一种小鼠胰腺癌模型及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种小鼠胰腺癌模型，是通过用rhIL

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠胰腺癌模型及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种小鼠胰腺癌模型及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]胰腺癌(Pancreatic Adenocarcinoma，PC)是常见的胰腺肿瘤，具有恶性程度较高、进展迅速、起病隐匿以及早期症状不典型等特点，临床就诊时大部分患者已属于中晚期。胰腺癌的5年相对生存率在常见恶性肿瘤中最差，仅为7.2％，且呈逐年恶化的趋势。目前手术切除依然是胰腺癌患者获得治愈机会和长期生存的唯一有效方法。然而，超过85％的胰腺癌患者因病期较晚而失去手术机会。晚期胰腺癌的一线方面，目前以GEM(Gemcitabine，吉西他滨)为基础的药物治疗是晚期胰腺癌最主要的治疗方式。
[0003]研究发现，在正常组织中，CLDN18.2仅表达于分化的胃黏膜上皮细胞，CLDN18.2被超分子复合体包绕，很难被静脉抗体结合。但在细胞恶变过程中，细胞极性发生变化，CLDN18.2抗原表位暴露在了癌细胞表面，可被抗体特异性识别。CLDN18.2在多种恶性肿瘤中均观察到了异常激活和过表达的特征。CLDN18.2对肿瘤的组织学类型具有选择性：表达于食管腺癌，不表达于食管鳞状细胞癌；表达于卵巢粘液癌，不表达于卵巢浆液癌；表达于胰管腺癌，而不表达于胰岛细胞癌。在不同类型的肿瘤组织中，CLDN18.2的表达比例也不相同，CLDN18.2在胃腺癌、食管腺癌、胰腺癌、卵巢粘液癌中的表达率分别约为77％、78％、80％、24％；CLDN18.2不仅表达在原发灶，转移灶中同样高度表达。当前处于研究过程中的CLDN18.2抗体包括IMAB362(Zolbetuximab)等。
[0004]胰腺癌由于其特点，临床前针对性的肿瘤模型制备也比较困难(接种后容易产生内部溃烂)，常用的CDX模型不易制备；而免疫重构模型(PBMC和CD34+)模型更适合于T细胞介导的免疫反应(如PD1/PDL1)。以上免疫重构模型不适合评价CLDN18.2抗体；同时CLDN18.2抗体药效作用发挥与细胞表面CLDN18.2表达丰度相关，因此野生型胰腺癌细胞并不适合移植评估。
[0005]因此亟需提供一种适合评价CLDN18.2抗体药效的胰腺癌模型及其构建方法和应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是为了解决以上现有技术的不足而提供一种小鼠胰腺癌模型及其构建方法和应用。
[0007]本专利技术的技术方案为：
[0008]一种小鼠胰腺癌模型，其特征在于，所述小鼠胰腺癌模型是通过用rhIL-15介导人PBMC-免疫重构胰腺癌MiaPaca2/h18.2而成的。
[0009]本专利技术提供了一种小鼠胰腺癌模型的构建方法，包括以下步骤：
[0010](1)细胞转染：用人CLDN18.2基因转染MiaPaca2细胞，构建MiaPaca2/h18.2细胞；
[0011](2)细胞培养：将MiaPaca2/h18.2细胞用完全培养基进行培养，收集对数生长期的细胞，离心制备细胞悬浮液；
[0012](3)细胞接种：取步骤(2)制备的细胞悬浮液接种于小鼠单侧腋窝皮下，选取肿瘤体积生长至100
±
50mm3的小鼠；
[0013](4)PBMC移植：将步骤(3)选取的小鼠静脉注射人PBMC，接种人PBMC后的小鼠每天腹腔注射rhIL-15，小鼠胰腺癌模型构建完成。
[0014]优选地，步骤(2)中所述的完全培养基为含10
±
1％FBS、800
±
50μg/mL G418的RPMI-1640培养基。
[0015]优选地，步骤(2)中所述的细胞悬浮液的浓度为(2.5
±
0.5)
×
107个/mL。
[0016]更为优选地，步骤(2)中所述的细胞悬浮液的浓度为(2.5
±
0.2)
×
107个/mL。
