莲DNA品种分子鉴定的MNP核心引物组合及其应用制造技术

本发明专利技术公开了莲DNA品种分子鉴定的MNP核心引物组合及其应用。本发明专利技术基于莲重测序数据，结合高通量测序技术筛选得到了用于检测莲多态性MNP标记位点的525对MNP核心引物组合，其核苷酸序列为SEQ ID No.1

【技术实现步骤摘要】
莲DNA品种分子鉴定的MNP核心引物组合及其应用


[0001]本专利技术涉及用于植物品种分子鉴定的引物组合，尤其涉及莲DNA品种分子鉴定的MNP核心引物组合及其在莲DNA品种分子鉴定中的应用，属于莲DNA品种分子鉴定领域。

技术介绍

[0002]莲(Nelumbo nucifera L.)为睡莲科莲属蔬菜作物，中国最具特色的一种水生园艺植物，其根状茎，即藕或藕带作蔬菜食用，鲜莲子(果实)作水果食用，花(荷花)是中国十大名花之一，莲也是加工产品最多的园艺植物之一。中国藕莲栽培面积约40万hm2，子莲栽培面积约10万hm2，主要分布在长江流域、珠江流域和黄河流域，其中以长江中下游地区种植面积最大；中国台湾地区也有一定面积的莲藕种植。
[0003]中国莲栽培历史悠久，种质资源丰富，中国科学院武汉植物研究所收集了莲种质资源125份，武汉市农业科学院蔬菜研究所1980年开始收集莲藕等水生蔬菜资源，并在1990年建立了“国家种质武汉水生蔬菜资源圃”，截止目前资源圃保存国内20多个省200多个市县及美国、日本、印度、泰国等国家的莲种质资源741份。
[0004]作物种质资源是种质创新和新品种选育的物质基础，中国莲品种省级品种审(认)定工作始于20世纪90年代初期，湖北、江西、福建、浙江、湖南、江苏等单位先后审(认)定藕莲品种 14个，子莲品种12个。花莲资源收集和育种开始于20世纪60年代，中国科学院武汉植物研究所、武汉市园林科学研究所最早开始花莲育种工作，在花色、花型、花姿、花数、株型等方面选育出大量多样化的品种。随着育种单位的增加，花莲品种数量急速增长，据不完全统计，目前有花莲品种800～1000个。较大规模的莲品种数量，增加了品种管理的难度，近几年随着莲品种商业化地发展，在原品种的基础上仅少数性状的派生新品种增多，品种间的遗传差异逐渐缩小，有效地管理和鉴定庞大的莲品种成为品种管理的难题。
[0005]传统的田间种植观察鉴定、蛋白质电泳等方法，由于区分能力有限，已不能满足大样本、精确、快速鉴定的需要。DNA指纹鉴定技术由于不受环境和人为因素影响，且具有快速和准确的特性，已成为目前莲鉴定的重要手段。DNA指纹是指不同品种间遗传物质DNA碱基的排列、组分和长度不同所呈现的各自特有的DNA序列，具有特异性。早期传统的DNA指纹鉴定技术有 RFLP、RAPD、ISSR、SRAP标记法技术，这些标记具有分型不稳定、基因型过多无法分辨和非共显性等缺陷，基本上没有被纳入品种鉴定中。经过近几十年的发展，最终只有SSR和SNP标记鉴定技术被保留并应用品种鉴定中。SSR标记法的有主要优点是多态性高和共显性，可在普通实验室进行电泳检测。目前大部分的植物指纹图谱和品种鉴定标准都是基于SSR开发，但SSR 标记法主要依据片段大小进行检测，为了进行品种比较，往往需要将待测样本与对照样本在同一电泳胶上进行平行检测。当涉及到大规模样本检测时，无法做到同时检测成百上千的已知品种，并且涉及到近似品种筛选、品种权认定和实质派生品种判断时，不具有现实的可行性。
[0006]基于SSR标记法存在的问题，SNP标记法在近年来被逐步应用于植物品种鉴定中。SNP标记法主要是获得单个核苷酸酸碱基序列，因此不需要对照平行实验。然而SNP也有一
些自身固有的缺陷，如SNP标记是二态性标记，单个标记区分能力有限，所以需要检测大量的SNP位点才能实现精确分型，因而涉及到高通量芯片技术。基因芯片技术的生产工艺较为复杂，生产成本较高，不太适合普通实验和小作物等中使用，推广力度有限。
[0007]MNP多态性是指在基因组水平上有多个核苷酸引起的多态性。MNP标记法技术主要是基于高通量测序技术开发的检测特定基因组上一段区域内的由多个核苷酸多肽性的标记法技术。与 SSR标记和SNP标记法相比，MNP标记法在构建植物指纹图谱和品种鉴定方面具有以下优势： (1)等位基因丰富，单个MNP位点上有2
n
种等位基因，高于SSR和SNP；(2)MNP获得的是碱基序列，不需要平行对照实验；(3)MNP标记的等位基因型丰富，品种区分能力强，只需要少量的MNP标记就能实现品种鉴定，减少了检测错误率；(4)可定量检测，基于MNP位点利用二代高通量测序重复抽样可对特定等位基因进行定量分析；(5)效率高，利用二代高通量测序仪可实现成百上千份样本的数百个MNP位点分型；(6)可进行实质性派生品种检测。
[0008]鉴于以上优点和特性，MNP标记法已广泛应用于水稻、玉米、番茄、辣椒等作物中。
[0009]目前在莲中尚未有较为广泛应用的DNA指纹图谱以及品种鉴定标准，而MNP标记法的开发、筛选和应用在植物中具有较好的应用基础。
[0010]MNP标记主要基于参考基因组序列开发，根据已报道的莲重测数据和测得的差异性样本材料的重测序数据可以挖掘大规模的多态性MNP位点，再根据多态性MNP位点遗传多样性差异可筛选多态性最大、覆盖程度的最广的一套MNP位点，通过MNP位点两侧的保守序列可以设计MNP检测引物。根据研究目的不同MNP标记可筛选500至1000个左右即可完成大规模植物 DNA指纹图图谱构建、真实性鉴定、遗传多样性分析、分子育种等工作。

技术实现思路

[0011]本专利技术的目的之一是提供莲DNA品种分子鉴定的MNP核心引物组合；
[0012]本专利技术的目的之二是将所述的MNP核心引物组合应用于莲DNA品种分子鉴定；
[0013]本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的：
[0014]本专利技术一方面提供了莲DNA品种分子鉴定的MNP核心引物组合，所述的引物组合为位点编号AMPL3700001～AMPL3700525对应的525对引物，所述的525对MNP核心引物的核苷酸序列分别为SEQ ID No.1
‑
SEQ ID No.1050所示。
[0015]本专利技术另一方面提供了将所述的MNP核心引物组合应用于莲DNA品种分子鉴定等方面，包括用于构建莲DNA指纹数据库、检测莲品种真实性、莲种质资源遗传多样性分析或莲分子育种。
[0016]作为一种优选的具体实施方案，本专利技术提供了将所述的MNP核心引物组合应用于构建莲 DNA指纹数据库，包括利用本专利技术的525对MNP核心引物组合对待测莲品种的基因组DNA进行第一轮混合PCR扩增；采用525对MNP引物构成的组合加上二代测序接头引物和标签序列后对第一轮混合PCR扩增的回收产物进行第二轮混合PCR扩增，对第二轮扩增产物回收和纯化后进行上机测序，测序结果比对所述的莲参考基因组，获取待测莲品种在所述525个MNP位点上的基因组数据，即构成莲的DNA指纹数据库。
[0017]作为一种优选的具体实施方案，本专利技术提供了将所述的MNP核心引物组合应用于检测莲品种真实性，包括：利用所述的525对MNP引物对待测莲样本和对照莲样本的基因组
