急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法技术

发明专利技术公开了一种湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的制备方式及其评价方法，包括以下步骤a、选用180

【技术实现步骤摘要】
急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法


[0001]本专利技术属于中医领域的关于病症动物模型构建
，具体的说，公开了一种湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法。

技术介绍

[0002]古代医家对GA的病因病机和症状做出了探讨，为后世医学家提供了理论依据。传统医学将GA纳入痹证，《素问
·
痹论篇》明确指出“风、寒、湿三气”为其外因，认为风寒湿邪滞留经脉乃其病机。《丹溪心法》中指出“彼痛风者，大率因血得热
……
寒凉外搏，热血得寒，污浊凝涩，所以作痛”。《丹溪心法
·
痛风附肢节痛》指出“遍身骨节疼痛，状如虎咬，或赤肿灼热，痛有常处，或浑身壮热”，这与GA急性发作症状非常吻合。
[0003]古代医家将GA视为“富贵病”“帝王将相病”，现在随着中国经济水平的提高，人们的饮食和生活条件均发生了结构性的改变，因此GA的患病率逐年上升。94版《中医病症诊断疗效标准》根据病因病机将GA症型概括为四型：湿热蕴结型、瘀热阻滞型、痰浊阻滞型、肝肾阴虚型，其中湿热蕴结型的主症为患处卒然红肿热痛、拒按，触之灼热，得热则剧、得凉则舒，兼症伴口渴，舌红，苔黄腻，脉滑数。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模及评价方法。
[0005]具体的技术方案为：
[0006]一种湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模方法，包括如下步骤：/>[0007]S1.选用180
±
20g、6周龄、健康的雄性SPF级SD大鼠，饲以高脂高蛋白高糖饲料，自由进食，自由饮用200g
·
l
‑1蜂蜜水，猪脂和白酒隔日交替灌胃连续21天，其中白酒选用40
‑
60
°
之间，本实施例选用52
°
红星二锅头，同时置于人工气候箱中8小时/天，所述人工气候箱的温度为32
±
2℃，相对湿度95％，21天后获得湿热证大鼠模型；
[0008]S2.取步骤S1获得的湿热证大鼠模型，在大鼠右踝关节两侧骨突部位进针，斜向下45
°
方向插入至胫骨肌腱内侧，向肢体远端方向注射MSU悬浮液，制备湿热证急性痛风性关节炎大鼠病证结合模型；
[0009]S3.所述步骤S2中的湿热证急性痛风性关节炎大鼠模型造模完成后，右踝关节出现红、肿、热、痛体征，三足跛行步态，红外热成像分析踝关节温度升高，CatWalk XT10.5动物步态分析及炎性因子与正常对照比较差异显著，则湿热证急性痛风性关节炎病证结合模型造模成功。
[0010]所述高脂高蛋白高糖饲料的成分为，按重量份表示，氯化胆碱0.2份，玉米25份，小麦35.5份，蜜糖酵母2.5份，磷酸氢钙2份，石粉1份，食盐0.3份，油2.5份，鱼粉20份，酪蛋白10份，另添加黄油15份，胆固醇1份，猪胆盐0.1份，绵砂糖15份。
[0011]所述步骤S2中，所述MSU悬浮液的制备方法为：用400ml超纯水加入4.5ml浓度为
0.5mol
·
l
‑
1的NaOH溶液中，煮沸后加入2g尿酸搅拌溶解；待温度降至60℃时用NaOH调PH至8.9，冷却，然后放置4℃冰箱冷藏过夜，盛入蒸发皿中经60℃干燥烘箱干燥，经高温灭菌后得到尿酸钠晶体粉末，用刮勺将其从蒸发皿中刮取下来用碾钵碾碎后用孔径250um的金属网筛过滤，然后用无菌EP管收集；并通过从急性痛风发作患者手足部位取出的痛风石在光学显微镜下与我们制备获取的MSU晶体鉴定是否一致，要最大程度的模拟人体内的痛风石的状态。用万分之一天平称取所需用量，以无菌生理盐水配成浓度为20mg
·
mL
‑
1MSU混悬液，涡旋振荡，直至混悬液能被6号注射器针头吸取。
[0012]所述置于人工气候箱高温高湿环境的具体要求为：每日上午9点至下午5点将大鼠置于温度为32
±
2℃，相对湿度95％的人工气候箱中，每天统一时间为8小时。
[0013]一种湿热证急性痛风性关节炎病证结合大鼠模型的评价方法，选用以下指标，从三个维度对建立的湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型进行湿热证的证验证：
[0014]第一维，根据人的证候诊断的四诊合参表现寻找大鼠一般状况指标对模型鼠进行定性评价，包括大鼠的证候表征神态，症状评分为：
[0015]I.精神状态
[0016]精神正常：喜动喜嗅，眼光有神，0分；
[0017]轻度异常：轻度倦怠，打斗减少，1分；
