肾靶向性的DNA纳米筏-IL-33及其制备方法、应用技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，特别涉及肾靶向性的DNA纳米筏

【技术实现步骤摘要】
肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33及其制备方法、应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33及其制备方法、应用。

技术介绍

[0002]大量研究表明细胞因子白介素33(IL
‑
33)在预防缺血性急性肾损伤 (AKI)和肾脏保护方面具有积极作用。IL
‑
33诱导ILC2的增加促使ILC2 产生大量的Th2细胞因子(IL
‑
4和IL
‑
13)，从而抑制了1型免疫应答的促炎活性(TNF
‑
α，IL
‑
1b，IL
‑
6，CXCL1和CXCL2显著降低)。另外，IL
‑
33诱导的ILC2通过产生Areg直接促进小管修复进而减轻肾损伤。IL
‑
33也能够促进抗炎性巨噬细胞(M2)增多。M2产生抗炎细胞因子，分泌HO
‑
1抗炎酶，从而抑制炎症和组织损伤。IL
‑
33对肾脏缺血再灌注损伤表现出积极的预防和保护作用，这为AKI的临床治疗提供了新途径。
[0003]然而，目前细胞因子疗法对缺血性AKI的治疗效果仍有限。部分原因是细胞因子对肾脏的非特异性，导致其递送效率低。通过全身给药后，往往只有一小部分细胞因子能够到达肾小管，导致疗效低。另一方面，细胞因子的半衰期短，体内清除速度快，因此需要连续多次过量给药，造成多次注射的痛苦以及严重的副作用，从而阻碍了其临床应用。为了降低细胞因子疗法的副作用，将细胞因子附着在纳米颗粒和微球上，以增强对肿瘤的靶向性。这些策略主要基于肿瘤的增强的通透性和保留效应(EPR效应)，使纳米颗粒通过被动细胞递送进入细胞。因此，这种方法并不适用于肾脏的靶向递送。采用外泌体作为细胞因子的递送载体，将细胞因子包裹并递送到肾脏中。然而，外泌体主要靶向于肝脏并在肝脏中大量富集，导致包裹细胞因子的外泌体在肾脏的累积量欠佳。利用基因工程，蛋白工程改造细胞因子，以提高靶向性的技术非常复杂，而且，改造后的细胞因子的靶向性能不佳。
[0004]因此，提供一种成本低、工艺简单、靶向性强的基于DNA纳米筏的细胞因子药物合成方法具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供一种成本低、工艺简单、靶向性强的基于DNA 纳米筏的细胞因子药物合成方法。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33，包括DNA修饰的IL
‑
33，以及DNA折纸筏；
[0008]所述DNA修饰的IL
‑
33包括巯基修饰的DNA(SH
‑
DNA)以及IL
‑
33；所述IL
‑
33与所述巯基修饰的DNA的核苷酸序列互补配对；
[0009]所述DNA折纸筏包括M13mp 18DNA单链、订书钉链和捕获链；
[0010]所述订书钉链与所述M13mp 18DNA单链的核苷酸序列互补配对；
[0011]所述捕获链与修饰IL
‑
33的DNA单链的核苷酸序列互补配对。
[0012]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述订书钉链的核苷酸序列如SEQ IDNo.1～216所示。
[0013]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述捕获链的核苷酸序列如SEQ IDNo.217～258所示。
[0014]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述DNA修饰的IL
‑
33与DNA折纸筏的摩尔比不小于5:1。
[0015]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述巯基修饰的DNA与所述IL
‑
33 的摩尔比大于50:1；
[0016]所述订书钉链与所述M13mp 18DNA单链的摩尔比大于50:1；
[0017]所述捕获链与所述M13mp 18DNA单链的摩尔比大于100:1。
[0018]本专利技术还提供了所述肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33的制备方法，包括如下步骤：
[0019]步骤1、制备DNA修饰的IL
‑
33：
[0020]取所述IL
‑
33溶于溶剂中，制得IL
‑
33溶液；
[0021]取IL
‑
33溶液与50倍过量的SPDP在缓冲液中反应，脱盐除去过量的 SPDP；
[0022]取SPDP修饰的IL
‑
33与巯基修饰的DNA链偶联；
[0023]步骤2、制备DNA折纸筏：取M13mp 18DNA单链与50倍摩尔过量的订书钉链和100倍摩尔过量的捕获链混合；
[0024]步骤3、制备负载药物的DNA折纸筏：取所述DNA折纸筏与5倍摩尔过量的所述DNA修饰的待负载药物混合。
[0025]更重要的是，本专利技术还提供了所述肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33或所述制备方法制得的肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33在制备缓释药物中的应用。
[0026]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述缓释药物包括肾靶向性药物。
[0027]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述缓释药物包括预防和/或治疗缺血性肾损伤的药物。
[0028]此外，本专利技术还提供了肾靶向性的缓释药物，包括所述肾靶向性的DNA 纳米筏
‑
IL
‑
33或所述制备方法制得的肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33，以及药学上可接受的辅料。
[0029]本专利技术利用DNA纳米技术，将IL
‑
33精确定量的负载于DNA纳米筏上，减少了IL
‑
33的药物使用量和给药次数，降低了药物成本，而且减轻了多次给药的痛苦，提高了药物靶向效率，减轻了其副作用。
附图说明
[0030]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0031]图1示本专利技术实施例1中吡啶
‑2‑
硫酮(消光系数：8080M
‑
1cm
‑
1)的紫外
ꢀ‑
可见光谱图；其中，图1a示DNA
‑
IL
‑
33的制备的示意图；图1b示反应前后吡啶
‑2‑
硫酮的紫外
‑
可见光谱图；
[0032]图2示本专利技术实施例2中DNA折纸筏的表征图；其中图2a示DNA折纸筏的合成示意图；图2b示DNA折纸筏的AFM表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33，其特征在于，包括DNA修饰的IL
‑
33，以及DNA折纸筏；所述DNA修饰的IL
‑
33包括巯基修饰的DNA(SH
‑
DNA)以及IL
‑
33；所述IL
‑
33与所述巯基修饰的DNA的核苷酸序列互补配对；所述DNA折纸筏包括M 13mp 18DNA单链、订书钉链和捕获链；所述订书钉链与所述M 13mp 18DNA单链的核苷酸序列互补配对；所述捕获链与修饰IL
‑
33的DNA单链的核苷酸序列互补配对。2.如权利要求1所述肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33，其特征在于，所述订书钉链的核苷酸序列如SEQ ID No.1～216所示。3.如权利要求1或2所述肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33，其特征在于，所述捕获链的核苷酸序列如SEQ ID No.217～258所示。4.如权利要求1至3任一项所述肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33，其特征在于，所述DNA修饰的IL
‑
33与DNA折纸筏的摩尔比不小于5:1。5.如权利要求1至4任一项所述肾靶向性的DNA纳米筏
‑
IL
‑
33，其特征在于，所述巯基修饰的DNA与所述IL
‑
33的摩尔比大于50:1；所述订书钉链与所述M 13mp 18DNA单链的摩尔比大于50:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李威，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：