同时检测皮质醇、血清睾酮、肌酸激酶同工酶的荧光传感方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了同时检测皮质醇、血清睾酮、肌酸激酶同工酶的荧光传感方法和试剂盒，属于生物标志物检测领域。该荧光传感方法，包括以下步骤：(1)制备磁珠

【技术实现步骤摘要】
同时检测皮质醇、血清睾酮、肌酸激酶同工酶的荧光传感方法和试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物标志物检测领域，特别是涉及一种同时检测皮质醇、血清睾酮、肌酸激酶同工酶的荧光传感方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]过度的体力劳动与精神压力往往诱发多种疾病，严重时甚至危害人体健康，受到人们广泛的重视。正常情况下，人体的皮质醇/血清睾酮比值大约为3，而当人体发生如疲劳等生理变化时，皮质醇含量升高，血清睾酮含量降低，其相应的比值随之升高；此外，正常状态下，人体血液中肌酸激酶同工酶(CK
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MB)含量为1
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20ng/ml，但在心肌梗死发生后会立即升高，并在4
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6小时内出现异常，含量提高至正常状况的十倍。对人体血清样本中的皮质醇、血清睾酮以及肌酸激酶同工酶含量进行联合检测，有助于提高人体异常状态诊断的准确性，及时检测并预防因人体疲劳而导致的生理损伤，保护人体健康。因此，及时、快速、灵敏地检测皮质醇、血清睾酮以及肌酸激酶同工酶含量具有重要意义。
[0003]多种检测方法被用于定量检测反应人体疲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测皮质醇、血清睾酮、肌酸激酶同工酶的荧光传感方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备磁珠
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适配体
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互补链复合物：将链霉亲和素化的磁珠与生物素化的皮质醇、血清睾酮、肌酸激酶同工酶适配体相结合，振荡孵育，得到磁珠
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适配体复合物；向磁珠
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适配体复合物中加入互补链，振荡孵育，得到磁珠
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适配体
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互补链复合物；(2)制备DNA四面体镊子：将四条DNA四面体镊子链相互混合，振荡混匀，孵育混合溶液，得到DNA四面体镊子探针；(3)目标物与互补链的竞争：将待测样品加入步骤(1)所得的磁珠
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适配体
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互补链复合物中，振荡孵育，通过磁分离步骤得到游离的互补链；(4)EXPAR扩增反应：将步骤(3)所得的游离的互补链与EXPAR扩增模板相混合，加入缓冲液后90℃混合孵育，并缓慢降至室温，之后加入内切酶与聚合酶，进行扩增；(5)互补链
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DNA镊子反应：将步骤(4)所得的扩增产物与步骤(2)所得的DNA四面体镊子探针相混合，孵育；(6)读数：测量反应体系的荧光值。2.如权利要求1所述的同时检测皮质醇、血清睾酮、肌酸激酶同工酶的荧光传感方法，其特征在于，还包括制定标准曲线的步骤，所述标准曲线按照步骤(1)
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(6)，检测皮质醇、血清睾酮、肌酸激酶同工酶的标准溶液，测得反应体系的荧光值，以制定皮质醇、血清睾酮、肌酸激酶同工酶标准曲线。3.如权利要求1所述的同时检测皮质醇、血清睾酮、肌酸激酶同工酶的荧光传感方法，其特征在于，步骤(1)中，皮质醇适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；血清睾酮适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；肌酸激酶同工酶适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；皮质醇互补链的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；血清睾酮互补链的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；肌酸激酶同工酶互补链的核苷酸序列如SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：高志贤，王瑜，彭媛，李双，韩殿鹏，任舒悦，秦康，韩铁，张靖扬，
申请(专利权)人：军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所，
类型：发明
国别省市：