛选。培养基中附加琼脂6.5g/L、蔗糖30g/L、pH为5.8，于121℃101KPa灭菌20min制得。实验设计如表1。试验共计9个处理及1个对照，每个处理20瓶，每瓶2株材料。
[0022]表1 无刺刺梨增殖培养试验方案
[0023][0024][0025]二、生根培养基筛选
[0026]选取增殖培养得到的健壮苗，切取顶端长约2cm的芽，切掉多余的叶片后接种于生根培养基中，生根培养基以1/2MS为基础培养基，采用IBA和NAA两种激素不同浓度配比设计方案，进行无刺刺梨生根培养基的筛选。培养基中附加活性炭0.3g/L、琼脂6.5g/L、蔗糖30g/L、pH为5.8，于121℃101KPa灭菌20 min制得。实验设计如表2。试验共计9个处理及1个对照，每个处理20瓶，每瓶4株材料。
[0027]表2 无刺刺梨生根培养试验方案
[0028][0029]无刺刺梨外植体用75％酒精浸泡10s，0.1％升汞浸泡消毒处理10min消毒效果最佳；茎段在腋芽诱导培养基MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L中萌芽率达 100％；适宜无刺刺梨增殖的培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L，增殖系数为4.5；在培养基1/2MS+IBA 0.2mg/L+NAA 0.2mg/L+活性炭0.3g/L中，生根率为93.3％。
附图说明
[0030]图1为无刺刺梨采集外植体材料的植株图片。
[0031]图2为实施例1中对无刺刺梨进行腋芽诱导阶段的图片。
[0032]图3为实施例1中对无刺刺梨增殖进行培养阶段的图片。
[0033]图4为实施例1中对无刺刺梨进行生根培养阶段的图片。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法，包括以下步骤：外植体消毒、腋芽诱导、增殖培养和生根培养；其特征在于，所述的腋芽诱导，是采用无刺刺梨的带叶腋茎段，以腋芽诱导培养基进行培养；所述腋芽诱导培养基的组成为：MS+BA0.8～1.2mg/L+NAA 0.5～0.1mg/L+琼脂5.5～6.5g/L+蔗糖30g/L；所述的增殖培养是将腋芽接种至增殖培养基中进行培养；所述的生根培养是将健壮苗接种于生根培养基中进行培养。2.如权利要求1所述的一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法，其特征在于，所述的外植体消毒，是采集无刺刺梨的嫩茎，剪成带叶腋的茎段，清洗表面污垢后，分别采用75％酒精和0.1％升汞进行消毒，漂洗得到。3.如权利要求1所述的一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法，其特征在于，所述的增殖培养基，其组成为：MS+BA 0.5～2.0mg/L+NAA 0.01～0.1mg/L+琼脂6.5g/L+蔗糖30g/L。4.如权利要求1所述的一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法，其特征在于，所述的生根培养基，其组成为：1/2MS+IBA 0.1～0.3mg/L+NAA 0.1～0.3mg/L+活性炭0.3g/L+琼脂6.0g/L+蔗糖30g/L。5.如权利要求1
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4任一项所述的一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体消毒：a.将采集的嫩茎剪成4
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【专利技术属性】
技术研发人员：李斌，肖艳，王开发，侯俊，周聿，周应书，毕宁，李贵远，邓加兴，谢恩云，王彩云，
申请(专利权)人：毕节市林业科学研究所，
类型：发明
国别省市：