生物结合分子制造技术

本发明专利技术涉及诸如抗体或其片段之类的生物结合分子的制备、鉴定和选择领域，以及涉及所述生物结合分子在例如特别是B细胞恶性肿瘤之类的癌症的诊断和治疗中的用途。所述结合分子能够选择性地与具有根据SEQ ID NO.18的轻链的B细胞受体结合。的B细胞受体结合。的B细胞受体结合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生物结合分子


[0001]本专利技术涉及抗体或其片段的制备、鉴定和选择的领域，以及所述抗体或其片段在例如特别是B细胞恶性肿瘤之类的癌症的预防和治疗及伴随诊断中的用途。

技术介绍

[0002]B细胞恶性肿瘤通常指的是造血系统或淋巴系统的恶性疾病。其包括例如白血病之类的临床表现，在更广泛的意义上，包括癌症。白血病的特征在于白细胞的无功能的前体细胞(也称为白血病细胞)的增殖。这些细胞在骨髓中扩散，在该处抑制常规的造血并且通常在外周血中大量增殖积聚。这些细胞可能会浸润肝、脾、淋巴结和其他器官，进而损害其功能。对造血的干扰会导致正常血液成分的减少，从而会因缺少输送氧气的红细胞、缺少止血的血小板以及缺少成熟的、有功能的白细胞而引起贫血。
[0003]根据疾病病程，区分急性和慢性白血病。急性白血病是危及生命的疾病，如果不及时治疗，可能会在几周到几个月内致人死亡。而慢性白血病通常会持续数年并且在早期阶段通常是无症状的。
[0004]白血病的主要形式有：
[0005]急性髓细胞白血病(AML)；
[0006]慢性髓细胞白血病(CML)；
[0007]急性淋巴细胞白血病(ALL)；
[0008]慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
[0009]通常以化疗的形式对白血病进行治疗。较新的治疗形式更多地集中于例如GA101(obinutuzumab阿托珠单抗)之类的单克隆抗体的使用，其以与Rituximab(利妥昔单抗)和Ofatumumab(奥法木单抗)类似的方式用作CD20抗体，用于治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL)。通过使用这些抗体可以将完全缓解时间延长约10个月。
[0010]造血或淋巴系统的其他恶性疾病(B细胞恶性肿瘤)涉及淋巴瘤，例如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤的B细胞变异体。
[0011]如果生成针对受体的抗体，则通常借助受体(以纯化、克隆的方式或作为肽片段)使动物免疫并产生杂交瘤细胞。这些杂交瘤细胞产生抗体，然后借助ELISA或细胞系统中表达的受体对这些抗体进行测试。为此要使用常规建立的细胞系，因为只有这些细胞系才易于进行培养。在此情况下，可以产生与特定类型受体(例如抗IgG1、抗IgE)相对特异性结合的抗体。然而，在此情况下通常会引起与其他受体或其他表位的交叉反应。
[0012]就BCR抗体的诊断或治疗用途而言，仅使用一种针对BCR的抗体通常是不够的，因为这种广谱使用可能会导致假阳性结果或引起相当大的副作用。确切地说，需要提供与受体选择性结合的抗体，该受体具有包括根据SEQ ID NO.18的表位VL3
‑
21的轻链。此轻链的表位在肿瘤性B细胞中表达过度。现有技术中未揭露过这种抗体，并且未揭露过通过选择制备或获得这种抗体的方法。
[0013]用于治疗白血病的现有技术疗法对患者造成了很大的负担。一般而言，可以总结
得出，治疗的非期望的副作用以及药物的效果不足致使这种疾病的死亡率较高，因为肿瘤细胞以及免疫系统的健康细胞都会受到损害。此外，通常无法完全治愈，而只是实现疾病得到有效缓解的一定时间段。因此，对于待治疗的患者的确定和选择以及个体治疗计划的制定而言，重要的是具有可用的诊断手段和诊断方法，用于有所区别地检测出B细胞恶性肿瘤的某些形式。

