一种快速培养结核分枝杆菌的培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种快速培养结核分枝杆菌的培养基及其制备方法和应用，通过以牛血清白蛋白、葡萄糖、Dubos肉汤基础、甘油和吐温为原料并进行适当重量配比，牛血清白蛋白对结核分枝杆菌可起到生理和机械保护作用，葡萄糖和Dubos肉汤基础为结核杆菌提供快速生长所需碳源和营养物质，而甘油和吐温能够有效防止结核分枝杆菌在增殖过程中聚集成团，配合碳源和营养物质，从而避免细胞生长接触抑制，有利于结核分枝杆菌快速、高密度增殖以及应用于结核病的研究。应用所述培养基快速培养结核分枝杆菌的方法，通过先用Sauton培养基对结核分枝杆菌进行活化，再进行培养，能够实现快速、高密度培养结核分枝杆菌，培养周期缩短为15

【技术实现步骤摘要】
一种快速培养结核分枝杆菌的培养基及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于培养基
，具体涉及一种快速培养结核分枝杆菌的培养基及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]结核分枝杆菌，俗称结核杆菌(tubercle bacillus)，是引起结核病的病原菌。结核杆菌培养在结核病诊断、观察化疗效果、流行病学指标、研究抗结核药物作用等方面都有决定性意义。长期以来，现有技术中一直采用罗氏培养基进行培养，然而结核分枝杆菌生长缓慢，常规培养方法的培养周期一般为30天左右，严重影响了结核病的检测及相关药物研究。
[0003]现有技术常通过优化培养基来缩短结核分枝杆菌的的生长周期。谭立等发现植物激素对结核杆菌有明显促进增殖作用，使用含有植物激素的培养基对痰标本中结核杆菌进行培养，获得痰标本阳性培养结果的时间平均为15天，但其成本较高。黄其文等以新鲜椰子汁和马血清为基础成分，研制一种快速培养结核分枝杆菌的新型液体培养基，但其成本较高，且主要用于结核杆菌检测，难以实现高密度培养。
[0004]综上所述，现有技术中的结核杆菌培养基中，仍存在成本高，难以实现高密度培养，无法满足开发结核分枝杆菌疫苗的需求等问题。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术存在的以上问题，本专利技术提供了一种价格低廉、适用于快速、高密度培养结核分枝杆菌的培养基及其制备方法和应用。
[0006]本专利技术所采用的技术方案为：
[0007]一种快速培养结核分枝杆菌的培养基，所述培养基的原料包括牛血清白蛋白、葡萄糖、Dubos肉汤基础、甘油和吐温。
[0008]所述牛血清白蛋白、葡萄糖和Dubos肉汤基础的质量比为(3
‑
7)：(5.5
‑
9.5)：(1.0
‑
1.6)，包括但不限于4:6:1.2、5:7:1.4、5.5:8:1.5、6:8.5:1.5或6.5:9:1.4。
[0009]所述甘油在所述培养基中的体积百分比为0.03％
‑
0.07％，包括但不限于0.04％、0.05％或0.06％；
[0010]所述吐温在所述培养基中的体积百分数为0.06％
‑
0.1％，包括但不限于0.07％、0.08％或0.09％；
[0011]所述吐温为吐温80。
[0012]所述快速培养结核分枝杆菌的培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0013](1)按照上述重量取血清白蛋白溶液和葡萄糖，溶于生理盐水中，除菌，得到牛血清白蛋白溶液；
[0014](2)按照上述重量取Dubos肉汤基础，溶于去离子水中，加热至沸腾后，降温至50
‑
60℃，灭菌，得到Dubos肉汤基础溶液；
[0015](3)向步骤(2)所得Dubos肉汤基础溶液中加入所述牛血清白蛋白溶液、甘油和吐温，即得所述快速培养结核分枝杆菌的培养基。
[0016]步骤(1)中，所述除菌为使用无菌滤器过滤进行除菌；优选为使用0.22
‑
0.4μm(例如0.22μm、0.3μm或0.35μm)无菌滤器过滤除菌。
[0017]步骤(2)中，所述灭菌为采用高压蒸汽进行灭菌，优选为采用115
‑
121℃高压蒸汽进行灭菌15
‑
30min；灭菌后，降温至50
‑
60℃，得到所述Dubos肉汤基础溶液。
[0018]所述的培养基在快速培养结核分枝杆菌中的应用。
[0019]应用所述培养基快速培养结核分枝杆菌的方法，步骤如下：
