修饰的氨基酸及其在ADC中的应用制造技术

本发明专利技术涉及修饰的氨基酸及其在ADC中的应用。本发明专利技术的修饰的氨基酸为R1‑

【技术实现步骤摘要】
修饰的氨基酸及其在ADC中的应用


[0001]本专利技术涉及药物领域，具体涉及抗体药物偶联物(ADC)，更具体涉及修饰的氨基酸及其在ADC中的应用。

技术介绍

[0002]抗体药物偶联物(antibody
‑
drug conjugate，ADC)是通过一个化学链接将具有生物活性的小分子药物连接到单抗上，单抗作为载体将小分子药物靶向运输到目标细胞中。
[0003]ADC药物结构较为复杂，且不同ADC药物设计之间存在较大的差异。即使同一靶点的不同药物，由于识别位点、连接位点、连接子及所连接小分子的不同，其毒性的差异显而易见。

技术实现思路

[0004]本文第一方面提供下式I所示的磷酰胆碱基团修饰的氨基酸：
[0005]R1‑
L1‑
N(R2)
‑
R3ꢀꢀꢀ
(I)
[0006]式I中：
[0007]R1为磷酰胆碱基团；
[0008]N代表氨基酸分子上的氮原子；
[0009]R2为H、C1
‑
C4烷基或
‑
L1‑
磷酰胆碱基团；
[0010]各L1独立为连接基团；
[0011]R3代表氨基酸分子上除所示N原子外的其余部分，所述其余部分任选地被保护基团保护。
[0012]本文第二方面提供一种磷酰胆碱修饰的肽，所述肽至少包括一个磷酰胆碱基团，所述磷酰胆碱基团与所述肽所含的1个或多个氨基酸的N原子和/或氧原子经由连接基团共价连接。
>[0013]本专利技术第三方面提供具有下式II所示结构的连接子化合物：
[0014]R4‑
L2‑
P
‑
R5ꢀꢀꢀ
(II)
[0015]式中：
[0016]R4为可与蛋白中的半胱氨酸残基中的巯基或赖氨酸残基上的游离氨基发生反应、从而将式II连接到蛋白的基团；
[0017]L2为连接基团；
[0018]P为权利要求1
‑
3中任一项所述的氨基酸或权利要求4
‑
8中任一项所述的肽；所述氨基酸或肽与L2和R5共价连接；
[0019]R5为：
[0020][0021]其中，R6为H、卤素、C1
‑
10烷基、C3
‑
C8环烷基、C2
‑
C8烯基、C2
‑
C8炔基、C3
‑
C8环烯基、6
‑
14元芳基、芳烷基、5
‑
10元杂芳基或4
‑
10元杂环基；R9为H、
‑
C(O)
‑
N(R7)
‑
(CH2)
n
‑
NHR8或硝基取代的苯氧基羰基；R7为H或C1
‑
6烷基；R8为H或C1
‑
6烷基；和n为1
‑
6的整数。
[0022]本文第四方面提供下式III所示的与本专利技术任一实施方案所述的连接子化合物共价连接的药物：
[0023]R4‑
L2‑
P
‑
R5‑
D
ꢀꢀꢀ
(III)
[0024]式中：R4、L2、P和R5如本文任一实施方案所述；D表示药物分子去除了一个H原子后获得的基团，与R5共价连接；优选地，药物分子通过与R5形成碳酸酯键(
‑
OCO
‑
)或氨基甲酸酯(
‑
OCNH
‑
)而与R5相连。
[0025]本文第五方面提供一种ADC，其结构式如下式IV所示：
[0026]A
‑
R4‑
L2‑
P
‑
R5‑
D
ꢀꢀꢀ
(IV)
[0027]式中，R4、L2、P和R5如本文任一实施方案所述，D如如本文任一实施方案所述，A为抗体或其抗原结合片段；其中，所述抗体或其抗原结合片段通过其所含有的巯基与R4共价连接。
[0028]本文第六方面还提供本文任一实施方案所述的氨基酸、肽、连接子化合物以及药物在制备ADC中的应用，或在改善抗体溶解性中的应用，或者在制备用于改善抗体溶解性的制剂中的应用。
[0029]本专利技术第七方面还提供一种组合物，其含有本文任一实施方案所述的氨基酸、肽、连接子化合物或与连接子化合物共价连接的药物。组合物中可含有其它合适的辅料，如溶剂等。
[0030]本文各方面的详细内容如下文所详述。
附图说明
[0031]图1：LA003的HIC