DNA进行扩增和测序，从而获取待测莲样本和对照莲样本各自在525个MNP位点的基因型数据并进行品种间的数据比较，获得差异位点百分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.莲MNP核心引物组合，其特征在于，由以下525对引物组成：引物对1：由核苷酸序列为SEQ ID No.1所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.2所示的反向引物组成；引物对2：由核苷酸序列为SEQ ID No.3所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.4所示的反向引物组成；引物对3：由核苷酸序列为SEQ ID No.5所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.6所示的反向引物组成；引物对4：由核苷酸序列为SEQ ID No.7所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.8所示的反向引物组成；引物对5：由核苷酸序列为SEQ ID No.9所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.10所示的反向引物组成；引物对6：由核苷酸序列为SEQ ID No.11所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.12所示的反向引物组成；引物对7：由核苷酸序列为SEQ ID No.13所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.14所示的反向引物组成；引物对8：由核苷酸序列为SEQ ID No.15所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.16所示的反向引物组成；引物对9：由核苷酸序列为SEQ ID No.17所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.18所示的反向引物组成；引物对10：由核苷酸序列为SEQ ID No.19所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.20所示的反向引物组成；引物对11：由核苷酸序列为SEQ ID No.21所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.22所示的反向引物组成；引物对12：由核苷酸序列为SEQ ID No.23所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.24所示的反向引物组成；引物对13：由核苷酸序列为SEQ ID No.25所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.26所示的反向引物组成；引物对14：由核苷酸序列为SEQ ID No.27所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.28所示的反向引物组成；引物对15：由核苷酸序列为SEQ ID No.29所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.30所示的反向引物组成；引物对16：由核苷酸序列为SEQ ID No.31所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.32所示的反向引物组成；引物对17：由核苷酸序列为SEQ ID No.33所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.34所示的反向引物组成；引物对18：由核苷酸序列为SEQ ID No.35所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.36所示的反向引物组成；引物对19：由核苷酸序列为SEQ ID No.37所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.38所示的反向引物组成；
No.78所示的反向引物组成；引物对40：由核苷酸序列为SEQ ID No.79所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.80所示的反向引物组成；引物对41：由核苷酸序列为SEQ ID No.81所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.82所示的反向引物组成；引物对42：由核苷酸序列为SEQ ID No.83所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.84所示的反向引物组成；引物对43：由核苷酸序列为SEQ ID No.85所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.86所示的反向引物组成；引物对44：由核苷酸序列为SEQ ID No.87所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.88所示的反向引物组成；引物对45：由核苷酸序列为SEQ ID No.89所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.90所示的反向引物组成；引物对46：由核苷酸序列为SEQ ID No.91所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.92所示的反向引物组成；引物对47：由核苷酸序列为SEQ ID No.93所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.94所示的反向引物组成；引物对48：由核苷酸序列为SEQ ID No.95所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.96所示的反向引物组成；引物对49：由核苷酸序列为SEQ ID No.97所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.98所示的反向引物组成；引物对50：由核苷酸序列为SEQ ID No.99所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.100所示的反向引物组成；引物对51：由核苷酸序列为SEQ ID No.101所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.102所示的反向引物组成；引物对52：由核苷酸序列为SEQ ID No.103所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.104所示的反向引物组成；引物对53：由核苷酸序列为SEQ ID No.105所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.106所示的反向引物组成；引物对54：由核苷酸序列为SEQ ID No.107所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.108所示的反向引物组成；引物对55：由核苷酸序列为SEQ ID No.109所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.110所示的反向引物组成；引物对56：由核苷酸序列为SEQ ID No.111所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.112所示的反向引物组成；引物对57：由核苷酸序列为SEQ ID No.113所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.114所示的反向引物组成；引物对58：由核苷酸序列为SEQ ID No.115所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.116所示的反向引物组成；
