一种用于在线富集-分离串联系统优化梯度程序的方法技术方案

本发明专利技术公开了一种用于在线富集

【技术实现步骤摘要】
一种用于在线富集
‑
分离串联系统优化梯度程序的方法


[0001]本专利技术涉及液相色谱
，尤其涉及一种用于在线富集
‑
分离串联系统优化梯度程序的方法。

技术介绍

[0002]在线选择性富集分离的前处理方法常用于生物样品分析中，与常规的离线前处理方法相比，简化了实验流程，减少了手工操作，不仅提高了工作效率，而且最大限度地减少了人为误差，提高了结果的准确度和精密度。在线富集和液相联用则使其应用更加广泛，是一种前景广阔的应用技术。但开发此类方法时，需考察的因素繁多，过程复杂耗时，现有技术中没有实现在线富集
‑
分离串联系统过程进行完整分析建模，并优化梯度程序。

技术实现思路

[0003]专利技术目的：针对现有技术中没有实现在线富集
‑
分离串联系统过程进行完整分析建模，并优化梯度程序的缺陷，本专利技术公开了一种用于在线富集
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分离串联系统优化梯度程序的方法，通过对在线富集
‑
分离串联系统过程进行完整分析建模，并快速优化梯度程序本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于在线富集
‑
分离串联系统优化梯度程序的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、拟合等度条件下待测组分保留时间与流动相中有机相体积分数之间的保留方程以及等度条件下待测组分保留时间与半峰宽之间的线性方程，确定拟合参数；S2、在流动相流速恒定时，构建待测组分在梯度洗脱条件下的待测组分保留时间、流动相中有机相体积分数、半峰宽之间的基本方程；S3、构建在线富集
‑
分离串联系统，待测组分进入在线富集
‑
分离串联系统时依次经过富集、反冲、分离三个阶段；根据步骤S2中的基本方程分别计算待测组分在富集、反冲、分离三个阶段中的待测组分保留时间、半峰宽和分离度，进而计算汇总待测组分在整个在线富集
‑
分离串联系统过程中的待测组分保留时间、半峰宽和分离度；S4、优化在线富集
‑
分离串联系统的梯度程序：按给定的分离度最小值、分离度最大值，根据步骤S2计算梯度程序下各组分的分离度，选择使所有组分色谱峰基线分离度且分析时间最短的梯度程序作为最佳梯度洗脱程序，并输出此最佳梯度洗脱程序，以及该程序对应的色谱参数，包括各组分的保留时间、半峰宽及组分之间的分离度。2.根据权利要求1所述的一种用于在线富集
‑
分离串联系统优化梯度程序的方法，其特征在于：所述步骤S1具体包括：输入分离度最小值、分离度最大值、进样体积、色谱柱柱长、仪器延迟时间和死时间、流动相比例及对应待测组分的保留时间、半峰宽、峰面积和峰高，等度条件下待测组分保留时间与流动相中有机相体积分数之间的保留方程为：其中，t
′
R
为待测组分调整保留时间，t0为色谱柱死时间，t
R
为待测组分保留时间，为流动相中有机相体积分数，a、b、c为拟合参数；测量t0以及待测组分在不同下的t
′
R
，计算拟合参数a、b、c；等度条件下待测组分保留时间与半峰宽之间的线性方程为：W
1/2
＝At
′
R
+B其中，W
1/2
为半峰宽，A、B为拟合参数；测量待测组分在不同下的t
′
R
和W
1/2
，计算拟合参数A、B。3.根据权利要求1所述的一种用于在线富集
‑
分离串联系统优化梯度程序的方法，其特征在于，所述步骤S2中待测组分保留时间、流动相中有机相体积分数、半峰宽之间的基本方程包括：
其中，L
column
为色谱柱柱长，t
′
R
为待测组分调整保留时间，a
′
、b、c
′
、A、B为拟合参数，分别为第i、第i+1阶梯度流动相中有机相的起始体积分数，t
i
、t
i+1
分别为第i、第i+1阶梯度的起始时间；t
d
为流动相从设定时间开始至其到达色谱柱柱头为止、在系统管路中的延迟时间，t为任意时刻，W
′
1/2_t
为待测组分在t时刻的半峰宽，为梯度程序中任意极小时间内待测组分的半峰宽，W
′
1/2_Front
、W
′
1/2_Back
分别为流动相前进方向前端的半峰宽、流动相前进方向后端的半峰宽。4.根据权利要求1所述的一种用于在线富集
‑
分离串联系统优化梯度程序的方法，其特征在于，所述步骤S3中构建在线富集
‑
分离串联系统，待测组分进入在线富集
‑
分离串联系统时依次经过富集、反冲、分离三个阶段，具体包括：在线富集
‑
分离串联系统设有六通阀，六通阀1
‑
6相通时，进入富集过程：含待测组分的样品溶液流经富集柱，富集待测组分，并淋洗杂质；六通阀切换至1
‑
2相通时，进入反冲过程：待测组分由富集柱反冲进分析柱；六通阀切换至1
‑
6相通时，进入分离过程：左泵清洗富集柱的同时，右泵分析柱分离样品。5.根据权利要求4所述的一种用于在线富集
‑
分离串联系统优化梯度程序的方法，其特征在于，所述步骤S3中待测组分在整个在线富集
‑
分离串联系统过程中的待测组分保留时间、半峰宽和分离度，其计算公式包括：其中，t
R
、W
1/2
、R分别为整个在线富集
‑
分离串联系统过程中的待测组分保留时间、半峰宽和分离度，t
′
Enrichment
、W
′
1/2_Enrichment
、R分别为富集阶段中的待测组分保留时间、半峰宽和分离度，t
′
backwash
、W
′
1/2_backwash
、R分别为反冲阶段中的待测组分保留时间、半峰宽和分离度，t
′
separation
、W
′
1/2_separation
、R分别为分离阶段中的待测组分保留时间、半峰宽和分离度。6.根据权利要求5所述的一种用于在线富集
‑
分离串联系统优化梯度程序的方法，其特征在于，所述步骤S3中富集阶段中的待测组分保留时间、半峰宽和分离度的计算公式包括：
其中，t
′
enrichment
为富集阶段中的待测组分保留时间；V
sample
为定量环的体积，F为流动相流速，L
enrichment
为待测组分在富集柱上的移动距离；L
column1
为富集柱柱长；分别为第i、第i+1阶梯度流动相中有机相的起始体积分数，t
i
、t
i+1
分别为第i、第i+1阶梯度的起始时间；t
d
为流动相从设定时间开始至其到达色谱柱柱头为止、在富集柱中的延迟时间，t为任意时刻；W
′
1/2_Enrichment
为富集阶段待测组分的半峰宽；a
′
、b、c
′
、A、B为拟合参数，t
′
R(t)
为极小时间间隔时待测组分在该流动相组成时的调整保留时间，t0为系统死时间，t
...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩疏影，宋易霖，胡家淳，刘睿，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：