‑
HPLC图。
[0032]图2：LA004的HIC
‑
HPLC图。
[0033]图3：LA005的HIC
‑
HPLC图。
[0034]图4：LA006的HIC
‑
HPLC图。
[0035]图5：LA006的SEC
‑
HPLC图。
[0036]图6：LA009的HIC
‑
HPLC图。
[0037]图7：LA003、LA004、LA005和LA006的HIC
‑
HPLC对比图。从图中可以得出以下结论：DAR值均为4的四个ADC，小分子部分带有两个磷脂酰胆碱的ADC的亲水性更强，烷基形式的磷脂酰胆碱的亲水性强于酰胺形式的磷脂酰胆碱。
[0038]图8：含磷酰胆碱修饰的HER2ADC对人SK
‑
BR
‑
3，HCC1954和MDA
‑
MB
‑
468乳腺癌细胞系的细胞毒活性。(A)Val
‑
Lys二肽连接子内的Lys侧链进行含磷酰胆碱修饰；(B)对Gly/Ser
‑
Val
‑
Cit三肽连接子内的Gly或Ser进行直接修饰；(C)Lys的侧链，并直接连接到Ser
‑
Val
‑
Lys三肽连接子中的Ser，(D)Lys的侧链和/或在Val
‑
Lys或Ser
‑
Val
‑
Lys连接子内直接与Ser连接。抗HER2ADC数据点代表至少三次重复的平均归一化细胞生存力
±
SEM。至少两个独立实验的结果。
[0039]图9：LA003、LA005和对照Her2
‑
McVCPABMMAE的HIC图谱。a、b和c分别表示对照、LA003和LA005的HIC图谱。
具体实施方式
[0040]本专利技术旨在提供一种新的修饰的氨基酸或修饰的肽，用这类修饰的氨基酸或修饰的肽制得的ADC具有明显提高的溶解度，同时还保留了所需的生物学活性或药效。具体而言，本专利技术使用磷酰胆碱来修饰氨基酸，构建修饰的氨基酸或修饰的肽。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.下式I所示的磷酰胆碱基团修饰的氨基酸：R1‑
L1‑
N(R2)
‑
R3ꢀꢀꢀꢀ
(I)式I中：R1为磷酰胆碱基团；N代表氨基酸分子上的氮原子；R2为H、C1
‑
C4烷基或
‑
L1‑
磷酰胆碱基团；各L1独立为连接基团；R3代表氨基酸分子上除所示N原子外的其余部分，所述其余部分任选地被保护基团保护。2.如权利要求1所述的氨基酸，其特征在于，所述磷酰胆碱基团如下式所示：式中，波浪线表示该磷酰胆碱基团与L1连接的位置；和/或所述各L1独立表示为
‑
L
a
‑
L
b
‑
，其中L
a
选自C1
‑
C6亚烷基、C2
‑
C6亚烯基或C2
‑
C6亚炔基；L
b
不存在，或者为羰基、酯基(
‑
COO
‑
)、
‑
O
‑
SO2‑
或
‑
NH
‑
SO2‑
；优选地，L
b
不存在或为羰基；优选地，L1通过L
b
与所述N共价连接；优选地，L
b
和所示的N形成酰胺基或磺酰氨基；优选地，各L1独立为C1
‑
C6亚烷基或C1
‑
C6亚烷基羰基；和/或R3所述的氨基酸分子选自：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、硒半胱氨酸、吡咯赖氨酸和鸟氨酸；优选地，所述氨基酸分子选自：赖氨酸、鸟氨酸、缬氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸和甘氨酸；更优选地，所述氨基酸分子选自：缬氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、丝氨酸、甘氨酸和瓜氨酸。更优选地，所述氨基酸分子选自：鸟氨酸、赖氨酸、丝氨酸和甘氨酸；和/或所述N不是氨基酸分子中的芳基、杂芳基或杂环基上的环氮原子，或所述N不是氨基酸分子中用来形成肽键的氮原子。3.如权利要求1所述的氨基酸，其特征在于，所述修饰的氨基酸选自LN001至LN010以及LN012至LN025中任一所示的化合物。4.一种磷酰胆碱修饰的肽，其特征在于，所述肽至少包括一个磷酰胆碱基团，所述磷酰胆碱基团与所述肽所含的1个或多个氨基酸的N原子和/或氧原子经由连接基团共价连接；优选地，本申请所述的肽具有2
