一种通过胚拯救获得重瓣萱草杂交后代的方法技术

本发明专利技术提供一种通过受精幼胚获得重重瓣萱草杂种后代的方法属于植物组织培养技术的植物再生技术领域，其方法是通过取人工去雄授粉9d的胚珠采用离体培养的方式进行胚拯救，具体步骤为：（1）授粉，（2）取胚珠，（3）诱导培养，（4）继代培养，（5）生根培养，（6）移栽；本发明专利技术弥补了重瓣萱草杂交结实率低下的问题，避免了外界环境的不确定性对成活率的影响，同时也缩短了育种周期，可运用于重瓣萱草杂交育种工作。可运用于重瓣萱草杂交育种工作。

【技术实现步骤摘要】
一种通过胚拯救获得重瓣萱草杂交后代的方法


[0001]本专利技术涉及通过植物组织培养技术的植物再生，涉及一种利用幼胚拯救获得重瓣萱草杂种后代的方法。

技术介绍

[0002]萱草是阿福花科萱草属多年生草本植物，目前萱草的育种中心在美国，国内对萱草品种选育起步较晚。美国萱草协会登录的萱草品种达8万多种，其中国内在萱草协会登录的萱草品种不超过50个，这很大程度上是萱草杂种后代结实率低所导致的。重瓣萱草作为野生萱草的变种，其雄蕊瓣化成花瓣状，有比单瓣萱草更高的观赏价值，但是，重瓣萱草的花粉活力地下导致其结实率远远不如其单瓣品种，为缓解这一问题，本专利技术基于杂交后胚拯救的理论基础不断试验，以期获得较多可育杂种后代。杂种后胚拯救是克服幼胚败育的有效方法，在植物育种工作中发 挥着极为重要的作用，在许多物种中都获得广泛应用，因此，本专利技术提供了一种利用幼胚拯救获得重瓣萱草杂种后代的方法。

