【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种体外诱导CD4
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Foxp3
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CD69
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Treg的扩增方法及其用途
[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种免疫抑制活性增强的CD69阳性调节性T细胞、制备方法，及其相关药物组合物和应用。
技术介绍
[0002]调节性T细胞(Regulatory T cells，Treg)是一群具有免疫抑制功能并在维持体内免疫平衡中发挥重要作用的T细胞，其表面标志物是CD4、CD25和Foxp3，通常表达CD62L，CD44，CD28，OX40，FR4，CTLA
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4和GITR。尽管Treg具有很强免疫调节能力，但在炎性微环境中Treg容易转化为Th17等细胞,导致其免疫抑制功能也大大受损；而且炎症性细胞因子会促使Treg的Foxp3表达下调，进而导致Treg向炎性细胞转化。CD4
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CD69
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Foxp3
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Treg细胞是能够表达CD69阳性的调节性T细胞，然而，CD4
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种体外诱导CD4
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Foxp3
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CD69
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Treg细胞的扩增方法，其特征在于，所述的扩增方法使用蛋白酶体抑制剂预处理初始CD4
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T细胞，之后在传统方式Treg诱导条件下培养，获得包含至少42％的CD4
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Foxp3
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CD69
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Treg细胞；优选的，获得包含至少50％的CD4
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Foxp3
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CD69
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Treg细胞；更优选的，获得包含至少55％的CD4
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Foxp3
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CD69
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Treg细胞；优选的，所述初始CD4
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T细胞来源脾脏、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结及其他淋巴组织中的至少一种；优选的，所述初始CD4
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T细胞的分选方法包括磁珠或者流式分选中的至少一种。2.如权利要求1所述扩增方法，其特征在于，所述蛋白酶体抑制剂选自MG132(Z
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Leu
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Leu
‑
Leu
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CHO)、硼替佐米(Bortezomib)，卡非佐米(Carfilzomib)中的至少一种；进一步，优选为MG132(Z
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Leu
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Leu
‑
Leu
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CHO)；优选的，所述蛋白酶体抑制剂预处理时间为1h
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2.5h；优选的，所述蛋白酶体抑制剂预处理的温度为37℃；优选的，所述蛋白酶体抑制剂的MG132(Z
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Leu
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Leu
‑
Leu
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CHO)浓度为0.1
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20μM，硼替佐米(Bortezomib)浓度为0.01
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0.5μM，卡非佐米(Carfilzomib)浓度为0.001
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0.01μM；优选的，经过MG132预处理获得的Treg包含至少55％的CD4
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Foxp3
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CD69
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Treg；进一步，优选的，采用浓度为10μM的MG132预处理时获得至少65％的CD4
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Foxp3
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CD69
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Treg；优选的，所述蛋白酶体抑制剂促进CD69表达不只限于CD4
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T细胞。3.如权利要求1或者2任一所述扩增方法，其特征在于，所述传统方式Treg诱导条件下使用的培养基包含细胞因子或活化抗体中的至少一种；优选的，所述Treg诱导时间为72
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96h；优选的，所述细胞因子为TGF
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β1，浓度5
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20ng/mL；更优选的，细胞因子TGF
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β1浓度10ng/mL；进一步，优选的，所述细胞因子为IL
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2，浓度50
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100IU；更优选的，细胞因子IL
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2浓度为50IU；进一步，优选的，所述活化抗体anti
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CD3/CD28浓度为0.5
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2μg/mL；更优选的，活化抗体anti
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CD3/CD28浓度为2μg/mL。4.一种体外免疫抑制活性增强的Treg细胞，其特征在于其包含至少42％的CD4
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Foxp3
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CD69
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Treg细胞；优选的，所述CD4
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Foxp3
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CD69
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Treg细胞通过权利要求1
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3任一项所述扩增方法获得；优选的，经过MG132预处理获得的Treg包含至少55％的CD4
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Foxp3
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CD69
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Treg；进一步，优选的，采用浓度为10μM的MG132预处理时至少67％的CD4
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Foxp3
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CD69
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Treg；优选的，所述Treg分泌高于传统方式诱导的水平的IL
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10和TGF
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β1，进一步，优选的，免疫抑制相关分子GITR、ICOS高于传统方式诱导的Treg。5.一种体外MG132 Treg细胞，其特征在于，所述...
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