[0018]中度异常：精神倦怠，2分；
[0019]精神萎靡：弓背，蜷卧，自发活动明显减少，目无光彩，3分；
[0020]II毛色
[0021]米白色，均匀细密，柔顺有光泽，0分；
[0022]白中稍有黄色，稍乱，稍干燥，1分；
[0023]白中伴大部分黄色，乱，干燥，2分；
[0024]满目皆有黄色，毛枯躁，脏乱，3分；
[0025]III粪便
[0026]成形，粪质正常0分；
[0027]轻度异常：粪便软，含水量增加，可见反光，1分；
[0028]中度异常：粪便稀溏，部分不成形，2分；
[0029]明显异常：粪便稀溏，完全不成形，3分；
[0030]IV尿色
[0031]清亮透明,0分；
[0032]轻度异常：尿色清亮稍黄，1分；
[0033]中度异常：尿色淡黄，尿量减少，2分；
[0034]重度异常：尿色深黄，尿量明显减少，3分；
[0035]V阴囊颜色
[0036]正常没有松弛，0分；
[0037]阴囊颜色正常或略偏红，阴囊褶皱消失，1分；
[0038]阴囊颜色潮红，松弛下垂2分。
[0039]第二维为定量评价，确定以第1、8、15、21天中同一时刻用电子天平将每只大鼠称量三次并取平均值作为该大鼠该天体重数据；
[0040]第三维为微观指标和滑膜病理学改变，血清学指标：a.“湿”相关指标，水液代谢异常指标：大鼠尿液水通道蛋白
‑
2(AQP2)；b.“热”相关指标，热休克蛋白70(HSP70)的测定；3.免疫
‑
炎症反应指标检测，白细胞介素1β(IL
‑
1β)；
[0041]S5.对以上指标进行观察及统计学分析，建立该病证结合大鼠模型“病”和“证”的评价体系：采用SPSS 20.0统计软件处理，各组指标数据均以(x
±
s)表示，数据用计量资料先进行正态检验，正态分布资料采用单因素方差分析，非正态分布资料先转换成正态分布再用单因素方差分析；进行组间比较，以P＜0.05为差异有统计学意义。
[0042]与现有技术相比，本专利技术的优点在于：
[0043]1.本专利技术提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.选用180
±
20g、6周龄、健康的雄性SPF级SD大鼠，饲以高脂高蛋白高糖饲料，自由进食，自由饮用200g
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l
‑1蜂蜜水，猪脂和白酒隔日交替灌胃连续21天，其中白酒选用40
‑
60
°
之间，本实施例选用52
°
红星二锅头，同时置于人工气候箱中8小时/天，所述人工气候箱的温度为32
±
2℃，相对湿度95%，21天后获得湿热证大鼠模型；S2.取步骤S1获得的湿热证大鼠模型，在大鼠右踝关节两侧骨突部位进针，斜向下45
°
方向插入至胫骨肌腱内侧，向肢体远端方向注射MSU悬浮液，制备湿热证急性痛风性关节炎大鼠病证结合模型；S3.所述步骤S2中的湿热证急性痛风性关节炎大鼠模型造模完成后，右踝关节出现红、肿、热、痛体征，三足跛行步态，红外热成像分析踝关节温度升高，CatWalk XT10.5动物步态分析及炎性因子与正常对照比较差异显著，则湿热证急性痛风性关节炎病证结合模型造模成功。2.根据权利要求1所述的湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模方法，其特征在于，所述高脂高蛋白高糖饲料的成分为，按重量份表示，氯化胆碱0.2份，玉米25份，小麦35.5份，蜜糖酵母2.5份，磷酸氢钙2份，石粉1份，食盐0.3份，油2.5份，鱼粉20份，酪蛋白10份，另添加黄油15份，胆固醇1份，猪胆盐0.1份，绵砂糖15份。3.根据权利要求1所述的湿热证急性痛风性关节炎病症结合大鼠模型的造模方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述MSU悬浮液的制备方法为：用400ml超纯水加入4.5ml浓度为0.5mol
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1的NaOH溶液中，煮沸后加入2g尿酸搅拌溶解；待温度降至60℃时用NaOH调PH至8.9，冷却，然后放置4℃冰箱冷藏过夜，盛入蒸发皿中经60℃干燥烘箱干燥，经高温灭菌后得到尿酸钠晶体粉末，用刮勺将其从蒸发皿中刮取下来用碾钵碾碎后用孔径250um的金属网筛过滤，然后用无菌EP管收集；并通过从急性痛风发作患者手足部位取出的痛风石在光学显微镜下与我们制备获取的MSU晶体鉴定是否一致，要最大程度的模拟人体内的痛风石的状态；用万分之一天平称取所需用量，以无菌生理盐水配成浓度为20mg
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1M...

【专利技术属性】
技术研发人员：李华南，
申请(专利权)人：江西中医药大学附属医院，
类型：发明
国别省市：