[0020](S1)配制Sauton培养基，将结核分枝杆菌的菌落或冻干粉溶解于所述Sauton培养基进行活化，得到活化后的结核分枝杆菌；
[0021](S2)将步骤(S1)活化后的结核分枝杆菌加入到所述快速培养结核分枝杆菌的培养基中进行培养，实现结核分枝杆菌的快速培养。
[0022]本专利技术中，采用Sauton培养基活化结核分枝杆菌，能够进一步加快结核分枝杆菌的增殖速度。
[0023]步骤(S2)中，培养温度为25
‑
30℃，包括但不限于26℃、27℃、28℃或29℃；培养周期为15
‑
16天。
[0024]本专利技术具体如下有益效果：
[0025](1)本专利技术所述的快速培养结核分枝杆菌的培养基，通过采用牛血清白蛋白、葡萄糖、Dubos肉汤基础、甘油和吐温为原料并进行适当重量配比，其中牛血清白蛋白对结核分枝杆菌可起到生理和机械保护作用，葡萄糖和Dubos肉汤基础为结核杆菌提供快速生长所需的碳源和营养物质，而甘油和吐温能够有效防止结核分枝杆菌在增殖过程中聚集成团，配合碳源和营养物质，从而避免了细胞生长接触抑制，有利于结核分枝杆菌快速、高密度增殖以及应用于结核病的研究。
[0026](2)本专利技术所述的快速培养结核分枝杆菌的方法，通过先利用Sauton培养基对结核分枝杆菌进行活化，之后将活化后的结核分枝杆菌加入所述快速培养结核分枝杆菌的培养基中进行培养，能够实现快速、高密度培养结核分枝杆菌，将培养周期缩短为15
‑
16天。
附图说明
[0027]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0028]图1为实施例1中结核分枝杆菌的生长曲线；
[0029]图2为实施例1中培养前培养液染色镜检图；
[0030]图3为实施例1中培养结束后培养液染色镜检图；
[0031]图4为实施例2中结核分枝杆菌的生长曲线；
[0032]图5为实施例3中结核分枝杆菌的生长曲线；
[0033]图6为实施例4中结核分枝杆菌的生长曲线；
[0034]图7为对比例1中结核分枝杆菌的生长曲线。
具体实施方式
[0035]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施病例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本专利技术所保护的范围。
[0036]以下实施例中试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
[0037]实施例1
[0038]本实施例提供一种快速培养结核分枝杆菌的培养基，采用如下方法制得：
[0039](1)称取5g牛血清白蛋白(BSA)粉末及7.5g无水D
‑
葡萄糖粉末，并溶解于100g生理盐水中，待完全溶解后使用0.22μm的无菌滤器过滤，得到BSA溶液；
[0040](2)称取1.3gDubos肉汤基础粉末(美国BD公司Dif本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速培养结核分枝杆菌的培养基，其特征在于，所述培养基的原料包括牛血清白蛋白、葡萄糖、Dubos肉汤基础、甘油和吐温。2.根据权利要求1所述的快速培养结核分枝杆菌的培养基，其特征在于，所述牛血清白蛋白、葡萄糖和Dubos肉汤基础的质量比为(3
‑
7)：(5.5
‑
9.5)：(1.0
‑
1.6)。3.根据权利要求1所述的快速培养结核分枝杆菌的培养基，其特征在于，所述甘油在所述培养基中的体积百分比为0.03％
‑
0.07％。4.根据权利要求1所述的快速培养结核分枝杆菌的培养基，其特征在于，所述吐温在所述培养基中的体积百分数为0.06％
‑
0.1％。5.根据权利要求1所述的快速培养结核分枝杆菌的培养基，其特征在于，所述吐温为吐温80。6.权利要求1
‑
5所述快速培养结核分枝杆菌的培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)按照上述重量取血清白蛋白溶液和葡萄糖，溶于生理盐水中，除菌，得到牛血清白蛋白溶液；(2)按照上述重量取Dubos肉汤基础，溶于去离子水中，加热至沸腾后，降温至50
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【专利技术属性】
技术研发人员：周玉美，王济，
申请(专利权)人：王济，
类型：发明
国别省市：