基于CRISPR/Cas9的香蕉MaACO1基因编辑载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种基于CRISPR/Cas9的香蕉MaACO1基因编辑载体及其构建方法和应用，针对香蕉基因序列，设计基因编辑靶位点及其引物，以及在构建香蕉MaACO1基因编辑载体时结合特定的扩增程序，构建得到合理的sgRNA表达框，提供了一种有效且稳定的定向突变香蕉ACO1基因的编辑方法，从而使得香蕉的ACO1表达缺失或减弱。延缓了香蕉的后熟过程，可以明显的延长香蕉的保鲜期的效果，解决了采后香蕉在常温下成熟过快、不耐贮的问题。不耐贮的问题。不耐贮的问题。

【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR/Cas9的香蕉MaACO1基因编辑载体及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，特别涉及一种基于CRISPR/Cas9的香蕉MaACO1基因编辑载体及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]基因组编辑是指利用序列特异核酸酶对基因组进行定点改造，获得预期的生物体基因组序列发生改变的技术。是近年发展起来的一种基因组定向编辑的技术，其可以进行定点的突变(插入、缺失或修饰等)，具有成本低，操作简单和突变效率高等特点。
[0003]采后损失问题是目前香蕉产业面临的几大主要问题之一，据估计香蕉采后损失可达20-30％，这很大部分是由于香蕉在常温下成熟过快、不耐贮、运货架期短引起的，且香蕉在乙烯催熟后一周迅速成熟腐烂，造成巨大的损失。在过去，一般通过表达分析、RNAi等生物学手段来研究基因的功能，RNAi的方式抑制ACO基因的表达，从而减少乙烯的合成、延缓果实的成熟，但这些方法不能完全抑制ACO基因在香蕉中的转录、抑制效率较低，且其存在转基因生物安全的问题，不能很好的解决采后香蕉在常温下成熟过快、不耐贮的问题。因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种sgRNA表达盒，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示。2.一种基于CRISPR/Cas9的香蕉MaACO1基因编辑载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.以pYLgRNA-OsU6b质粒为模板，由核苷酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的引物，扩增得到OsU6b启动子；以pYLgRNA-OsU6b质粒为模板，由核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的引物，扩增得到含核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的靶位点的gRNA片段；S2.由核苷酸序列如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示的引物，以所述OsU6b启动子和所述gRNA片段为模板，扩增得到获得sgRNA表达盒；S3.将sgRNA表达盒插入pYLCRISPR/Cas9质粒。3.根据权利要求2所述的基于CRISPR/Cas9的香蕉MaACO1基因编辑载体的构建方法，其特征在于，步骤S1中所述的扩增得到OsU6b-gRNA表达框的扩增程序为：94
±
3℃10
±
1s，58
±
2℃15
±
1s，68
±
2℃20
±
1s，20-30循环；及/或步骤S2中所述的扩增得到获得sgRNA表达盒的扩增程序为：95
±
3℃10
±
1s，58
±
2℃15
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【专利技术属性】
技术研发人员：毕方铖，胡春华，杨乔松，窦同心，盛鸥，邓贵明，董涛，易干军，
申请(专利权)人：广东省农业科学院果树研究所，
类型：发明
国别省市：