一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法技术

本发明专利技术提供一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法，属于医疗检测技术领域。所述方法包括以下步骤：S1、取尿液样品涡旋混匀，加入50ng同位素内标，加入β

【技术实现步骤摘要】
一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法


[0001]本专利技术涉及医疗检测
，具体涉及一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法。

技术介绍

[0002]邻苯二甲酸酯(PAEs)是环境中普遍存在的污染物，常被用于生产日常生活用品，主要用作增塑剂。日常生活中的玩具、食品包装、乙烯地板、润滑剂、粘合剂、洗涤剂、化妆品、药物涂层和医疗器械等都含有一种或多种PAEs。PAEs可通过呼吸道、饮食摄入和皮肤吸收等途径进入人体。已有研究指出PAEs具有致癌性、生殖发育毒性和内分泌干扰作用。PAEs在人体内的半衰期较短，低于48h，经肝脏等器官代谢解毒，形成邻苯二甲酯代谢物(mPAEs)从尿液和粪便等途径排出体外。因此，可以通过检测人体尿液中的mPAEs的含量来评估人体PAEs的暴露水平和负荷。
[0003]目前，已有很多文献报道了不同的方法应用于尿液中mPAEs的分析，这些方法大多需要对尿液进行一定的前处理，比如最常见的利用离线固相萃取技术对尿液中mPAEs进行富集和净化，方法流程繁琐，溶剂用量大，费时低效，且不利于开展大规模的人体样品筛查。中国专利CN 112782295 A报道了一种在线测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法，通过在线固相萃取技术对mPAEs进行富集和净化，再通过液相色谱分离，三级四重杆质谱检测，该法耗时较长，对仪器要求高。中国专利CN 111505144 A报道了一种简易监测人体尿样中多种增塑剂的分析方法，该法利用液液萃取技术对mPAEs进行富集和净化，再通过HPLC
‑r/>MS/MS进行检测分析，还是存在前处理耗时长，对仪器要求高的缺陷。