‑
10个氨基酸残基，更优选具有2
‑
5个氨基酸残基；优选地，所述磷酰胆碱基团和连接基团如权利要求2所定义。5.如权利要求4所述的肽，其特征在于，所述肽为可被病理环境中的酶水解的肽；优选地，所述酶可为蛋白水解酶、蛋白酶或肽酶。更优选地，所述酶选自：半胱氨酸蛋白酶、天冬酰胺蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、谷氨酸蛋白酶、苏氨酸蛋白酶、明胶酶、金属蛋白酶和天冬酰胺肽裂解酶中的一种或多种；更有效的，所述酶为天冬酰胺内肽酶。
6.如权利要求4或5所述的肽，其特征在于：所述肽中的氨基酸残基选自：缬氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、丝氨酸、甘氨酸和瓜氨酸中的一种或多种；和/或所述肽中磷酰胆碱基团修饰的氨基酸残基选自：鸟氨酸、赖氨酸、丝氨酸和甘氨酸中的一个或多个；和/或所述肽中的至少一个被磷酰胆碱基团修饰的氨基酸残基为权利要求1
‑
3中任一项所述的磷酰胆碱基团修饰的氨基酸。7.如权利要求4所述的肽，其特征在于，所述肽选自Val
‑
Orn、Val
‑
Lys、Ser
‑
Val
‑
Lys、Gly
‑
Val
‑
Lys、Ser
‑
Val
‑
Cit、Gly
‑
Val
‑
Cit、Gly
‑
Gly
‑
Gly
‑
Val
‑
Lys和Gly
‑
Gly
‑
Val
‑
Lys中的一种或多种；选地，所述肽中的鸟氨酸、赖氨酸、丝氨酸和甘氨酸中的一个或多个被磷酰胆碱基团修饰。8.如权利要求4所述的肽，其特征在于，所述肽选自下组中的一个或多个：
9.具有下式II所示结构的连接子化合物：R4‑
L2‑
P
‑
R5ꢀꢀꢀꢀ
(II)式中：R4为可与蛋白中的半胱氨酸残基中的巯基或赖氨酸残基上的游离氨基发生反应、从而将式II连接到蛋白的基团；L2为连接基团；P为权利要求1
‑
3中任一项所述的氨基酸或权利要求4
‑
8中任一项所述的肽；所述氨基酸或肽与L2和R5共价连接；R5为：其中，R6为H、卤素、C1
‑
10烷基、C3
‑
C8环烷基、C2
‑
C8烯基、C2
‑
C8炔基、C3
‑
C8环烯基、6
‑
14元芳基、芳烷基、5
‑
10元杂芳基或4
‑
10元杂环基；R9为H、
‑
C(O)
‑
N(R7)
‑
(CH2)
n
‑
NHR8或硝基取代的苯氧基羰基；R7为H或C1
‑
6烷基；R8为H或C1
‑
6烷基；和n为1
‑
6的整数。10.如权利要求9所述的连接子化合物，其特征在于，R4选自：选自：
其中，波浪线表示R4与L2连接的位置；F5表示5个氟原子。11.如权利要求9或10所述的连接子化合物，其特征在于，L2为
‑
L
a
‑
L
b
‑
，其中L
a
选自C1
‑
C6亚烷基、C2
‑
C6亚烯基或C2
‑
C6亚炔基；L
b
不存在，或者为羰基、酯基(
‑
COO
‑
)、
‑
O
‑
SO2‑
或
‑
NH
‑
SO2‑
；优选地，L
b
不存在或为羰基；优选地，L2通过L
b
与所述P共价连接；优选地，L
b
和P间形成酰胺基或磺酰氨基；优选地，各L2独立为C1
‑
C6亚烷基或C1
‑
C6亚烷基羰基。12.如权利要求9或10所述的连接子化合物，其特征在于，所述R4‑
L2与P以及通过选自酰胺基(
‑
CO
‑
NH
‑
)、酯基(
‑
CO...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭茂君，李辉，李海泓，许喆，王威威，赵磊，刘海东，戚文科，
申请(专利权)人：联宁苏州生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：