青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用制造技术

本发明专利技术公开了青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用，所述人黑色素瘤细胞损伤为人黑色素瘤细胞氧化应激损伤。所述青龙衣提取物的提取方法如下：干燥青龙衣，粉碎，乙醇热回流提取，合并提取液，减压浓缩，得到浸膏，浸膏用水分散，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取液减压浓缩至干燥，分别得到石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物。以不同浓度H2O2作用不同时间来诱导A375细胞氧化损伤，从DPPH、ABTS自由基的清除率检测抗氧化活性。由基的清除率检测抗氧化活性。

【技术实现步骤摘要】
青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用


[0001]本专利技术涉及提取青龙衣中的化学成分的
，更具体的说是涉及青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用。

技术介绍

[0002]青龙衣Green wulnut husk是胡桃科植物落叶乔木胡桃楸，果实的未成熟青色外果皮，又被称为核桃青皮，始载于《开元本草》，其镇痛、治疡功效在《山东中草药手册》、《救急方》等医药典籍中早有记载，民间也有将其泡水饮用起止痛之效的应用。现代研究表明，青龙衣中含有丰富的化学成分，包括醌类、黄酮类、二芳基庚烷类、酚酸类等，具有良好的抗菌、抗肿瘤、镇痛等多种药理活性。
[0003]核桃青皮一直被当做废弃物或者燃料，对环境带来了较大的压力和污染，农民收获核桃时，处理核桃青皮时手上会留下难以洗去的黑灰色印记，难以洗净。核桃盛产区域产生大量的核桃青皮堆积，堆积的果皮会产生难闻气味，产生有害液体，对人体、农作物等产生影响。因此，加大核桃青皮的开发和利用成为促进核桃产业进一步发展的重要问题。
[0004]近年来，氧化应激学说备受关注。氧化应激是指人体内氧化与抗氧化作用的不平衡，导致人体产生大量的氧化中间产物。M Eskandani等人研究表明氧化应激水平和酪氨酸酶活性呈负相关，酪氨酸酶活性可调节皮肤黑色素细胞产生黑色素。Schallreuter等人研究表明白癜风患者的表皮细胞中含有H2O2，白癜风患者与H2O2水平较高有关，氧化应激失衡产生的氧化物可以使黑色素细胞受到损伤，导致黑色素生成量减少，进而患白癜风等疾病。因此，抗氧化剂治疗已成为白癜风的有前途的治疗方向。
[0005]本专利技术为进一步探究青龙衣抗氧化损伤活性，对青龙衣提取物的不同极性萃取物进行体外细胞抗氧化损伤活性研究与清除DPPH、ABTS自由基能力做出评价。因此，提供青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用，是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用，采用H2O2诱导A375细胞氧化损伤模型，研究核桃青皮乙醇提取物的不同极性萃取物抗氧化作用，筛选出主要抗氧化作用的有效部位，为开发治疗白癜风疾病的药物和天然的食品抗氧化剂提供参考依据。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用，所述人黑色素瘤细胞损伤为人黑色素瘤细胞氧化应激损伤。
[0009]优选的，所述青龙衣提取物的提取方法如下：
[0010]干燥青龙衣，粉碎，用体积分数70％的乙醇热回流提取3次，合并提取液，旋转蒸发仪50℃减压浓缩，得到浸膏，浸膏用水分散，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取液减压浓缩至干燥，分别得到石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取
物、正丁醇萃取物。
[0011]优选的，所述二氯甲烷萃取物的提取方法如下：干燥青龙衣，粉碎，用体积分数70％的乙醇热回流提取3次，合并提取液，旋转蒸发仪50℃减压浓缩，得到浸膏，浸膏用水分散，AB
‑
8树脂柱上样，95％乙醇：二氯甲烷＝1：1洗脱，回收洗脱液旋转蒸发仪50℃减压浓缩至干燥，得到二氯甲烷萃取物。
[0012]优选的，所述乙酸乙酯萃取物的提取方法如下：干燥青龙衣，粉碎，用体积分数70％的乙醇热回流提取3次，合并提取液，旋转蒸发仪50℃减压浓缩，得到浸膏，浸膏用水分散，HPD300大孔树脂柱上样，95％乙醇：乙酸乙酯＝1：1洗脱，回收洗脱液旋转蒸发仪50℃减压浓缩至干燥，得到乙酸乙酯萃取物。