技术实现思路

[0003]为克服上述问题，本专利技术提供了一种通过受精幼胚获得重重瓣萱草杂种后代的方法，该专利技术弥补了重瓣萱草杂交结实率低下的不足，避免了外界环境的不确定性对成活率的巨大影响，同时也缩短了育种周期，可运用于重瓣萱草杂交育种工作。
[0004]本专利技术通过下列技术方案实现：一种通过胚拯救获得重瓣萱草杂交后代的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）授粉：选择发育良好的重瓣萱草品种作为亲本材料，于8：00
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8:30去雄、授粉，挂牌；（2）取胚珠：摘取授粉9d的果实，放入容器中，之后在容器中加入洗洁精，在流水下冲洗30 min，冲洗完成后，在超净工作台上，再用75%的酒精中冲洗30s，最后再用0.1%升汞溶液浸泡10min、无菌水冲洗3次，然后去除果皮，剥离子房壁，取得胚珠；（3）诱导愈伤：将胚珠接种到pH为5.8的MS+9%蔗糖+0.2mg/L6
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BA+0.02mg/LNAA+0.1%山农一号Ⅱ型的培养基中，之后放入培养箱中诱导愈伤；（4）不定芽培养：30
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40d后转入pH为5.8的MS+3%蔗糖+2.0mg/L6
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BA+0.1mg/LNAA+0.1%山农一号Ⅱ型的培养基上，之后放入培养箱中诱导不定芽；（5）生根诱导：30d后选取长势良好、5cm左右的不定芽转入生根培养基1/2MS+0.2mg/L IBA +0.1mg/L NAA+0.1%山农一号Ⅱ型上，放入培养箱中诱导生根；（6）移栽：将根系发育良好的无菌在室内环境中炼苗5d，取出无菌苗洗净附着物，移栽到泥炭与珍珠岩比为7：3的穴盘中，盖上遮阳网，置于温度在25
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28℃之间，湿度80%左右的温室环境中培养8d，后逐渐打开遮阳网，进行常规管理。
[0005]作为本方案的进一步优化,所述步骤 （1）中所选亲本为同一花期的重瓣萱草品种。
[0006]作为本方案的进一步优化,所述步骤（3）、步骤（4）和步骤（5）中的培养基均为5g/L琼脂。
[0007]作为本方案的进一步优化,所述步骤（3）、步骤（4）和步骤（5）中培养箱的中的培养条件为：温度为25℃，光周期12h/d，光照强度1500—2500 Lx。
[0008]作为本方案的进一步优化,所述步骤（3）在MS+9%蔗糖+0.2mg/L6
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BA+0.02mg/LNAA+0.1%山农一号Ⅱ型的培养基中培养，其中0.1%山农一号Ⅱ型可以有效抑制内生菌污染。
[0009]在本专利技术中，通过流水对容器中果实进行冲洗，容器中加入洗洁精，能有效抑制外生菌污染。
[0010]本专利技术经过以下多项对比试验，优选总结出上述最佳的技术参数 ：不同发育阶段胚的选择：分别选择授粉后6、9、12、15、18、21d的不同发育时期的胚，摘取授粉9d的胚，在容器中加入洗洁精，在流水下冲洗30 min，在超净工作台上，在75%的酒精中冲洗30s，再用0.1%升汞溶液浸泡10min，无菌水冲洗3次，最后去除果皮，剥离子房壁，取得胚珠；将胚珠接种到MS+9%蔗糖+0.2mg/L6
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BA+0.02mg/LNAA+0.1%山农一号Ⅱ型的培养基中，培养基PH5.8
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6.0，在25℃，光周期12h/d，光照强度1500—2500 Lx的培养箱中诱导愈伤；15、18d的胚可成功诱导出芽，实际杂交过程中，种子败育常发生在授粉后10d左右，取授粉后15、18d进行胚拯救没有实际意义。
[0011]诱导培养基的选择试验：取受精9d的杂交重瓣萱草胚珠，基础培养基选择MS培养基，添加6
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BA、NAA两种激素，6
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BA设置0.1mg/L、0.2mg/L、0.3 mg/L、0.4mg/L四个水平，NAA设置0.01 mg/L、0.02 mg/L、0.03 mg/L、0.04 mg/L四个水平，结果显示0.2mg/L6
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BA+0.02mg/LNAA为最适宜浓度。
[0012]不定芽诱导培养基的选择试验：以成功诱导愈伤的无菌苗为材料，基础培养基选择MS培养基，添加6
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BA、NAA两种激素，6
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BA设置1.0mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L四个水平，NAA设置0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.4 mg/L四个水平，结果显示2.0mg/L6
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BA+0. 1mg/LNAA为最适宜浓度。
[0013]由上述本专利技术提供的技术方案可看出，本专利技术提供了一种通过受精幼胚获得重重瓣萱草杂种后代的方法，该专利技术弥补了萱草杂种胚结实低下的不足，避免了外界环境的不确定性对成活率的巨大影响，同时也缩短了育种周期，可运用于重瓣萱草杂交育种工作。
[0014]具体实施方法本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
[0015]本说明书（包括任何附加权利要求、摘要）中公开的任一特征，除非特别叙述，均可被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即，除非特别叙述，每个特征只是一系列等效或类似特征中的一个例子而已。
实施例
[0016]一种通过胚拯救获得重瓣萱草杂交后代的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）授粉：选择发育良好的重瓣萱草品种作为亲本材料，于8：00
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8:30去雄、授粉，挂牌；（2）取胚珠：摘取授粉9d的果实，放入容器中，之后在容器中加入洗洁精，在流水下
冲洗30 min，冲洗完成后，在超净工作台上，再用75%的酒精中冲洗30s，最后再用0.1%升汞溶液浸泡10min、无菌水冲洗3次，然后去除果皮，剥离子房壁，取得胚珠；（3）诱导愈伤：将胚珠接种到pH为5.8的MS+9%蔗糖+0.2mg/L6
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BA+0.02mg/LNAA+0.1%山农一号Ⅱ型的培养基中，之后放入培养箱中诱导愈伤；（4）不定芽培养：30
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过胚拯救获得重瓣萱草杂交后代的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）授粉：选择发育良好的重瓣萱草品种作为亲本材料，于8：00
‑
8:30去雄、授粉，挂牌；（2）取胚珠：摘取授粉9d的果实，放入容器中，之后在容器中加入洗洁精，在流水下冲洗30 min，冲洗完成后，在超净工作台上，再用75%的酒精中冲洗30s，最后再用0.1%升汞溶液浸泡10min、无菌水冲洗3次，然后去除果皮，剥离子房壁，取得胚珠；（3）诱导愈伤：将胚珠接种到pH为5.8的MS+9%蔗糖+0.2mg/L6
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BA+0.02mg/LNAA+0.1%山农一号Ⅱ型的培养基中，之后放入培养箱中诱导愈伤；（4）不定芽培养：30
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40d后转入pH为5.8的MS+3%蔗糖+2.0mg/L6
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BA+0.1mg/LNAA+0.1%山农一号Ⅱ型的培养基上，之后放入培养箱中诱导不定芽；（5）生根诱导：30d后选取长势良好、5cm左右的不定芽转入生根培养基1/2MS+0.2mg/L IBA +0.1mg/L NAA+0.1%山农一号Ⅱ型上，放入培养箱中诱导生根...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈芬，马丽，刘博，蔡卫佳，王昊，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院宿迁农科所，
类型：发明
国别省市：