丹参酚酸B在制备提高自体脂肪移植存活率的药物中的应用制造技术

本发明专利技术提出了一种丹参酚酸B在制备提高自体脂肪移植存活率的药物中的应用。本发明专利技术通过实验验证丹参酚酸B可有效增强3T3

【技术实现步骤摘要】
丹参酚酸B在制备提高自体脂肪移植存活率的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及医药
，特别是指一种丹参酚酸B在制备提高自体脂肪移植存活率的药物中的应用。

技术介绍

[0002]自体脂肪作为一种常用的软组织缺陷的理想填充材料应用于临床中。自体脂肪移植存在着较高的移植后吸收率的问题。在实验研究中，脂肪移植的吸收率高达80％，在临床试验中保留率也仅为34％左右。目前的研究中提高自体脂肪移植存活率的方法，主要通过优化颗粒脂肪加工流程及干细胞辅助移植以及一些生长因子辅助移植等。目前研究中使用的改善脂肪移植存活率的技术均较为繁琐，且存在一定的生物安全问题以及瘤变的风险，限制了其在临床广泛应用。另一方面，即使应用了这些辅助手段，大容量脂肪移植成活率仍不令人满意。目前市场上并没有一种明确用于提高脂肪移植术后脂肪存活率的有效小分子化合物。

技术实现思路

[0003]本专利技术提出一种丹参酚酸B在制备提高自体脂肪移植存活率的药物中的应用，解决了现有技术中脂肪移植吸收率较高的问题。
[0004]本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0005]丹参酚酸B在制备提高自体脂肪移植存活率的药物中的应用。
[0006]在一些实施例中，所述丹参酚酸B的浓度为10～100μmol/L。
[0007]在一些实施例中，所述丹参酚酸B的浓度为50μmol/L。
[0008]在一些实施例中，所述药物中还包括药用辅料或其他可配伍的药物。
[0009]在一些实施例中，所述药物为注射液。
>[0010]丹参酚酸B在制备促进脂肪干细胞增殖的药物中的应用。
[0011]丹参酚酸B在制备通过上调PPARγ、CEBPα和FABP4来促进成脂分化的药物中的应用。
[0012]本专利技术相比于现有技术具有以下有益效果：
[0013](1)本专利技术通过实验验证丹参酚酸B可有效增强3T3
‑
L1(小鼠前脂肪细胞细胞系)和h
‑
ADSC(人脂肪干细胞原代细胞)增殖能力及分化水平；并可改善裸鼠皮下脂肪移植的存活率。
[0014](2)本专利技术药物辅助下的脂肪移植，给药方式简单，且效果明显，且无明显副作用，有着显著的社会效益与经济效益，对于自体脂肪移植的应用具有推进作用。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施方案或现有技术中的技术方案，下面将对实施方案或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅
是本专利技术的一些实施方案，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0016]图1：为实施例1中的丹参酚酸B对于3T3
‑
L1及ADSC细胞毒性及增殖影响。其中，图1A：丹参酚酸B化学结构式；图1B：细胞毒性检测；图1C：Edu 检测增殖水平。
[0017]图2：为实施例1中的流式凋亡检测不同浓度丹参酚酸B处理后对于3T3
‑
L1 及h
‑
ADSC凋亡的影响。
[0018]图3：为实施例1中的丹参酚酸B对于3T3
‑
L1及ADSC成脂分化的影响。其中，图3A：油红染色检测分化水平；图3B：甘油三酯水平检测。
[0019]图4：为实施例1中的RNA
‑
Seq检测丹参酚酸B(50μmol/L)处理后RNA 水平变化。其中，图4A：基因差异散点图；图4B：基因表达韦恩图；图4C：第四天和第八天KEGG通路分析；图4D：PPARγ的热图分析；图4E：第四天和第八天GSEA分析。
[0020]图5：为实施例1中的WB及PCR验证丹参酚酸B对于脂肪干细胞成脂相关基因的影响。图5A：PCR验证丹参酚酸B对于3T3
‑
L1及ADSC成脂相关基因表达的影响；图5B：WB验证丹参酚酸B对于3T3
‑
L1及ADSC成脂相关蛋白表达的影响。
[0021]图6：为实施例1中的裸鼠皮下脂肪移植模型。其中，图6A：整个动物实验流程；图6B：裸鼠皮下脂肪移植部位。
[0022]图7：为实施例1中的丹参酚酸B可以提高自体脂肪移植存活率。其中，图 7A：移植脂肪大体图及体积与重量；图7B：移植脂肪HE染色；图7C：Perlipin (绿色)染存活脂肪。
具体实施方式
[0023]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]实施例1
[0025](一)体外实验
[0026](1)通过CCK8实验检测安全的药物浓度范围为≤100μmol/L(图1B)：
[0027]丹参酚酸B对3T3
‑
L1细胞和h
‑
ADSCs活力的影响通过Cell Counting Kit
‑
8 (Beyotime,China)根据制造商的说明进行测试。简而言之，将5000个细胞/孔接种在96孔板中。将细胞在含有不同浓度丹参酚酸B(0、0.1、0.5、1、5、10、25、 50、75、100、125μmol/L)的生长培养基或成脂分化培养基中培养。在培养72 h后，将10％CCK
‑
8试剂与培养基混合并加入到每个孔中。将96孔板在37℃下孵育2小时。使用酶标仪(Thermo,USA)通过450nm处的吸光度测量OD值。
[0028](2)通过Edu检测10,50,100μmol/L检测丹参酚酸B对于脂肪干细胞增殖水平的影响，发现10,50μmol/L浓度下可以促进脂肪干细胞增殖(图1C)：
[0029]将细胞接种在24孔板中，并在标准条件下与不同浓度的丹参酚酸B一起孵育。孵育24小时后，根据制造商的方案，使用EdU细胞增殖检测试剂盒 (Invitrogen，USA)检测细胞增殖。简而言之，将细胞与50μM EdU孵育2小时后固定、透膜、显色反应。然后，细胞核用Hoechst33342(Invitrogen，USA) 染色30分钟。通过倒置荧光显微镜(Nikon，Japan)确定掺
入EdU的细胞。
[0030](3)通过流式检测凋亡，发现上述10μmol/L，50μmol/L未对脂肪干细胞造成明显的凋亡影响(图2)：
[0031]将细胞接种于6孔板，设置阴性对照，0、10、50、100μmol/L组，药物处理后，收货细胞，使用冷PBS冲洗。准备1XAnnexin
‑
binding Buffer及100μg/ml PI。离心细胞，使用Annexin
‑
binding Buffer重悬，稀释至1*106个/ml。取100μl、5μ l FITC annexin V以及1μl 100g/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.丹参酚酸B在制备提高自体脂肪移植存活率的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述丹参酚酸B的浓度为10～100μmol/L。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述丹参酚酸B的浓度为50μmol/L。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：余力，郑丹宁，张艺凡，孙佳铭，侯家康，高雅，钟钊豪，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第九人民医院，
类型：发明
国别省市：