STIRF3/IRF7KO细胞系及其构建方法和应用技术

本发明专利技术属于分子生物学领域，涉及ST IRF3/IRF7KO细胞系及其构建方法和应用，本发明专利技术针对猪源IRF3、IRF7基因序列的外显子设计特异性sgRNA，插入载体lentiCRISPR v2上，得到慢病毒载体lentiCRISPR v2

【技术实现步骤摘要】
ST IRF3/IRF7 KO细胞系及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，涉及ST IRF3/IRF7 KO细胞系及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]CRISPR/Cas9系统是古细菌和细菌在长期发展过程中形成的适应性免疫防御系统，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR/Cas9基因编辑技术是一种高效的核酸切割工具。近年来，该技术因其操作性强、效率高、适用范围广等优点，已经成为定点编辑的重要手段，广泛应用于猪、家兔、鼠等的基因定点修饰中。目前，以CRISPR/Cas9为基础的基因编辑技术在一系列疾病的基因治疗的应用领域都展现出极大的应用前景。
[0003]干扰素调节因子家族(Interferon regulatory factors，IRFs)参与机体细胞凋亡、肿瘤发生、宿主防御、病毒潜伏和免疫反应等多种生物学功能的调节。其中IRF3和IRF7在I型IFN介导的先天免疫中起着关键作用。IRF3在多种类型的细胞中表达，负责诱导早期IFN
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β的转录。 IRF7主要存在于B细胞、浆细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株ST IRF3/IRF7 KO细胞系，其特征在于，分类命名为猪睾丸上皮细胞系ST IRF3/IRF7 KO，保藏编号为CCTCC NO:C2021178。2.根据权利要求1所述的ST IRF3/IRF7 KO细胞系的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：采用IRF3、IRF7基因序列的外显子设计对应的sgRNA，随后在得到的sgRNA两端分别加上BsmbI酶切位点；退火扩增出目的sgRNA后，分别插入至载体lentiCRISPR v2上，并转化至感受态细胞Top10中，分离单菌落，提取质粒；得到慢病毒表达载体lentiCRISPR v2
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IRF3和lentiCRISPR v2
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IRF7；慢病毒表达载体共同转染HEK293T细胞；将慢病毒加入靶细胞中，接毒后，添加嘌呤霉素或潮霉素B，筛选得到目的细胞系ST IRF3/IRF7 KO。3.根据权利要求2所述的ST IRF3/IRF7 KO细胞系的构建方法，其特征在于，采用下列sgRNA引物：4.根据权利要求2所述的ST IRF3/IRF7 KO细胞系的构建方法，所述慢病毒表达载体的检测引物序列为：U6F:5'
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TACGATACAAGGCTTAGA
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3'；U6R:5'
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ACA...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟春晓，王婧，吴慧光，陈振海，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：