一种高抗氧化活性的啤酒酵母多肽制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，提出了一种高抗氧化活性的啤酒酵母多肽制备方法，包括以下步骤：(1)啤酒酵母自溶：啤酒酵母加入NaHCO3去除啤酒花，依次使用风味蛋白酶、乳酸菌和麦芽糖实现啤酒酵母的自溶；(2)酶解：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶共同酶解；(3)灭酶、除核酸：灭酶后采用等电点法去除核酸；(4)脱色即得啤酒酵母多肽。本发明专利技术通过风味蛋白酶、乳酸菌共同对啤酒酵母自溶，大大提高了自溶的效果和效率，使酵母细胞内蛋白质迅速外流，为后续水解制备啤酒酵母多肽提供有利条件，大大提高了啤酒酵母多肽的产率。多肽的产率。

【技术实现步骤摘要】
一种高抗氧化活性的啤酒酵母多肽制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体的，涉及一种高抗氧化活性的啤酒酵母多肽制备方法及应用。

技术介绍

[0002]啤酒生产工业会产生大量啤酒废酵母，虽然废酵母的活性有所下降，但是其中富含丰富的营养物质，例如蛋白质、核酸、矿物质、纤维素等。其中，蛋白质含量高达50％，氨基酸种类齐全，其比例接近联合国粮农组织(FAO)推荐比例，尤其是谷类食物中第一限制氨基酸赖氨酸含量丰富，具有潜在的应用价值。
[0003]我国是一个啤酒生产和消费大国，每年产生的啤酒废酵母约5万吨。这些啤酒废酵母除了部分经粗加工制成饲料等低附加值产品外，大部分被直接排弃，不但浪费了资源，还造成了环境的污染。如果能对啤酒废酵母进行合理的开发利用，对综合利用资源和环保都具有非常重要的意义。
[0004]专利申请CN 106701871 A和CN 106676152 A分别公开了一种利用啤酒废酵母制备多肽的方法，分别采用木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶进行蛋白质水解得到粗多肽后再进行进一步除杂纯化，但是这两个专利申请中对啤酒废酵母的预处理仅仅采用NaHCO3对啤酒花进行了酯化，并未实现啤酒废酵母的自溶，因此后续直接的酶解反应效率较低，得到多肽的产率也较低。