No.156所示的反向引物组成；引物对79：由核苷酸序列为SEQ ID No.157所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.158所示的反向引物组成；引物对80：由核苷酸序列为SEQ ID No.159所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.160所示的反向引物组成；引物对81：由核苷酸序列为SEQ ID No.161所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.162所示的反向引物组成；引物对82：由核苷酸序列为SEQ ID No.163所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.164所示的反向引物组成；引物对83：由核苷酸序列为SEQ ID No.165所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.166所示的反向引物组成；引物对84：由核苷酸序列为SEQ ID No.167所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.168所示的反向引物组成；引物对85：由核苷酸序列为SEQ ID No.169所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.170所示的反向引物组成；引物对86：由核苷酸序列为SEQ ID No.171所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.172所示的反向引物组成；引物对87：由核苷酸序列为SEQ ID No.173所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.174所示的反向引物组成；引物对88：由核苷酸序列为SEQ ID No.175所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.176所示的反向引物组成；引物对89：由核苷酸序列为SEQ ID No.177所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.178所示的反向引物组成；引物对90：由核苷酸序列为SEQ ID No.179所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.180所示的反向引物组成；引物对91：由核苷酸序列为SEQ ID No.181所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.182所示的反向引物组成；引物对92：由核苷酸序列为SEQ ID No.183所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.184所示的反向引物组成；引物对93：由核苷酸序列为SEQ ID No.185所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.186所示的反向引物组成；引物对94：由核苷酸序列为SEQ ID No.187所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.188所示的反向引物组成；引物对95：由核苷酸序列为SEQ ID No.189所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.190所示的反向引物组成；引物对96：由核苷酸序列为SEQ ID No.191所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.192所示的反向引物组成；引物对97：由核苷酸序列为SEQ ID No.193所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.194所示的反向引物组成；
No.234所示的反向引物组成；引物对118：由核苷酸序列为SEQ ID No.235所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.236所示的反向引物组成；引物对119：由核苷酸序列为SEQ ID No.237所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.238所示的反向引物组成；引物对120：由核苷酸序列为SEQ ID No.239所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.240所示的反向引物组成；引物对121：由核苷酸序列为SEQ ID No.241所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.242所示的反向引物组成；引物对122：由核苷酸序列为SEQ ID No.243所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.244所示的反向引物组成；引物对123：由核苷酸序列为SEQ ID No.245所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.246所示的反向引物组成；引物对124：由核苷酸序列为SEQ ID No.247所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.248所示的反向引物组成；引物对125：由核苷酸序列为SEQ ID No.249所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.250所示的反向引物组成；引物对126：由核苷酸序列为SEQ ID No.251所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.252所示的反向引物组成；引物对127：由核苷酸序列为SEQ ID No.253所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.254所示的反向引物组成；引物对128：由核苷酸序列为SEQ ID No.255所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.256所示的反向引物组成；引物对129：由核苷酸序列为SEQ ID No.257所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.258所示的反向引物组成；引物对130：由核苷酸序列为SEQ ID No.259所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.260所示的反向引物组成；引物对131：由核苷酸序列为SEQ ID No.261所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.262所示的反向引物组成；引物对132：由核苷酸序列为SEQ ID No.263所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.264所示的反向引物组成；引物对133：由核苷酸序列为SEQ ID No.265所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.266所示的反向引物组成；引物对134：由核苷酸序列为SEQ ID No.267所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.268所示的反向引物组成；引物对135：由核苷酸序列为SEQ ID No.269所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.270所示的反向引物组成；引物对136：由核苷酸序列为SEQ ID No.271所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.272所示的反向引物组成；
