孔蛋白单体的突变体、蛋白孔及其应用制造技术

本发明专利技术属于靶分析物特性的表征技术领域，具体提供了一种孔蛋白单体的突变体、包含其的蛋白孔、以及其检测靶分析物的应用，其中所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括SEQ ID NO:1所示的序列或与其具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、80％、70％、60％或50％同一性的序列，并且所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括在对应SEQ ID NO:1的S79、S80、和F81的一个或多个位置处的突变。个或多个位置处的突变。

【技术实现步骤摘要】
孔蛋白单体的突变体、蛋白孔及其应用


[0001]本专利技术属于靶分析物特性的表征
，特别涉及一种孔蛋白单体的突变体、包含其的蛋白孔以及其检测靶分析物的应用。

技术介绍

[0002]随着对核酸结构和序列的研究，核酸测序技术不断发展，成为生命科学研究的核心领域，对生物、化学、电学、生命科学、医学等领域的技术发展起到巨大的推动作用。利用纳米孔研究出新型的快速、准确、低成本、高精度及高通量的核酸测序技术是后人类基因组计划的热点之一。
[0003]纳米孔(Nanopore)测序技术，又被称为第四代测序技术，是一种以单链核酸分子作为测序单元，利用一个能够提供离子电流通道的纳米孔，使得单链核酸分子在电泳驱动下通过该纳米孔，当核酸通过纳米孔时，会减少纳米孔的电流，对产生的不同信号实时读取序列信息的基因测序技术。
[0004]纳米孔测序主要特点是：读长很长，准确率较高，错误区大都发生在均聚寡核苷酸区域。纳米孔测序不但可实现天然DNA和RNA测序还可直接获取DNA和RNA的碱基修饰信息，例如它能够直接读取出甲基化的胞嘧啶，而不必像二代测序方法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种孔蛋白单体的突变体，其中所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括SEQ ID NO:1所示的序列或与其具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、80％、70％、60％或50％同一性的序列，并且所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括在对应SEQ ID NO:1的S79、S80、和F81的一个或多个位置处的突变。2.根据权利要求1所述的孔蛋白单体的突变体，所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括在对应SEQ ID NO:1的76
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81、76
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220、69
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81、69
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85、69
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220、79
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81、或79
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220的一个或多个位置处的突变。3.根据权利要求1或2所述的孔蛋白单体的突变体，所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括：(1)对应SEQ ID NO:1的I76、S79、S80、和F81的一个或多个位置处具有氨基酸的插入、缺失和/或替换；(2)对应SEQ ID NO:1的Q69、I76、S79、S80、F81、D136、和E220的一个或多个位置处具有氨基酸的插入、缺失和/或替换；或(3)对应SEQ ID NO:1的S79、S80、和F81的一个或多个位置处具有氨基酸的插入、缺失和/或替换。4.根据前述权利要求任一项所述的孔蛋白单体的突变体，其中所述SEQ ID NO:1所示的序列来源于Simiduia agarivorans。5.根据前述权利要求任一项所述的孔蛋白单体的突变体，其中所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸突变选自以下：(a)对应SEQ ID NO:1的I76突变为F、Y、W中的0至3种；S79突变为G、A、V、L、I中的0至5种；S80突变为G、A、V、L、I中的0至5种；F81突变为F、Y、W中的0至3种；(b)对应SEQ ID NO:1的Q69突变为G、A、V、L、I中的0至5种；I76突变为F、Y、W中的0至3种；S79突变为N、E、D、Q中的0至4种；S80突变为G、A、V、L、I中的0至5种；F81突变为F、Y、W中的0至3种；D136突变为K、H、R中的0至3种；E220突变为G、A、V、L、I中的0至5种；和(c)对应SEQ ID NO:1的S79突变为G、A、V、L、I中的0至5种；S80突变为G、A、V、L、I中的0至5种；F81突变为F、Y、W中的0至3种。6.根据前述权利要求任一项所述的孔蛋白单体的突变体，其中所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸突变选自以下：(a)对应SEQ ID NO:1的I76Y、S79V、S80A、和F81缺失；(b)对应SEQ ID NO:1的Q69L、I76Y、S79N、S80A、F81缺失、D136K、和E220I；(c)对应SEQ ID NO:1的I76Y、S79G、S80G、和F81缺失；和(d)对应SEQ ID NO:1的S79V、S80A和F81缺失。7.根据前述权利要求任一项所述的孔蛋白单体的突变体，其中所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸序列包括SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、或SEQ ID NO:19，或由其组成。8.一种孔蛋白单体的突变体，其中所述孔蛋白单体的突变体的氨基酸包括SEQ ID NO:1所示的序列或与其具有至少99％、98％、97％、96％、95％、90％、80％、70％、60％或50％同一性的序列，并且所述孔蛋白单体的突变体包括：(1)在对应SEQ ID NO:1的Q69、I76、S79、S80、F81、D136、和E220的一个或多个位置处具有突变；(2)在对应SEQ ID NO:1的Q69L、I76Y、S79V/S79N/S79G、S80A/S80G、F81缺失、D136K、和
E220I的一个或多个位置处具有突变；(3)在对应SEQ ID NO:1的S79、S80、和/或F81处具有突变，并额外在Q69、I76、D136、和E220的至...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘少伟，李倩雯，岳飞飞，谢馥励，
申请(专利权)人：成都齐碳科技有限公司，
类型：发明
国别省市：