基于牛纳米孔测序技术的原核生物核糖核酸直接测序方法技术

本发明专利技术公开了基于牛纳米孔测序技术的原核生物核糖核酸直接测序方法，包括如下步骤：步骤一：原核生物RNA的3

【技术实现步骤摘要】
基于牛纳米孔测序技术的原核生物核糖核酸直接测序方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体是指基于牛纳米孔测序技术的原核生物核糖核酸直接测序方法。

技术介绍

[0002]对生物样本中的核糖核酸(RNA)进行测序可以获得丰富的信息，包括细菌和病毒的身份、选择性剪接的细微差别或生物体的转录状态。随着核糖核酸(RNA)的重要性逐渐被人所认识，研究人员也开发出多种方法来研究它。然而，目前大多数的“核糖核酸(RNA)测序”技术只能产生相对较短的读取长度，并且多数方法仍需将核糖核酸(RNA)反转录成互补脱氧核糖核酸(cDNA)，而这一步不仅会引入错误及偏好，且效率不高，还会阻止核糖核酸(RNA)本身结构复杂性的有效表征。
[0003]基于二代高通量测序和美国太平洋生物三代测序平台的核糖核酸(RNA)测序技术，均是通过将信使核糖核酸(mRNA)反转录成互补脱氧核糖核酸(cDNA)并扩增后完成测序，因此存在必然的序列偏好，且无法实现信使核糖核酸(mRNA)复杂性的直接鉴定。牛津纳米孔技术因其独特的测序原理，能够直接测序天然全长核糖核酸(RNA)分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于牛纳米孔测序技术的原核生物核糖核酸直接测序方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤一：原核生物RNA的3
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端添加聚腺苷酸(polyA)序列使用大肠杆菌聚腺苷酸聚合酶(NEB，M0276)，按大肠杆菌聚腺苷酸聚合酶反应体系组分表配置反应体系，在原核生物大肠杆菌DH10B中所获得的总RNA的3
′
端添加聚腺苷酸(polyA)序列，配置完成的反应体系37℃孵育30分钟，反应完成后直接加入终浓度为10mM的乙二胺四乙酸钠(EDTA
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Na)溶液中止反应，完成终止反应的体系中加入RNA纯化磁珠(诺唯赞，N412
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01)24μl进行纯化；步骤二：RNA直接测序文库构建步骤一种得到的3
′
端添加聚腺苷酸(polyA)序列的RNA样本，使用牛津纳米孔公司商业化RNA直接测序试...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈小波，吴双菊，
申请(专利权)人：普瑞基准生物医药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：