技术实现思路

[0004]因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中的缺陷，从而提供一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法，用于大规模尿液样品的快速检测。
[0005]本专利技术提供的一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法，包括以下步骤：
[0006]S1、取尿液样品涡旋混匀，加入50ng同位素内标，加入β
‑
葡萄糖醛酸酶、乙酸铵，充分振荡，于37℃水浴条件下水解100min，取出降至室温，乙腈定容，冷冻2h，取出恢复常温后，过0.22μm有机滤膜，得样品溶液；
[0007]S2、采用液相色谱
‑
串联质谱对样品溶液进行测试，
[0008]其中，液相色谱条件为：
[0009]色谱柱为Waters苯基柱，流速0.3mL/min，进样量为5μL，柱温流动相A为0.1％乙酸水溶液，流动相B为乙腈溶液，梯度洗脱程序为：0
‑
4min时，流动相B体积分数为5％；4
‑
6min时，流动相B体积分数为60％；6
‑
8.5min时，流动相B体积分数为90％；8.5
‑
10min时，流动相B体积分数为5％；
[0010]其中，质谱条件为：
[0011]离子化方式：ESI；电离方式：负电离模式；碰撞气类型：氩气；雾化气流量：3L/min；加热气流量：10L/min；干燥气流量：10L/min；接口温度：300℃；脱溶剂温度：526℃；DL温度：250℃；加热块温度：400℃；扫描模式：MRM；
[0012]S3、对照标准曲线进行对邻苯二甲酸酯代谢物进行定性或者定量分析。
[0013]优选地，步骤S1中，所述乙酸铵的浓度为1mol/L，所述尿液样品与乙酸铵的体积比为4:0.5
‑
1.5。
[0014]优选地，步骤S1中，冷冻的温度为
‑
25℃。
[0015]优选地，步骤S1中，所述尿液样品与乙腈的体积比为2:2.5
‑
3.5。
[0016]优选地，步骤S1中，所述β
‑
葡萄糖醛酸酶在尿液样品的浓度≥850U/mL。
[0017]优选地，步骤S2中，所述同位素内标包括：
13
C2‑
MMP、
13
C2‑
MEP、
13
C2‑
MCHP、
13
C2‑
MBZP、D4‑
MIBP、
13
C4‑
MEOHP、
13
C4‑
MEHHP、
13
C2‑
MEHP、
13
C2‑
MOP、
13
C2‑
MNP、D4‑
MDP和
13
C2‑
MNBP中的任意一种或多种的混合。
[0018]优选地，步骤S3中，与所述同位素内标对应的邻苯二甲酸酯代谢物包括：MMP、MEP、MCHP、MBZP、MIBP、MEOHP、MEHHP、MEHP、MOP、MNP、MDP和MNBP中的任意一种或多种的混合。
[0019]本专利技术技术方案，具有如下优点：
[0020]本专利技术提供的方法，通过液质联用，能快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物的含量，可用于定性和定量分析。检测时间短，只需15
‑
20min即可检测出代谢物含量；检测限范围为0.05
‑
1.88μg/L；在5～100μg/L的加标范围内，回收率在80％～125％，精密度小于10％。
具体实施方式
[0021]实施例1
[0022]1.样品的保存
[0023]可在
‑
20℃下保存2个月，在
‑
70℃以下可保存1年。
[0024]2.标准配制
[0025]2.1标准储备液：准确称取各标准品0.0010g，分别用甲醇定容至10.0mL，配制成100mg/L标准储备液，4℃保存。或直接使用符合要求的标准溶液或混合标准溶液。
[0026]2.2混合标准工作液：分别取MMP、MEP、MCHP、MBZP、MEOHP、MEHHP、MEHP、MOP、MNP、MDP标准储备液1.0mL，MiBP标准储备液2.0mL，MNBP标准储备液3.0mL，配制成12种PAEs代谢物混合标准储备液，于4℃保存待用。
[0027]2.3同位素内标储备液：称取各同位素内标0.0010g，分别用甲醇定容至10.0mL，配制成100mg/L内标储备液。
[0028]2.4混合内标工作液：分别取MMP、MEP、MCHP、MBZP、MIBP、MEOHP、MEHHP、MEHP、MOP、MNP、MDP和MNBP内标储备液各1mL，用甲醇定容至25.0mL，配制成0.5mg/L的12种PAEs代谢物内标使用液，于4℃保存待用。
[0029]2.5标准工作曲线配制：取2mL人工尿液到5mL离心管。依次加入200ng、100ng、50ng、20ng、10ng、5ng和1ng PAEs混合标准以及50ng混合内标。之后，向各离心管中加入不低于850U/mL的β
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取尿液样品涡旋混匀，加入50ng同位素内标，加入β
‑
葡萄糖醛酸酶、乙酸铵，充分振荡，于37℃水浴条件下水解100min，取出降至室温，乙腈定容，冷冻2h，取出恢复常温后，过0.22μm有机滤膜，得样品溶液；S2、采用液相色谱
‑
串联质谱对样品溶液进行测试，其中，液相色谱条件为：色谱柱为Waters苯基柱，流速0.3mL/min，进样量为5μL，柱温流动相A为0.1％乙酸水溶液，流动相B为乙腈溶液，梯度洗脱程序为：0
‑
4min时，流动相B体积分数为5％；4
‑
6min时，流动相B体积分数为60％；6
‑
8.5min时，流动相B体积分数为90％；8.5
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10min时，流动相B体积分数为5％；其中，质谱条件为：离子化方式：ESI；电离方式：负电离模式；碰撞气类型：氩气；雾化气流量：3L/min；加热气流量：10L/min；干燥气流量：10L/min；接口温度：300℃；脱溶剂温度：526℃；DL温度：250℃；加热块温度：400℃；扫描模式：MRM；S3、对照标准曲线进行对邻苯二甲酸酯代谢物进行定性或者定量分析。2.根据权利要求1所述的一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法，其特征在于，步骤S1中，所述乙酸铵的浓度为1mol/L，所述乙酸铵与尿液样品的体积比为4:0.5
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1.5。3.根据权利要求1所述的一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法，其特征在于，步骤S1中，冷冻的温度...

【专利技术属性】
技术研发人员：石飞云，靳艺，徐梦媛，黎俊宏，唐宏兵，欧阳运富，
申请(专利权)人：常州市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：