用于蛋白质组学剖析及表征的方法和系统技术方案

本文提供了用于在单细胞水平上鉴定和表征不同细胞类型的蛋白质，特别是细胞表面蛋白质的方法和系统。还提供了用于通过细胞的蛋白质表达谱来区分细胞的方法和系统。另外，提供了以超高通量定量和表征单细胞中的蛋白质的方法和系统。本文所提供的方法和系统能够灵敏地剖析单细胞的蛋白质组中的所有表位。地剖析单细胞的蛋白质组中的所有表位。地剖析单细胞的蛋白质组中的所有表位。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】barcoding.Sci Rep 7,44447(2017).https://doi.org/10.1038/sre p44447)。
[0006]因此，在单细胞水平上表征不同细胞类型的蛋白质(特别是细胞表面蛋白质)的需要是显而易见的。还需要通过细胞的蛋白质表达谱来区分细胞。此外，还需要以超高通量检测和定量单细胞中的蛋白质。问题是，由于来自信号的读出中存在不是由细胞造成的噪声量，因此在单细胞水平上对蛋白质的定量表征具有挑战性。这里提供的本专利技术解决了这些未满足的需求。

技术实现思路

[0007]本文描述和要求保护的专利技术具有多个属性和实施方案，包括但不限于在本
技术实现思路
中阐述或描述或引用的那些属性和实施方案。本文描述和要求保护的专利技术不限于本
技术实现思路
中识别的特征或实施方案，或受这些特征或实施方案的限制，这些特征或实施方案仅出于说明而非限制的目的包括在内。
[0008]在第一方面，本专利技术的实施方案涉及确定和表征单细胞的蛋白质表达模式的方法。
[0009]一个示例性实施方案包括以下步骤：将侧接有PCR引发位点的条形码序列缀合到抗体上本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种测定和表征单细胞的蛋白质表达模式的方法，所述方法包括以下步骤：a)将侧接有PCR引发位点的条形码序列缀合到抗体上，其中条形码序列对抗体具有特异性；b)使用所述条形码缀合的抗体进行细胞鉴定步骤；c)划分或分离单独的细胞并且将一个或多个单独的细胞包封在包含蛋白酶的反应混合物中；d)将经包封的细胞与液滴中的所述蛋白酶一起孵育以产生细胞裂解物；e)提供靶向细胞中存在的核酸的一个或多个核酸扩增引物组，其中引物组中的一个或多个引物包含与抗体相关联的条形码识别序列；f)提供靶向细胞中存在的核酸的一个或多个核酸扩增引物组，其中引物组的一个或多个引物包含对于每个细胞独特的条形码识别序列；g)进行核酸扩增反应以产生一个或多个扩增子；h)提供包含与引物组的多个核酸引物中的一个核酸引物的识别条形码序列互补的核酸序列的亲和试剂，其中包含与所述识别条形码序列互补的所述核酸序列的所述亲和试剂能够与包含条形码识别序列的核酸扩增引物组结合；i)使亲和试剂与包含一个或多个靶核酸序列的扩增子的所述扩增产物在足以使所述亲和试剂与所述靶核酸结合以形成亲和试剂结合的靶核酸的条件下接触；以及j)通过对扩增子的条形码测序来确定一种或多种蛋白质的身份并且对所述一种或多种蛋白质进行表征。2.如权利要求1所述的方法，其中反向引物包含以下核酸序列：CTCAACACGGGAAACCTCAC(SEQ ID NO:)。3.如权利要求1所述的方法，其中正向引物包含以下核酸序列：CGCTCCACCAACTAAGAACG(SEQ ID NO:)。4.如权利要求1所述的方法，其中反向引物包含以下核酸序列：TTCCCTCTACACACTGC(SEQ ID NO:)。5.如权利要求1所述的方法，其中正向引物包含以下核酸序列：ACACCTATTCCAAAATTGACCAC(SEQ ID NO:)。6.如权利要求1所述的方法，其中反向引物包含以下核酸序列：CCCGAGTAGCTGGGATTACA(SEQ ID NO:)。7.如权利要求1所述的方法，其中正向引物包含以下核酸序列：CCTGAGGTCAGGAGTTC(SEQ ID NO:)。8.如权利要求1所述的方法，其中正向条形码引物包含以下核酸序列：GTACTCGCAGTAGTCCGCTCCACCAACTAAGAACG(SEQ ID NO:)。9.如权利要求1所述的方法，其中反向条形码引物包含以下核酸序列：GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGGGTAAGTGCTGATCTTGGATGTGACG(SEQ ID NO:)。10.一种用于添加与抗体连接的条形码识别序列的方法，所述方法包括以下步骤：i)进行靶gDNA的加条形码PCR反应，其中使用a)含有细胞条形码序列和PCR柄的引物；b)含有与靶基因组DNA互补的序列和PCR柄的引物，所述引物与含有所述细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：使命生物公司，
类型：发明
国别省市：