FMRP及癌症治疗制造技术

本发明专利技术提供了下调i)FMRP蛋白、ii)编码FMRP蛋白的mRNA和/或iii)FMR1基因的表达和/或免疫抑制活性的组合物和方法，用于在有需要的受试者中治疗和/或预防原发性癌症和/或癌症转移。症转移。症转移。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】FMRP及癌症治疗
[0001]相关申请
[0002]本申请要求于2019年5月7日提交的欧洲专利申请序列号19172927.6的优先权权益，其内容通过引用整体并入本文。


[0003]本专利技术提供了用于调节i)FMRP蛋白(以下称为“FMRP”)、ii)编码FMRP的mRNA和/或iii)编码FMRP的FMR1基因的表达和/或活性的组合物和方法，用于在有需要的受试者中治疗和/或预防癌症和/或癌症转移。

技术介绍

[0004]免疫检查点受体的发现和基于检查点阻断的免疫疗法的发展是癌症基础研究和临床治疗中最显著的成功之一，因为它提高了治愈某些恶性肿瘤的可能性1。靶向T细胞共抑制免疫检查点如程序性死亡1(PD
‑
1)或其配体(PD
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L1)、细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA
‑
4)的免疫调节剂已被批准用于治疗不同类型的恶性肿瘤1。
[0005]然而，在人类癌症类型的范围内，患有不同形式癌症的患者中有很大比例(40％至90％)几乎没有或没有受益于众所周知的基于PD
‑
1或CTLA
‑
4阻断的免疫疗法2，尤其包括那些患有胰腺导管腺癌(PDAC)的患者
3,4
。因此，仍然迫切需要额外的免疫治疗策略。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了能够下调i)FMRP蛋白、ii)编码FMRP蛋白的mRNA和/或iii)编码FMRP的FMR1基因的表达和/或免疫抑制活性的剂，以用于在有需要的受试者中治疗和/或预防原发性癌症和/或癌症转移。
[0007]还提供了一种质粒或载体，其包含一种或多种编码本专利技术的miRNA、siRNA、piRNA、hnRNA、snRNA、esiRNA、shRNA和/或反义寡核苷酸的核酸。
[0008]进一步提供了一种宿主细胞，其包含本专利技术的质粒或载体或一种或多种编码本专利技术的miRNA、siRNA、piRNA、hnRNA、snRNA、esiRNA、shRNA和/或反义寡核苷酸的核酸。
[0009]还提供了一种质粒或载体，其包含一种或多种编码本专利技术的肽或其类似物、抗体或所述抗体的抗原结合片段、或抗体模拟物的核酸的质粒或载体。
[0010]进一步提供了一种宿主细胞，其包含本专利技术的质粒或载体、或一种或多种编码本专利技术的肽或其类似物、抗体或所述抗体的抗原结合片段、或抗体模拟物的核酸。
[0011]还提供了一种药物组合物，包括：
[0012]i)治疗有效量的能够调节FMRP蛋白、编码FMRP的mRNA和/或FMR1基因的表达和/或活性的剂，或
[0013]ii)本专利技术的质粒或载体，或
[0014]iii)本专利技术的宿主细胞，
[0015]和药学上可接受的载体或稀释剂。
WT2和KO2细胞形成的原发性肿瘤中CD45+免疫细胞的IF染色和定量，比例尺，100μm，每组n＝3只小鼠；(C
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G)FACS分析用于确定在免疫活性小鼠中生长的PDAC WT和FMRP KO肿瘤中CD45+免疫细胞、CD3+CD8+T细胞和活化的GRZb+、IFNγ+和TNFα+、CD8 T细胞的频率。每组n＝4至5只小鼠，两个独立实验。使用未配对的T检验。(H)来自FVBN背景的P48
‑
cre；LSL
‑
KrasG12D；P53R172H/+PDAC小鼠模型的小鼠PDAC组织中心和边缘的FMRP和CD8表达的代表性双重免疫染色图像。n＝8个小鼠PDAC样本。使用配对T检验。比例尺，100μm。数据支持FMRP阻止在KO肿瘤中可见的CD8 T细胞流入的解释(图A)。对CD8和FMRP的人PDAC组织微阵列的免疫染色(未显示)显示浸润性CD8 T细胞的密度与FMRP的表达之间呈负相关，这与小鼠PDAC中的结果一致。
[0022]图3A
‑
3D。癌细胞中的FMRP KO使原本对涉及抗PD1抗体治疗的免疫疗法有抗性的PDAC肿瘤敏感。(A，B)FMRP缺失不会在体外或体内抑制小鼠PDAC细胞中的PD
‑
L1表达。(A)小鼠PDAC WT和FMRP KO细胞中PD
‑
L1表达的WB分析，三个独立实验。(B)免疫染色以检测小鼠PDAC WT和FMRP KO细胞形成的肿瘤中的PD
‑
L1表达，比例尺，100μm，每组n＝3只小鼠。(C，D)没有或有抗PD
‑
