MMI-0100短肽化合物在制备胆汁淤积性肝病治疗药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了MMI

【技术实现步骤摘要】
MMI
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0100短肽化合物在制备胆汁淤积性肝病治疗药物中的应用


[0001]本专利技术涉及MMI
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0100短肽化合物在制备胆汁淤积性肝病治疗药物中的应用，属于MMI
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0100短肽化合物作为药物的新用途


技术介绍

[0002]胆汁淤积是指胆汁形成和(或)流动障碍，导致胆汁流动紊乱，是肝脏疾病的常见并发症之一。引起胆汁流动紊乱的因素有多种，任何能引起肝胆管细胞损害及胆道系统梗阻的因素均可导致胆汁淤积发生，常见的因素主要有寄生虫、病毒、细菌感染，自身免疫、药物或毒物、酒精、结石和遗传代谢等，临床上常见的胆汁淤积性疾病主要有原发性胆汁性胆管炎(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)以及各型病毒性肝炎所致的胆汁淤积。在大多数情况下，胆汁淤积是良性病变，发病率或病死率不高，但是长期的胆汁淤积最终可导致肝硬化甚至肝衰竭，且患者预后较差。目前，仅有奥贝胆酸(obeticholic acid，OCA)和熊去氧胆酸(UDCA)两种药物经美国FDA批准并用于临床治疗胆汁淤积性肝病。然而，奥贝胆酸具有一定的肝毒性，UDCA仅对部分病人有治疗效果。因此，寻找并研发胆汁淤积性肝病的有效药物一直是近年来的研究热点。

技术实现思路

[0003]为了克服现有技术的不足，本专利技术提供了MMI
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0100短肽化合物在制备胆汁淤积性肝病治疗药物中的应用；通过采用3，5
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二乙氧基羰基
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1，4
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二氢
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2，4，6
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三甲基吡啶(DDC)诱导的PSC小鼠模型，观察MMI
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0100对胆汁淤积性肝损伤的治疗作用，以期为胆汁淤积性肝病新的药物治疗手段提供实验依据。
[0004]本专利技术是通过如下技术方案实现的，MMI
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0100短肽化合物在制备胆汁淤积性肝病治疗药物中的应用。
[0005]作为本专利技术所述的MMI
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0100短肽化合物在制备胆汁淤积性肝病治疗药物中的应用的优选方案：所述MMI
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0100短肽化合物的氨基酸序列为：YARAAARQARAKALARQLGVAA。
[0006]实验方案如下：
[0007]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：
[0008]①
MMI
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0100短肽化合物(YARAAARQARAKALARQLGVAA)由吉尔生化(上海)有限公司合成。
[0009]②
药物干预：建立DDC辐照饲料喂养诱导的肝脏胆汁淤积模型。在DDC饲养1w后，每天经腹腔注射MMI
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0100进行治疗，每只小鼠的药物注射量为500ug/Kg，连续注射1w。
[0010]③
HE和Masson染色检测肝脏病理。
[0011]④
CK19和Ki67免疫组化检测肝脏胆管增生。
[0012]⑤
实时荧光定量PCR(qRT
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PCR)检测肝组织中肝纤维环相关基因表达。
[0013]本专利技术有益技术效果：
[0014]DDC饮食诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤中，胆管显著增生，胆管周围大量炎症细胞浸润，肝纤维化明显。通过MMI
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0100药物治疗后，小鼠肝脏的纤维化病变减轻，炎症细胞的浸润减少，同时胆管增生程度也有所缓解，肝脏纤维化基因α
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SMA的mRNA表达水平降低，以上结果均表明MMI
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0100对胆汁淤积性肝损伤有良好的治疗效果。
附图说明
[0015]图1是各组小鼠肝脏肉眼观察比较；
[0016]图2是各组小鼠肝脏组织病理学结果(HE染色)，注：与模型组相比*P＜0.05；
[0017]图3是各组小鼠肝脏组织Masson染色结果和肝脏α
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SMA mRNA表达情况，注：与模型组相比*P＜0.05，与对照组比
#
P＜0.05；
[0018]图4是各组小鼠肝脏组织CK19表达免疫组化检测，注：与模型组相比*P＜0.05；
[0019]图5是各组小鼠肝脏组织Ki67表达免疫组化检测，注：与模型组相比*P＜0.05。
具体实施例
[0020]下面结合实施例对本专利技术做进一步说明。
[0021]实施例1
[0022]一、肝脏组织病理学变化
[0023]1、操作
[0024]将15只Balb/c小鼠随机分为对照组、模型组(DDC)、治疗组(DDC+MMI
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0100)，每组5只。除了对照组，模型组和治疗组的两组小鼠给予0.1％DDC辐照饲料喂养建立胆汁淤积性模型，治疗组小鼠在DDC饲养1w后，每天经腹腔注射MMI
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0100进行治疗，每只小鼠的药物注射量为500ug/Kg，连续注射1w，同时给与正常饮食。药物注射最后一天，药颈椎脱臼法处死小鼠收集肝脏。
[0025]肝脏病理学检测：低温下分离小鼠完整肝脏，肉眼观察小鼠肝脏病变，取约5mm
×
5mm
×
2mm大小组织，置10％多聚甲醛固定24h，酒精梯度脱水，石蜡包埋，4μm厚度连续切片，HE染色、Masson染色后在显微镜下观察肝脏病理学改变，肝脏组织炎症活动度采用Knodell Score组织学活动指数评分，肝脏纤维化程度采用Image
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Pro Plus进行半定量分析。
[0026]免疫组织化学染色：CK19和Ki67
[0027]肝组织切片经脱蜡，用PBS洗3次，每次5min；将切片放入0.01mmol/L柠檬酸盐缓冲液中进行抗原热修复15min后，PBS洗3次，每次5min；滴加H2O2室温孵育10min后，PBS洗3次，每次5min；滴加兔抗CK19多克隆抗体(1：200)，兔抗Ki67多克隆抗体(1：200)，放入湿盒4℃孵育过夜；PBS洗3次，每次10min后，使用DAB显色试剂盒(北京中杉金桥公司，货号：PV
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9001)进行显色，具体步骤为：滴加试剂1，37℃孵育10min，PBS洗3次，每次10min；滴加试剂2(辣根酶标记抗兔IgG多聚体)，37℃孵育30min，PBS洗3次，每次10min；加DAB显色，苏木素复染，用自来水返蓝，经梯度酒精脱水、透明后封片，镜下观察，并采用Image
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Pro Plus进行半定量分析。
[0028]实时荧光定量PCR(qRT
‑
PCR)检测肝组织中mRNA表达水平
[0029]用TRIzol法提取各组肝组织总RNA，逆转录成cDNA后进行PCR扩增反应。引物序列，GAPDH：ACTCCACTCACGGCAAATTC(上游)，TCTCCATGGTGGTGAAGACA(下游)；α
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...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.MMI
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0100短肽化合物在制备胆汁淤积性肝病治疗药物中的应用。2.根据权利要求1所述的MMI
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0100短肽化合物在制...

【专利技术属性】
技术研发人员：张蓓蓓，张波，颜超，郑葵阳，李静，徐娜，刘继鑫，谈仁秀，黄芝月，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：