[0013]优选的，所述二氯甲烷萃取物的提取方法可替换为：干燥青龙衣，粉碎，用二氯甲烷回流提取，旋转蒸发仪50℃减压浓缩至干燥，得到二氯甲烷萃取物。
[0014]优选的，所述二氯甲烷萃取物的提取方法可替换为：干燥青龙衣，粉碎，用水：二氯甲烷＝1：1回流提取，旋转蒸发仪50℃减压浓缩至干燥，得到二氯甲烷萃取物。
[0015]优选的，所述乙酸乙酯萃取物的提取方法可替换为：干燥青龙衣，粉碎，用乙酸乙酯回流提取，旋转蒸发仪50℃减压浓缩至干燥，得到乙酸乙酯萃取物。
[0016]优选的，所述乙酸乙酯萃取物的提取方法可替换为：干燥青龙衣，粉碎，用水：乙酸乙酯＝1：1回流提取，旋转蒸发仪50℃减压浓缩至干燥，得到乙酸乙酯萃取物。
[0017]优选的，所述人黑色素瘤细胞的细胞培养方法如下：
[0018]取冻存于液氮中的人黑色素瘤A375细胞，置37℃水浴中解冻，将细胞转移至离心管，设置1000r/min，离心4min，沉淀用5mL含10％FBS的DMEM培养基重悬于37℃、5％的CO2的条件下静置培养，换液，细胞融合至80％时，用1mL胰蛋白酶消化，传代。
[0019]青龙衣提取物在清除DPPH自由基的应用，所述青龙衣提取物为青龙衣的乙酸乙酯萃取物和二氯甲烷萃取物。
[0020]青龙衣提取物在清除ABTS自由基的应用，所述青龙衣提取物为青龙衣的乙酸乙酯萃取物和二氯甲烷萃取物。
[0021]青龙衣提取物在制备治疗白癜风疾病的药物中的应用。
[0022]通过采用上述技术方案，本专利技术的有益效果如下：
[0023]本专利技术研究了对青龙衣提取物的不同极性萃取物样品对A375细胞的抗氧化作用，筛选出最佳部位，核桃青皮乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物和二氯甲烷萃取物分别使细胞存活率提高至85.79％、86.57％，总抗氧化能力提高至1.97mmol/mL，1.77mmol/mL，SOD活力分别提高至92.55U/mgprot，68.34U/mgprot，MDA含量分别降低至9.05nmol/mL，11.41nmol/mL，DPPH自由基清除率分别为86.67％、63.54％，ABTS自由基清除率分别为91.53％、74.02％。由此可知，青龙衣提取物的乙酸乙酯萃取物和二氯甲烷萃取物对H2O2氧化损伤的A375细胞具有明显的保护作用，其中乙酸乙酯萃取物的抗氧化能力更强，可用作食品的抗氧化剂或用于治疗白癜风等疾病，能提高核桃青皮的利用率，降低核桃青皮对环境的危害。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本
专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0025]图1附图为青龙衣乙酸乙酯萃取物和二氯甲烷萃取物对H2O2诱导A375细胞MDA的影响；
[0026]图2附图为青龙衣乙酸乙酯萃取物和二氯甲烷萃取物对H2O2诱导A375细胞T
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AOC的影响；
[0027]图3附图为青龙衣乙酸乙酯萃取物和二氯甲烷萃取物对H2O2诱导A375细胞SOD的影响；
[0028]图4附图为青龙衣乙酸乙酯萃取物和二氯甲烷萃取物对DPPH
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用，其特征在于，所述人黑色素瘤细胞损伤为人黑色素瘤细胞氧化应激损伤。2.根据权利要求1所述的青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用，其特征在于，所述青龙衣提取物的提取方法如下：干燥青龙衣，粉碎，用体积分数70％的乙醇热回流提取3次，合并提取液，旋转蒸发仪50℃减压浓缩，得到浸膏，浸膏用水分散，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取液减压浓缩至干燥，分别得到石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物。3.根据权利要求1所述的青龙衣提取物在人黑色素瘤细胞损伤的应用，其特征在于，所述人黑色素瘤细胞的...

【专利技术属性】
技术研发人员：马晓玲，石磊岭，魏鸿雁，宋海龙，朱军，郭雄飞，
申请(专利权)人：新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，
类型：发明
国别省市：