一种包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体及其制备方法和用途,所述脂质体包含以下组份:卵磷脂、胆固醇、IGY以及壳聚糖；其中,所述脂质体以卵磷脂和胆固醇形成的磷脂双分子层为脂质体骨架材料,所述IGY包埋于所述脂质体的内水相,所述壳聚糖包覆于所述脂质体中磷脂双分子层的内层表面和外层表面，所述卵磷脂选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种。基于本发明专利技术的脂质体稳定性好且包封率高。定性好且包封率高。定性好且包封率高。

【技术实现步骤摘要】
一种包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于口服制品领域，具体涉及一种包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]IgY在食品工业上的应用是多种多样，主要包括功能性食品的开发、抑菌保鲜以及致病菌、功能成分的免疫快速检测等。大量研究表明，鸡蛋中的IgY是一种具有较强免疫功能的蛋白质，将其作为食品添加剂或直接作为抗体食品的原料制成功能食品，对于疾病的防治及调节和增强人体免疫力方面会起到不可估量的作用。IgY是一种蛋白质免疫活性物质，对肠道蛋白酶的消化是相当稳定的，在pH 4～9时，温度达65℃时仍保持稳定，在pH<4时，仅一部分IgY失活，抗胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶分解能力都较强，尽管它性质比一般的蛋白质稳定，但通过口服时，在低pH的胃酸环境和胃蛋白酶双重作用下短时间内会被降解失去大部分抗体活性，从而不能完成被动免疫保护。对IgY的封装采用物理、化学或组合工艺等方法进行包埋，使其不被胃蛋白酶分解，而提高在到达小肠时的免疫活性。
[0003]壳聚糖通常由几丁质的化学或酶促脱乙酰化产生，几丁质是节肢动物的表皮中存在的最丰富的天然聚合物之一，使得其价格非常低廉。壳聚糖可以作为一种渗透增强剂，调节肠道屏障，它能瞬间打开上皮细胞之间的紧密连接，同时只作用于粘膜表面，以便后期清除，因此，壳聚糖为有效口服递送提供了非常有前景的研究材料。
[0004]传统的脂质体制备技术有薄膜水化法、反向蒸发法等。薄膜水化法首先是使用圆底烧瓶蒸发有机溶剂与脂质混合物形成脂质薄膜，然后复水形成脂质体，若复水时剧烈摇晃，可形成大小分布不均的多层囊泡，而温和水化时则产生巨单室囊泡，若想产生均一的囊泡，则需后续操作，如探头超声、水浴超声或通过聚碳酸酯薄膜多次挤出，此方法缺点：亲水性材料包封率低，有机溶剂残留，后续操作的污染及对脂质体囊泡的损伤等；反向蒸发法先将脂质混合物加入烧瓶后蒸发得到脂质薄膜，再加入有机相(乙醇或异丙醚)溶解形成倒置胶束后，加入水相形成油包水的两相体系超声分散，最后在低压下蒸发有机溶剂形成脂质体悬浮液，此法具有较高的内部荷载，但蒸发后的脂质体悬浮液为粘性凝胶且有有机溶剂残留。
[0005]SCCO2在食品等工业中是优选的溶剂，因为它无毒，成本低，加工温度低，不易燃并且易于与提取的化合物分离，通过SCCO2辅助技术制备的脂质体可以解决常规脂质体微囊化中溶剂残留的问题。Otake等通过SCCO2技术制备得到壳聚糖包覆的L
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R
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二棕榈酰磷脂酰胆碱阳离子脂质体，在不使用酸或有机溶剂(包括乙醇)的情况下，将壳聚糖、脂质材料和含有葡萄糖的水相同时放入反应釜中，然后从超临界状态减压将混合物转化为脂质体。虽然制备得到了稳定的脂质体，但是制备的脂质体的最大包封率低仅为17％，包封率低，尽管存在无有机溶剂残留等优点，但综合考虑包封率、SCCO2对高压设备的要求,与传统方法相比，使用SCCO2技术制备脂质体的应用相对有限。