技术实现思路

[0014]因此，本专利技术的目的是提供用于诊断、预防和/或治疗用途的替代性的理念和有效成分，例如特别是替代性的抗体，用以克服现有技术现存的问题。本专利技术优选还应适用于检测存在适用于抗体的治疗用途(“伴随诊断”)的表面结构。
[0015]在详细探讨本专利技术的各个方面之前，先对本说明书中所使用的相关术语进行阐释。
[0016]在此所使用的术语“瘤形成”通常表示身体组织的新生。如果这是一种病理或恶性表现形式，则称为恶性肿瘤。因此，B细胞恶性肿瘤指的是B细胞的恶性且不受控制地形成新组织，其中这个术语同样涉及到所有B细胞相关癌症，例如白血病和B细胞淋巴瘤。
[0017]“用于杀死肿瘤的区域”可以通过直接或间接作用杀死肿瘤。就特定抗体的治疗用途而言，将分子与抗体、这个抗体的功能片段或者另一包含这个抗体或其片段的生物结合分子结合，以便产生超越结合抗体或其片段的效果的效果。这种分子例如可以选自由免疫毒素、细胞因子、螯合剂、放射性同位素及其组合构成的组。
[0018]在本案中，“生物结合分子”例如但不完全是指包括融合蛋白的抗体。有利地并且因此优选地，这种抗体选自由IgG抗体、IgM抗体、人源化IgG抗体和嵌入了表位的识别序列的人抗体构成的组。这种结合分子也可以以整个抗体的功能片段的形式提供，例如Fab片段。结合分子还可以包括其他区域，这些区域例如用于杀死/消灭肿瘤，因此具有免疫毒素和/或免疫细胞因子的功能。这种结合分子特别是也可以是膜结合型或细胞介导的。结合分子的这种膜结合形式例如是CAR
‑
T细胞上的嵌合抗原受体(“Chimeric
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Antigen Receptor”)。
[0019]此外，结合分子还可以包含其他区域或附加的实体，其有利地用于诊断用途。在使用流式细胞术的情况下，这些区域或实体可以是荧光染料(例如：FITC、R
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藻红蛋白(R
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PE)、别藻蓝蛋白(APC))或生物素以及本领域技术人员已知的其他物质。此外，在使用免疫组化法的情况下，结合分子也可以与底物转化酶(例如HRP)一同使用。此外，针对诊断目的还可以提供融合蛋白，其中荧光蛋白(例如绿色荧光蛋白(GFP))与抗体的FC部分偶联以进行检测。
[0020]B细胞表面上的B细胞受体复合物(BCR)的任务是识别和结合病原体。这种结合会导致BCR的构象发生变化，从而触发信号级联放大，这最终导致B细胞的活化。在成熟的B细胞中以多种方式形成BCR。
[0021]B细胞在人类以及其他一些哺乳动物的骨髓或胎肝中发育。发育中的淋巴细胞从所谓的基质细胞接收发育程序所需的信号。在B细胞发育的过程中，功能性B细胞受体(“抗体”的膜结合形式)的形成至关重要。成熟的B细胞只有借助这个抗原受体才能识别外来抗原，并通过形成相应的抗体而与敌对结构结合。通过关联特定基因片段来确定受体的抗原
特异性。这些片段称为V、D和J片段，因此，这个过程被称为V(D)J重组。在此情况下，对这些形成B细胞受体的抗原结合部分的片段进行重新排列。整个受体由两条相同的蛋白轻链和两条相同的蛋白重链组成，其中这些重链和这些轻链通过二硫键相互联接。
[0022]每条轻链由一个可变区和一个恒定区构成，其中可变区决定抗原识别，而恒定区则确定了五种免疫球蛋白类别或者在T细胞受体中负责膜锚定。轻链是通过体细胞重组由V和J基因库以及恒定链Lambda或Kappa构造而成。重链指的是三个组分，这些组分构成可变部分(V、D、J)。虽然迄今为止的研究主要集中在重链上并且已进行了很好的研究，但迄今对轻链的关注却很少。由轻链已知两个基因座，即一个针对具有40个V基因片段的Kappa的座和一个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种生物结合分子，所述生物结合分子选择性地与B细胞受体结合，所述B细胞受体特征在于存在具有根据SEQ ID NO.18的序列的轻链，所述生物结合分子不与无根据SEQ ID NO.18的轻链的B细胞受体结合。2.根据权利要求1所述的生物结合分子，其特征在于，所述生物结合分子是抗体或抗体的功能片段。3.根据前述权利要求中任一项所述的生物结合分子，其特征在于，所述生物结合分子为具有T细胞特异性活化域的融合蛋白的形式。4.根据前述权利要求中任一项所述的生物结合分子，其特征在于，所述生物结合分子包括用于隔离或杀死B细胞肿瘤的至少另一区域。5.一种用于预防和/或治疗目的的、包括根据权利要求1至4中任一项所限定的生...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：阿瓦生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：