技术实现思路

[0005]本专利技术提出一种高抗氧化活性的啤酒酵母多肽制备方法，使用风味蛋白酶和乳酸菌共同处理啤酒酵母实现啤酒酵母的自溶，为后续蛋白质水解提供有利条件，显著提高多肽的收率。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]一种高抗氧化活性的啤酒酵母多肽制备方法，包括以下步骤：
[0008](1)啤酒酵母自溶：啤酒酵母加入NaHCO3溶液，离心，沉淀加无菌水后，加入风味蛋白酶，灭酶后再加入乳酸菌和麦芽糖，离心，保留上清液；
[0009](2)酶解：向步骤(1)上清液中加入木瓜蛋白酶和胰蛋白酶进行酶解；
[0010](3)灭酶、除核酸：煮沸灭酶，离心，上清液用等电点法去除核酸，离心，保留上清液；
[0011](4)脱色：步骤(3)上清液中加入脱色剂，离心，上清液浓缩干燥，即得。
[0012]进一步地，所述步骤(1)中NaHCO3溶液质量百分浓度为0.1
‑
2％，体积是啤酒酵母质量的2
‑
3倍，配制后灭菌。
[0013]进一步地，所述步骤(1)中啤酒酵母加入NaHCO3溶液浸泡30
‑
80min，3000
‑
4000r/min离心15
‑
20min。
[0014]进一步地，所述步骤(1)的沉淀中加无菌水，无菌水体积为沉淀质量的2
‑
3倍。
[0015]进一步地，所述步骤(1)中风味蛋白酶的添加量为啤酒酵母质量的1
‑2‰
，添加后于40
‑
50℃反应6
‑
8h。
[0016]进一步地，所述步骤(1)中灭酶条件为将溶液煮沸10
‑
15min，冷却至室温。
[0017]进一步地，所述步骤(1)中乳酸菌选自嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、德氏乳杆菌、发酵乳杆菌、瑞士乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、两歧双歧杆菌、嗜热链球菌中的一种或多种。
[0018]进一步地，所述步骤(1)中乳酸菌的添加量为5
×
103‑5×
104cfu/mL。
[0019]进一步地，所述步骤(1)中麦芽糖的添加量为5
‑
10g/L。
[0020]进一步地，所述步骤(1)中加入乳酸菌和麦芽糖后于28
‑
35℃反应24
‑
36h，15,000
‑
20,000r/min离心8
‑
12min，上清液调节pH至6.5
‑
7.5。
[0021]进一步地，所述步骤(2)中木瓜蛋白酶的添加量为啤酒酵母质量的1
‑5‰
，胰蛋白酶的添加量为啤酒酵母质量的1
‑2‰
，添加后于50
‑
60℃反应8
‑
15h。
[0022]更进一步地，所述木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1
‑
2:1。
[0023]进一步地，所述步骤(3)中灭酶具体为煮沸10
‑
15min，然后6000
‑
8000r/min离心15
‑
20min。
[0024]进一步地，所述步骤(3)中等电点法具体为上清液加入0.1
‑
1mol/LHCl调节pH至2.0
‑
3.0，静置6
‑
8h后6000
‑
8000r/min离心15
‑
20min，保留上清液。
[0025]进一步地，所述步骤(4)中脱色剂为活性炭、大孔树脂、硅藻土中的一种或多种。
[0026]更进一步地，所述脱色剂为硅藻土和大孔树脂D392，二者的质量比为1:3
‑
5。
[0027]进一步地，所述步骤(4)中脱色剂添加量为上清液体积的1
‑3‰
。
[0028]进一步地，所述步骤(4)中脱色剂脱色5
‑
8h后，6000
‑
8000r/min离心15
‑
20min，50
‑
60℃旋转蒸发浓缩后，置真空干燥箱，以氯化钙为干燥剂，40
‑
50℃干燥20
‑
30h，即得啤酒酵母多肽。
[0029]本专利技术进一步提供上述制备方法制备得到的啤酒酵母多肽。
[0030]本专利技术还提供上述制备方法制备得到的啤酒酵母多肽在制备抗氧化食品中的应用。
[0031]本专利技术的有益效果为：
[0032]1、本专利技术在啤酒酵母自溶阶段采用NaHCO3与啤酒花酯化以去除啤酒花的苦味，添加风味蛋白酶和乳酸菌配合使用以加速啤酒酵母的自溶。首先，风味蛋白酶可以促进啤酒酵母细胞壁和细胞膜的分离，同时溶解细胞壁表面的蛋白质而溶解细胞壁，为后续细胞膜破裂提供有利条件。其次，乳酸菌与啤酒酵母竞争麦芽糖等营养物质，使啤酒酵母失去营养供给从而逐渐失去活性进而发生细胞膜的破损，酵母细胞内容物蛋白质、核酸、多糖等物质外泄，为后续多肽的制备提供有利条件。并且后续高速离心能彻底去除乳酸菌，不影响啤酒酵母提取多肽的纯度。
[0033]2、本专利技术采用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶混合酶的方式进行啤酒酵母中蛋白的水解，水解效率更高，产物收率更高。
[0034]3、本专利技术采用硅藻土和大孔树脂D392共同对多肽溶液进行脱色处理，不仅能尽可能降低对多肽的吸附，还能显著提高脱色的效率和效果。
具体实施方式
[0035]下面将结合本专利技术实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高抗氧化活性的啤酒酵母多肽制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)啤酒酵母自溶：啤酒酵母加入NaHCO3溶液，离心，沉淀中加无菌水后，加入风味蛋白酶，灭酶后再加入乳酸菌和麦芽糖，离心，保留上清液；(2)酶解：向步骤(1)上清液中加入木瓜蛋白酶和胰蛋白酶进行酶解；(3)灭酶、除核酸：煮沸灭酶，离心，上清液用等电点法去除核酸，离心，保留上清液；(4)脱色：步骤(3)上清液中加入脱色剂，离心，上清液浓缩干燥，即得。2.根据权利要求1所述的高抗氧化活性的啤酒酵母多肽制备方法，其特征在于，NaHCO3溶液质量百分浓度为0.1
‑
2％，体积是啤酒酵母质量的2
‑
3倍，配制后灭菌。3.根据权利要求1所述的高抗氧化活性的啤酒酵母多肽制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中风味蛋白酶的添加量为啤酒酵母质量的1
‑2‰
，添加后于40
‑
50℃反应6
‑
8h。4.根据权利要求1所述的高抗氧化活性的啤酒酵母多肽制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中乳酸菌选自嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、德氏乳杆菌、发酵乳杆菌、瑞士乳杆菌、副干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、青春双歧杆菌、两歧双歧杆菌、嗜热链球菌中的一种或多种。5.根据权利要求4所述的高抗氧化活性的啤酒酵母多肽制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：江建梅，刘立娟，李丹丹，徐婷婷，刘银生，姜峰，陈志颖，
申请(专利权)人：唐山泰普纽特生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：