技术实现思路

[0006]本专利技术解决的技术问题为：提供一种包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体及其制备方法和用途，以解决传统的脂质体制备方法中尺寸分布广、包封率低、稳定性差、有机溶剂残留的问题。
[0007]本专利技术提供的具体解决方案包括如下：
[0008]本专利技术提供了一种包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体(IgY
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CS
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LP),所述脂质体包含以下组份:卵磷脂、胆固醇(CHOL)、卵黄免疫球蛋白(IGY)以及壳聚糖(CS)；其中,所述脂质体以卵磷脂和胆固醇形成的磷脂双分子层为脂质体骨架材料,所述IGY包埋于所述脂质体的内水相,所述壳聚糖包覆于所述脂质体中磷脂双分子层的内层表面和外层表面，所述卵磷脂选自蛋黄卵磷脂(EPC)、大豆卵磷脂(SPC)、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种。
[0009]在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进：
[0010]进一步，所述卵磷脂、胆固醇、IGY以及壳聚糖的质量比为(18～22)：(4～6)：(1～1.5)：(18～22)。
[0011]进一步，所述卵磷脂为蛋黄卵磷脂。
[0012]基于本专利技术的包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体，具有如下有益效果：
[0013](1)壳聚糖提高了脂质体IgY
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CS
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LP的膜稳定性和机械强度，对IgY结构具有较好的包埋效果，提了IgY的胃部稳定性，延缓IgY的释放，提高其到达小肠的抗体活性。基于本专利技术的包载IgY的壳聚糖脂质体，壳聚糖会存在脂质体内层和外层，由于静电相互作用脂质双层膜的内表面和外表面，双分子层内外层表面的壳聚糖对脂质体膜中的磷脂具有固定作用，可阻碍磷脂的横向运动，提升脂质膜的刚性和机械稳定性；壳聚糖的加入使得脂质体表面具有较高的电荷，提高脂质体的稳定性，且壳聚糖本身壳具有一定的粘性，降低脂质体的流动性，从而进一步增强脂质体的稳定性；壳聚糖的静电作用和增粘机制使得脂质体的具有物理稳定性，增强缓释效果。
[0014]本专利技术还提供了一种包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体制备方法，包括如下步骤：
[0015]S1、将卵磷脂和胆固醇分散在pH为7～8的缓冲液中得到悬浮液A，将IgY溶解于所述悬浮液A，然后再将壳聚糖溶液分散于所述悬浮液A得到悬浮液B；所述悬浮液B中卵磷脂的浓度为5～10mg/mL，壳聚糖的含量为0.5％～1.4％；
[0016]S2、将悬浮液B在温度在40～60℃下，加压至5～25MPa下，搅拌0.5～2h后，孵育5～20min，泄压得到包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体(IgY
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CS
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LP)悬浮液。
[0017]进一步，所述缓冲液为磷酸盐缓冲盐溶液，pH为7.2～7.6。
[0018]进一步，所述壳聚糖溶液由壳聚糖溶解于1％～2％的乙酸溶液中制备得到。
[0019]进一步，壳聚糖溶液分散于所述悬浮液A的过程如下：将壳聚糖溶液加入所述悬浮液A中，然后以1000～1500r/min连续搅拌0.5～2h，然后超声5～20min，制备得到悬浮液B。
[0020]进一步，S2中的泄压速率为0.2～2Mpa/min。
[0021]基于本专利技术的包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体的制备方法，具有如下有益效果：
[0022](1)采用超临界CO2辅助法制备包载IgY的壳聚糖脂质体IgY
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LP，CO2具有无毒、
不可燃、化学稳定、无残留，形成超临界条件温和，因此可作为不稳定性活性物质IGY脂质体的包封溶剂，不会造成有机溶剂残留。
[0023](3)考虑到口服脂质体的脂质双层膜在胃肠道时可能泄漏的风险，通过添加壳聚糖涂层来加固脂质双层使IgY更多的释放在肠道环境，且壳聚糖具有pH响应，从而加强IgY在胃环境中的保护作用。
[0024](3)SCCO2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体,其特征在于,所述脂质体包含以下组份:卵磷脂、胆固醇、卵黄免疫球蛋白以及壳聚糖；其中,所述脂质体以卵磷脂和胆固醇形成的磷脂双分子层为脂质体骨架材料,所述IGY包埋于所述脂质体的内水相,所述壳聚糖包覆于所述脂质体中磷脂双分子层的内层表面和外层表面；所述卵磷脂选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺中的一种。2.如权利要求1所述的包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体,其特征在于,所述卵磷脂、胆固醇、IGY以及壳聚糖的质量比为(18～22)：(4～6)：(1～1.5)：(18～22)。3.根据权利要求1或2所述的包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体，其特征在于，所述卵磷脂为蛋黄卵磷脂。4.一种包载卵黄免疫球蛋白的壳聚糖脂质体制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将卵磷脂和胆固醇分散在pH为7～8的缓冲液中得到悬浮液A，将IgY溶解于所述悬浮液A，然后再将壳聚糖溶液分散于所述悬浮液A得到悬浮液B；所述悬浮液B中卵磷脂的浓度为5～10mg/mL，壳聚糖的含量为0.5％～1.4％；S2、将悬浮液B在温度在40～60℃下，加压至5～25MPa下，搅拌0...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡朝霞，陈晨，盛龙，黄茜，李小萌，夏民权，柳聪，董宛宜，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：