No.312所示的反向引物组成；引物对157：由核苷酸序列为SEQ ID No.313所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.314所示的反向引物组成；引物对158：由核苷酸序列为SEQ ID No.315所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.316所示的反向引物组成；引物对159：由核苷酸序列为SEQ ID No.317所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.318所示的反向引物组成；引物对160：由核苷酸序列为SEQ ID No.319所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.320所示的反向引物组成；引物对161：由核苷酸序列为SEQ ID No.321所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.322所示的反向引物组成；引物对162：由核苷酸序列为SEQ ID No.323所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.324所示的反向引物组成；引物对163：由核苷酸序列为SEQ ID No.325所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.326所示的反向引物组成；引物对164：由核苷酸序列为SEQ ID No.327所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.328所示的反向引物组成；引物对165：由核苷酸序列为SEQ ID No.329所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.330所示的反向引物组成；引物对166：由核苷酸序列为SEQ ID No.331所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.332所示的反向引物组成；引物对167：由核苷酸序列为SEQ ID No.333所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.334所示的反向引物组成；引物对168：由核苷酸序列为SEQ ID No.335所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.336所示的反向引物组成；引物对169：由核苷酸序列为SEQ ID No.337所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.338所示的反向引物组成；引物对170：由核苷酸序列为SEQ ID No.339所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.340所示的反向引物组成；引物对171：由核苷酸序列为SEQ ID No.341所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.342所示的反向引物组成；引物对172：由核苷酸序列为SEQ ID No.343所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.344所示的反向引物组成；引物对173：由核苷酸序列为SEQ ID No.345所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.346所示的反向引物组成；引物对174：由核苷酸序列为SEQ ID No.347所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.348所示的反向引物组成；引物对175：由核苷酸序列为SEQ ID No.349所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.350所示的反向引物组成；
No.390所示的反向引物组成；引物对196：由核苷酸序列为SEQ ID No.391所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.392所示的反向引物组成；引物对197：由核苷酸序列为SEQ ID No.393所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.394所示的反向引物组成；引物对198：由核苷酸序列为SEQ ID No.395所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.396所示的反向引物组成；引物对199：由核苷酸序列为SEQ ID No.397所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.398所示的反向引物组成；引物对200：由核苷酸序列为SEQ ID No.399所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.400所示的反向引物组成；引物对201：由核苷酸序列为SEQ ID No.401所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.402所示的反向引物组成；引物对202：由核苷酸序列为SEQ ID No.403所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.404所示的反向引物组成；引物对203：由核苷酸序列为SEQ ID No.405所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.406所示的反向引物组成；引物对204：由核苷酸序列为SEQ ID No.407所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.408所示的反向引物组成；引物对205：由核苷酸序列为SEQ ID No.409所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.410所示的反向引物组成；引物对206：由核苷酸序列为SEQ ID No.411所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.412所示的反向引物组成；引物对207：由核苷酸序列为SEQ ID No.413所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.414所示的反向引物组成；引物对208：由核苷酸序列为SEQ ID No.415所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.416所示的反向引物组成；引物对209：由核苷酸序列为SEQ ID No.417所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.418所示的反向引物组成；引物对210：由核苷酸序列为SEQ ID No.419所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.420所示的反向引物组成；引物对211：由核苷酸序列为SEQ ID No.421所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.422所示的反向引物组成；引物对212：由核苷酸序列为SEQ ID No.423所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.424所示的反向引物组成；引物对213：由核苷酸序列为SEQ ID No.425所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.426所示的反向引物组成；引物对214：由核苷酸序列为SEQ ID No.427所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.428所示的反向引物组成；
No.468所示的反向引物组成；引物对235：由核苷酸序列为SEQ ID No.469所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.470所示的反向引物组成；引物对236：由核苷酸序列为SEQ ID No.471所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.472所示的反向引物组成；引物对237：由核苷酸序列为SEQ ID No.473所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.474所示的反向引物组成；引物对238：由核苷酸序列为SEQ ID No.475所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.476所示的反向引物组成；引物对239：由核苷酸序列为SEQ ID No.477所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.478所示的反向引物组成；引物对240：由核苷酸序列为SEQ ID No.479所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.480所示的反向引物组成；引物对241：由核苷酸序列为SEQ ID No.481所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.482所示的反向引物组成；引物对242：由核苷酸序列为SEQ ID No.483所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.484所示的反向引物组成；引物对243：由核苷酸序列为SEQ ID No.485所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.486所示的反向引物组成；引物对244：由核苷酸序列为SEQ ID No.487所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.488所示的反向引物组成；引物对245：由核苷酸序列为SEQ ID No.489所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.490所示的反向引物组成；引物对246：由核苷酸序列为SEQ ID No.491所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.492所示的反向引物组成；引物对247：由核苷酸序列为SEQ ID No.493所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.494所示的反向引物组成；引物对248：由核苷酸序列为SEQ ID No.495所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.496所示的反向引物组成；引物对249：由核苷酸序列为SEQ ID No.497所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.498所示的反向引物组成；引物对250：由核苷酸序列为SEQ ID No.499所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.500所示的反向引物组成；引物对251：由核苷酸序列为SEQ ID No.501所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.502所示的反向引物组成；引物对252：由核苷酸序列为SEQ ID No.503所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.504所示的反向引物组成；引物对253：由核苷酸序列为SEQ ID No.505所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.506所示的反向引物组成；
No.546所示的反向引物组成；引物对274：由核苷酸序列为SEQ ID No.547所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.548所示的反向引物组成；引物对275：由核苷酸序列为SEQ ID No.549所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.550所示的反向引物组成；引物对276：由核苷酸序列为SEQ ID No.551所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.552所示的反向引物组成；引物对277：由核苷酸序列为SEQ ID No.553所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.554所示的反向引物组成；引物对278：由核苷酸序列为SEQ ID No.555所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.556所示的反向引物组成；引物对279：由核苷酸序列为SEQ ID No.557所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.558所示的反向引物组成；引物对280：由核苷酸序列为SEQ ID No.559所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.560所示的反向引物组成；引物对281：由核苷酸序列为SEQ ID No.561所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙亚林，王直新，柯卫东，朱红莲，刘正位，李明华，李双梅，李峰，匡晶，
申请(专利权)人：武汉市农业科学院，
类型：发明
国别省市：