一种抑制Notch和NF-κB信号激活的嵌合诱骗寡核苷酸及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种抑制Notch和NF

【技术实现步骤摘要】
一种抑制Notch和NF
‑
κ
B信号激活的嵌合诱骗寡核苷酸及其应用


[0001]本专利技术涉及诱骗寡核苷酸及其应用，尤其是一种抑制Notch和NF
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κB信号激活的嵌合诱骗寡核苷酸及其应用，具体是转录因子免疫球蛋白Kappa J区重组信号结合蛋白(以下简称RBPJ)和B细胞Kappa轻链基因增强子结合核因子(以下简称NF
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κB)嵌合诱骗寡核苷酸及其在抑制Notch和NF
‑
κB信号激活中的应用，属于医药


技术介绍

[0002]Notch信号途径是进化上高度保守的信号途径，介导相邻细胞间直接的信号转导，广泛参与细胞命运决定、细胞增殖、分化和凋亡等，在血管生成、肿瘤发生发展等方面发挥重要作用。Notch信号途径由配体、受体、下游信号转导分子和核内应答过程组成。目前在哺乳动物中共发现了5种Notch配体(Jagged1、Jagged2、Delta
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like 1、Delta
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like 3和Delta
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like4)、4种Notch受体(Notch1
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4)。当相邻细胞间配体与受体结合后，通过γ分泌酶复合物酶切，释放胞内段NICD(Notch的活性形式)，它能进入细胞核，与转录因子RBPJ结合，使RBPJ由转录抑制状态变成活化状态，募集共激活因子Mastermind
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like等，结合特异的DNA序列(C/TGTGGGAA)，激活下游Hes1等基因的表达。RBPJ是Notch四种受体的共同下游转录因子，RBPJ的阻断或抑制能有效阻断经典的Notch信号(Artavanis
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Tsakonas S等,Science,1999,284:770
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6；Borggrefe T等,Cell Mol Life Sci,2009,66:1631
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46；High FA等,Nat Rev Genet,2008,9:49
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61)。
[0003]NF
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κB信号广泛参与调控免疫和炎症反应、细胞存活、增殖、分化和凋亡等，在多种疾病中NF
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κB信号持续激活，如肿瘤、关节炎、哮喘、神经退行性疾病和心脏病等。目前哺乳动物中NF
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κB家族成员主要包括RelA(p65)，RelB，c
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Rel，NF
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κB1(p50/p105)和NF
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κB2(p52/p100)，它们的N末端都存在一个高度保守的Rel同源结构域，两种相同或不同的NF
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κB成员组成同二聚体或异二聚体，其中p65与p50形成的异二聚体最为常见。静息状态时NF
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κB与其抑制蛋白IκB结合，以无活性的形式位于胞浆中，而当细胞受到刺激后IκB被其激酶(IKK)磷酸化，并快速发生泛素化
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降解，NF
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κB与IκB解离并暴露核定位信号，进入细胞核与染色体DNA上的特异序列GGGRNWYYCC(R:A/G,W:A/T,Y:C/T)结合，激活下游多种靶基因的表达，如Bcl2，Bcl
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Xl，c
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Myc，IL8，VEGF等(Zhang Q等,Cell,2017,168:37
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57；Hayden MS等,Cell,2008,132:344
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62)。
[0004]Notch信号与NF
‑
κB信号存在交互作用，在多种肿瘤中两者常同时激活，如急性T淋巴细胞白血病(T
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ALL)、乳腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、结肠癌、胰腺癌等，在肿瘤的发生、发展过程中发挥重要作用(DiDonato JA等,Immunol Rev,2012,2461:379
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400；Ntziachristos P等,Cancer Cell,2014,25:318
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34)。以急性T淋巴细胞白血病为例，Weng AP等发现50％以上的人T
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ALL都有Notch1激活型突变(Science,2004,306:269
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71)，而近来研究表明许多T
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ALL样本中NF
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κB信号亦存在异常活化，其机制可能是异常激活的Notch信号通过促进IKK的表达而激活NF
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κB信号，而且NF
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κB信号抑制剂bortezomib能显著抑制T
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ALL细胞的生长
(Vilimas T等,Nat Med,2007,13:70
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7)。Espinosa L等亦发现T
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ALL中Notch信号能通过Hes1抑制NF
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κB信号的负调节因子Cyld的表达，从而导致T
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ALL中NF
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κB信号的激活(Cancer Cell，2010，18:268
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81)。Xiu等发现Notch信号和NF
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κB信号共同激活能促进B细胞发生恶性转化(Blood,2020,135:108
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120)。
[0005]转录因子诱骗(Transcription Factor Decoy,TFD)策略是近年发展起来的一种阻断基因转录的有效方法，其原理是体外合成寡核苷酸，其序列与转录因子特异识别位点一致，将其导入细胞后能够竞争性抑制特定转录因子与基因组DNA序列上的顺式元件结合，从而阻止靶基因的转录。转录因子诱骗技术有以下突出特点：
①
序列短，易合成，易导入细胞；
②
特异性高，容易识别靶蛋白；
③
属于DNA序列，与小干扰RNA(SiRNA)相比更稳定；
④
在转录前和转录水平发挥抑制作用，作用效果强大(Hecker M等,Biochem Pharmacol,2017,144:29
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34)。目前针对核转录因子如E2F、AP1、NF
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κB等合成的双链诱骗寡核苷酸已被用作基因功能研究的工具，并有大量临床前和临床研究，因此转录因子诱骗策略具有良好的应用前景。目前未见有同时针对RBPJ和NF
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κB的嵌合诱骗寡核苷酸的报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目之一是提供一种抑制Notch和NF
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κB信号激活的嵌合诱骗寡核苷酸，它是一种同时针对转录因子RBPJ和NF
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κB的诱骗寡核苷酸，此嵌合诱骗寡核苷酸能竞争结合Notch信号的关键转录因子RBPJ，有效抑制Notch信号的激活，同时还能竞争结合p65/NF
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κB，抑制NF
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κB信号的激活。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制Notch和NF
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κB信号激活的嵌合诱骗寡核苷酸，其特征是：它是由2个RBPJ特异性识别位点和1个κB特异性识别位点组成的单链，退火后形成发卡样双链结构，其RBPJ/NF
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κB嵌合诱骗寡核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。2.根据权利要求1所述的一种抑制Notch和NF
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κB信号激活的嵌合诱骗寡核苷酸，其特征是：所述序列5
’
和3
’
端3个核苷酸进行硫代修饰。3.根据权利要求1或2所述的一种抑制Notch和NF<...

【专利技术属性】
技术研发人员：何飞，李维娜，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：