1抗体治疗的PDAC WT2和KO2肿瘤生长曲线(I.P.，每只小鼠200ug，每周两次)，均在FVBn小鼠中。每组n＝7至11只小鼠，使用未配对的T检验。(C)该结果表明由该小鼠PDAC癌细胞系产生的PDAC肿瘤对抗PD
‑
1治疗不敏感。(D)与此形成鲜明对比的是，FMRP KO严重损害了PDAC肿瘤的生长，这与CD8 T细胞的流入增加有关(如图1G
‑
I、2A和4D所示)，表明FMRP抑制剂可能对抗PD1/PD
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L1疗法有抗性的肿瘤具有治疗功效。
[0023]图4A
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4D。在小鼠PDAC中编码FMRP和RNAA
‑
to
‑
I编辑蛋白ADAR1的基因的联合缺失可进一步延长生存期。(A)FMRP和ADAR1在PDAC癌细胞中相互作用，通过小鼠PDAC 4361.12WT2细胞中的免疫共沉淀实验确定。在用兔抗FMRP抗体(Abcam,ab191411)免疫沉淀之前和之后，在对总细胞裂解物的蛋白质印迹中可视化FMRP和ADAR1。正常rIgG抗体用作对照。三个独立实验。(B)FMRP
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ADAR1相互作用也通过反向共免疫沉淀实验进行验证，其中FMRP和ADAR1通过在使用小鼠抗ADAR1抗体(Santa Cruz，sc73408)免疫沉淀之前和之后对总细胞裂解物进行免疫染色蛋白质印迹来显示。正常mIgG抗体用作对照。三个独立实验。(C)WT2、FMRP KO、ADAR1 KO和FMRP/ADAR1双KO细胞中FMRP和ADAR1表达的蛋白质印迹验证，这些细胞是通过靶向小鼠FMR1和ADAR1基因的Cas9/SgRNA载体的瞬时转染产生的。三个独立实验。(D)注射有WT2、FMRP KO、ADAR1 KO和FMRP/ADAR1双KO细胞的FVBn小鼠的总体存活率；使用Kaplan
‑
Meier检验。简而言之，5X10^5个细胞被s.c.注射到FVBN小鼠的侧腹。小鼠每周监测两次，并在肿瘤体积达到1000mm^3时处死小鼠。
[0024]图5A
‑
5I。在另一个肿瘤类型结肠癌的癌细胞中FMRP的缺失同样会损害具有免疫活性但非免疫缺陷小鼠中的肿瘤生长。(A)AKP(ApcΔ/Δ；Kras
G12D/+
；Trp53Δ/Δ；CDX2 Cre ERT2)或APC(ApcΔ/Δ；CDX2 Cre ER本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种调节i)FMRP蛋白、ii)编码FMRP的mRNA和/或iii)FMR1基因的表达和/或活性的剂，用于在需要的受试者中治疗和/或预防癌症和/或癌症转移之用途。2.如权利要求1所述的剂，其中所述FMRP蛋白的表达和/或活性的调节包括所述FMRP蛋白与其mRNA靶标和/或与其他蛋白的调节相互作用。3.如权利要求1或2所述之用途的剂，其中所述癌症和/或癌症转移对免疫疗法存在固有抗性或已获得对免疫疗法的适应性抗性。4.如权利要求1至3中任一项所述之用途的剂，其中所述剂抑制编码FMRP的RNA的翻译。5.如权利要求1至3中任一项所述之用途的剂，其中所述剂抑制编码FMRP的FMR1基因的转录。6.如权利要求1至3中任一项所述之用途的剂，其中所述剂抑制或破坏所述FMRP与靶mRNA或miRNA的结合。7.如前述权利要求中任一项所述之用途的剂，其中所述剂是化合物、肽或其类似物、抗体或所述抗体的抗原结合片段、抗体模拟物或核酸。8.如权利要求7所述的剂，其中所述核酸选自包括编码miRNA、siRNA、piRNA、hnRNA、snRNA、sg RNA、基于CRISPR的功能丧失系统、esiRNA、shRNA和反义寡核苷酸、或它们的组合的核酸的组。9.一种质粒或载体，其包含一种或多种编码权利要求7所述的miRNA、siRNA、piRNA、hnRNA、snRNA、sgRNA、基于CRISPR的功能丧失系统、esiRNA、shRNA和/或反义寡核苷酸的核酸。10.一种宿主细胞，其包含权利要求9所述的质粒或载体或一种或多种编码权利要求8所述的miRNA、siRNA、piRNA、hnRNA、snRNA、sgRNA、基于CRISPR的功能丧失系统、esiRNA、shRNA和/或的反义寡核苷酸的核酸。11.如权利要求7所述的剂，其中所述核酸选自包括编码肽或其类似物、抗体或所述抗体的抗原结合片段、或抗体模拟物的核酸的组。12.一种质粒或载体，其包含一种或多种编码权利要求11所述的肽或其类似物、抗体或所述抗体的抗原结合片段、或抗体模拟物的核酸。13.一种药物组合物，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾启群，D，
申请(专利权)人：洛桑联邦理工学院，
类型：发明
国别省市：