使用衰减型探针的核糖核酸扩增和检测制造技术

一个实施方案涉及一种方法，涉及使用衰减型探针的核糖核酸扩增和检测。该方法包括组装反应混合物，该反应混合物包括：包含相关核酸序列的靶分子；一组寡聚核苷酸，其包含：包含第一SW位点的第一SW(选择性松动)引物,和包含第二SW位点的第二SW引物；至少一个第三引物；探针，其包含：(i)衰减型位点，(ii)在非3'位点的第一标记，和(iii)在3'端的第二标记；具有3'

【技术实现步骤摘要】
使用衰减型探针的核糖核酸扩增和检测
[0001]相关申请
[0002]本申请要求享受2020年6月8日提交的美国临时申请No.63/036,076的优先权,该申 请涉及2017年5月17日提交的题为“用于核酸扩增的组合物和方法”的美国专利申请 No.15/597,310，其通过引用整体并入本文。


[0003]本专利技术涉及用于扩增和/或定量相关(of interest)的靶核酸分子的方法，更具体地， 涉及通过含有衰减型(Attenuating)位点的新型PCR探针和单管嵌套式(Nested)PCR扩 增和检测相关的靶核酸的方法。本公开的实施方案进一步涉及用于检测和/或定量相关的 靶核酸分子的组合物，试剂盒，探针和引物组。

技术介绍

[0004]聚合酶链反应(PCR)是Kary Mullis在1980年代开发的一种革命性方法(Mullis K etal.，1986)，它是分子生物学中最强大的技术之一。可以使用序列特异性引物，热稳定的 DNA聚合酶和热循环，通过PCR将DNA或cDNA分子或核酸模板中的特定序列从少量 扩增到数千到一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种方法，包括：a.组装反应混合物，包括：I.包含相关核酸序列的靶分子；II.引物组包括一对扩增引物；III.探针，其包含：(i)衰减型位点，(ii)在非3'位点的第一标记，和(iii)在3'端的第二标记；IV.具有3'
→
5'核酸外切酶活性的聚合酶；b.使用反应混合物进行包含相关核酸序列的靶分子的扩增反应；其中将探针和具有3'
→
5'核酸外切酶活性的聚合酶配置为能够对相关核酸序列进行特异性和/或定量检测。2.根据权利要求1所述的方法，其中使用聚合酶的3'
→
5'核酸外切酶活性有效地切除探针3
’
端的第二标记。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一标记和所述第二标记包括荧光染料
‑
猝灭剂对或其类似物。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述引物组包含第一引物和第二引物，其中所述第一引物和第二引物与包含相关核酸序列的靶分子互补。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衰减型位点位于所述探针的中心与所述第二标记之间，并且包含至少1至10个单元，所述单元包括天然核苷酸，非天然核苷酸，脱碱基结构，间隔子，荧光标记修饰的核苷酸，其包含脱氧尿苷的非典型核苷酸，化学合成的核苷酸或上述的组合。6.根据权利要求1所述的方法，其中相关核酸序列包括SARS
‑
CoV
‑
2序列。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述相关核酸序列的特异性和/或定量检测包括：i.使扩增引物退火至包含相关核酸序列的靶分子的链上；ii.在聚合酶存在下，在第一和第二扩增引物位点之间扩增靶分子的两条链；iii.使探针与靶分子的链杂交以形成探针
‑
靶双链体；iv.使用聚合酶的3'
→
5'核酸外切酶活性将标记从探针上切除后检测发射的荧光。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述引物组的引物3
’
末端包含分子分部，其中所述分子分部与相关靶核酸序列不互补。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述分子分部被配置为在使用所述聚合酶延伸引物之前被所述DNA聚合酶的3'
→
5'核酸外切酶活性切除。10.一种方法，包括：(a)组装反应混合物，包括：I.包含相关核酸序列的靶分子；II.一组寡聚核苷酸，包括：1)包...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏星，吴开原，
申请(专利权)人：安普里怀斯公司，
类型：发明
国别省市：