[0017]优选地，步骤(3)中所述的取步骤(2)制备的细胞悬浮液以0.2
±
0.05mL/只的量接种于小鼠单侧腋窝皮下。
[0018]更为优选地，步骤(3)中所述的取步骤(2)制备的细胞悬浮液以0.2mL/只的量接种于小鼠单侧腋窝皮下。
[0019]优选地，步骤(3)中所述的选取肿瘤体积生长至100
±
20mm3的小鼠。
[0020]优选地，步骤(4)中所述的静脉注射人PBMC的量为(1.5
±
0.3)
×
107个/只。
[0021]更为优选地，步骤(4)中所述的静脉注射人PBMC的量为(1.5
±
0.1)
×
107个/只。
[0022]优选地，步骤(4)中所述的接种人PBMC后的小鼠每天腹腔注射1
±
0.2μg/只的rhIL-15。
[0023]更为优选地，步骤(4)中所述的接种人PBMC后的小鼠每天腹腔注射1μg/只的rhIL-15。
[0024]本专利技术还提供了如上所述的小鼠胰腺癌模型在药物药效评价中的应用。
[0025]进一步地，所述药物是针对CLDN18.2靶点的抗体。
[0026]有益效果：
[0027]本专利技术是结合CLDN18.2抗体的作用机制，通过多次试验，构建了野生株工程化的MiaPaca-2/h18.2+PBMC+IL-15肿瘤模型，能够反映药物作用机制临床前药效。
[0028]针对CLDN18.2靶点的药物，在本专利技术的高表达人CLDN18.2胰腺癌模型中能够对抑瘤效果进行验证，为药物临床前药效研究提供新的评价模型，为胰腺癌相关药物的评价研究提供新的选择。
附图说明
[0029]图1为各组小鼠的肿瘤体积变化图；
[0030]图2为各组小鼠的相对肿瘤体积变化图；
[0031]图3为各组小鼠的相对肿瘤增殖率(T/C，％)变化图；
[0032]图4为各组小鼠的肿瘤体积抑制率(IR
TV
，％)变化图。
具体实施方式
[0033]下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条
件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0034]实施例1小鼠胰腺癌模型的构建
[0035]1、试验试剂、细胞株及动物：
[0036]重组人白介素15(rhIL-15)：购自金斯瑞生物科技有限公司，批号：P50131507；
[0037]MiaPaca2细胞：来自American Type Culture Collection；
[0038]pEZ-M02质粒：购自GeneCopoeia，货号EZ007；
[0039]人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)：新本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小鼠胰腺癌模型，其特征在于，所述小鼠胰腺癌模型是通过用rhIL-15介导人PBMC-免疫重构胰腺癌MiaPaca2/h18.2而成的。2.如权利要求1所述的一种小鼠胰腺癌模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)细胞转染：用人CLDN18.2基因转染MiaPaca2细胞，构建MiaPaca2/h18.2细胞；(2)细胞培养：将MiaPaca2/h18.2细胞用完全培养基进行培养，收集对数生长期的细胞，离心制备细胞悬浮液；(3)细胞接种：取步骤(2)制备的细胞悬浮液接种于小鼠单侧腋窝皮下，选取肿瘤体积生长至100
±
50mm3的小鼠；(4)PBMC移植：将步骤(3)选取的小鼠静脉注射人PBMC，接种人PBMC后的小鼠每天腹腔注射rhIL-15，小鼠胰腺癌模型构建完成。3.如权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述的完全培养基为含10
±
1％FBS、800
±
50μg/mL G418的RPMI-1640培养基。4.如权利要求2所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢建丰，袁云霞，吕越峰，王东方，刘丽勤，方雅，李茗，郑海亮，
申请(专利权)人：江苏奥赛康药业有限公司，
类型：发明
国别省市：