抗α-SMA蛋白单克隆抗体、细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，提供了一种抗α

【技术实现步骤摘要】
抗
α
‑
SMA蛋白单克隆抗体、细胞系及其应用


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，特别涉及抗α
‑
SMA蛋白单克隆抗体、细胞系及其应用。

技术介绍

[0002]肌动蛋白是一种既有收缩能力,又能聚合成微丝含量丰富的细胞内蛋白,而微丝对骨骼细胞的结构、细胞的能动性及形成是必不可少的,在脊椎动物的细胞中至少有6种肌动蛋白,α
‑
SMA是其中之一。由ACTA2基因编码，也被称为α
‑
肌动蛋白
‑
2(Actin Alpha 2,ACTA2)。α
‑
SMA(ACTA2)(和所有actins一样)极其保守，几乎在所有哺乳动物中都有发现。在人类中，α
‑
SMA(ACTA2)由位于10q22
‑
q24的ACTA2基因编码,由377个氨基酸残基构成,相对分子质量为4.2
×
104,广泛分布于多种肌型细胞中。
[0003]α
‑
SMA是属于肌动蛋白家族的微丝。其是控制细胞形态的收缩肌特异性异丝氨酸蛋白酶和运动性，并且主要在血管中表达平滑肌细胞。另外，表达a
‑
SMA与肌成纤维细胞相关。血管平滑肌细胞存在于血管壁中膜，是血管壁的主要细胞成分之一，也是决定血管活性、血管构型及维持血管张力的重要因素。肌动蛋白是细胞骨架微丝的基本成分，其中α
‑
SMA主要分布于肌肉细胞中，而特异性在血管平滑肌中表达的α
‑
SMA是分化成熟的血管平滑肌细胞中含量最丰富的蛋白质。因此，a
‑
SMA可用来反映血管平滑肌细胞数量及其收缩能力的改变，肌动蛋白含量对VSMC的收缩能力具有巨大影响。此外，α
‑
SMA还与机体各种组织如心肌组织、肺组织、肾组织的成纤维化密切相关。α
‑
SMA在肾脏、皮肤、肌腱、心脏等损伤时有表达，其参与纤维化的发生发展，并与TGF
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β1有关。在心脏损伤过程中，α
‑
SMA还可通过血管生长调节等途径促进动脉粥样硬化斑块的生长，从而参与冠心病的发生发展过程。在大量细胞因子及生长因子作用下，成纤维细胞表达大量α
‑
SMA并分泌大量胶原蛋白，引起心脏纤维化。
[0004]α
‑
SMA蛋白的四级空间结构上包含了多个可结合的糖蛋白配体，其可以通过影响癌细胞相关恶性肿瘤信号通路蛋白的转录或者激活等方面发挥作用，加剧癌细胞的生物学特性的改变，导致癌细胞的DNA扩增或者癌基因相关蛋白的磷酸化修饰的改变，促进患者癌细胞的侵袭或者转移的发生。已经证实的是，α
‑
SMA蛋白能够在促进甲状腺癌、卵巢癌或者肝癌等多种恶性肿瘤的临床分期的进展、癌组织的浸润或者组织学分型的恶化等方面发挥了一定的促进作用。α
‑
平滑肌肌动蛋白(α
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smooth muscle actin,α
‑
SMA)是平滑肌最常用的标志物，对平滑肌有比较高的特异性，敏感性也比较高。

技术实现思路

[0005]专利技术人提供了一种抗α
‑
SMA蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。
[0006]进一步地，所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。
[0007]进一步地，所述单克隆抗体制备过程中，免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示
核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。
[0008]进一步地，所述单克隆抗体特异性识别人α
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SMA蛋白。
[0009]进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO.22314的杂交瘤细胞系产生。所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系8E5D12A9，分类命名为：小鼠杂交瘤细胞系，该细胞系已于2021年04月29日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
[0010]进一步地，所述抗α
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SMA蛋白为小鼠IgG1亚型单克隆抗体。
[0011]专利技术人还提供了一种抗α
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SMA蛋白单克隆抗体的制备方法，其免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。
[0012]专利技术人还提供了一株分泌抗α
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SMA蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系8E5D12A9，所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO.22314。
[0013]专利技术人还提供以上任一所述的抗α
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SMA蛋白单克隆抗体在人α
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SMA蛋白免疫检测中的用途。
[0014]进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。
[0015]专利技术人再提供了一种人α
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SMA蛋白免疫检测试剂，所述免疫检测试剂内含有以上任一的抗α
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SMA蛋白单克隆抗体为有效成分。
[0016]区别于现有技术，上述技术方案依据α
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SMA蛋白的结构、抗原性、组成氨基酸的亲疏水性以及二级结构，上述技术方案选取α
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SMA蛋白第2位至第300位氨基酸片段和其对应的核苷酸片段，通过大肠杆菌进行重组表达,对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和克隆，获得高效分泌抗α
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SMA蛋白单克隆抗体的单克隆细胞系8E5D12A9,并对单克隆细胞系8E5D12A9进行体外培养，并获得由该细胞系所分泌的抗α
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SMA蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达α
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SMA蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。
附图说明
[0017]图1为实施例3纯化后α
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SMA单克隆抗体的电泳结果图；M为分子量标记。
[0018]图2为平滑肌肉瘤免疫组化染色结果图；其中左为8E5D12A9分泌的的α
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SMA，右为市售α
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SMA(1A4)。
具体实施方式
[0019]实施例1重组α
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SMA蛋白片段的制备
[0020]一、抗原片段选择
[0021]从Uniprot数据库(http://www.uniprot.org)中选择编号P62736的α
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SMA蛋白序列作为标准序列。本专利技术选取人α
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SMA蛋白第2位至第300位氨基酸片段作为抗原，根据其对应碱基序列(SEQ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗α
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SMA蛋白单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体制备过程中，免疫小鼠所用的抗原为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列编码，经由大肠杆菌重组表达的重组蛋白。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体特异性识别人α
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SMA蛋白。5.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO.22314的杂交瘤细胞系产生。6.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于,所...

【专利技术属性】
技术研发人员：‑，
申请(专利权)人：福州迈新生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：