用于检测样本中的核酸的数位聚合酶连锁反应方法技术

本发明专利技术涉及一种检测样本中核酸(NA)分子的方法。更具体而言，本发明专利技术涉及一种用于检测特定核酸序列的改良的基于数位PCR的方法。本发明专利技术可用于研究及诊断应用，具提高的灵敏度及准确性。本发明专利技术还提供一种试剂盒，用于执行本文所述的评估样本中核酸的方法。文所述的评估样本中核酸的方法。文所述的评估样本中核酸的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测样本中的核酸的数位聚合酶连锁反应方法
[0001]相关申请
[0002]本申请根据美国专利法第119条(35 U.S.C.
§
119)主张于2018年10月9日提出申请的美国临时申请第62/743,149号的权益，其全部内容通过引用合并于本文。


[0003]本专利技术涉及一种检测样本中核酸(nucleic acid，NA)分子的方法。更具体而言，本专利技术涉及一种用于分析核酸片段的改良的基于数位PCR的方法。本专利技术可用于研究及诊断应用，具提高的灵敏度及准确性。本专利技术还提供一种试剂盒，用于执行本文所述的检测样本中核酸的方法。

技术介绍

[0004]已经针对许多研究及诊断应用开发了用于核酸检测的各种技术。数位聚合酶连锁反应(digital polymerase chain reaction，dPCR)被认为是分析基因复制数变异(copy number variations，CNVs)、基因表现、遗传突变及单核苷酸多型性(single
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nucleotide polymorphism本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分析样本中核酸的方法，该样本包含一或多个线性、双链核酸片段(NA片段)，该方法包括以下步骤：(a)使该样本进行3'
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A尾加工反应，允许在该NA片段的3'
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尾添加腺嘌呤核苷酸(A)以产生3'
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腺嘌呤核苷酸(3'
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A)突出端核酸片段(3'
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A突出的NA片段)；(b)提供3'
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胸腺嘧啶(T)或3'
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尿嘧啶(U)核苷酸突出的双链均质衔接子，其包含带有5'
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磷酸的P寡核苷酸链以连接至该3'
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A突出的NA片段以及带有3'
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T或3'
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U而不带有5'
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磷酸的T/U寡核苷酸链，其中该T/U寡核苷酸链与该P寡核苷酸链互补，除了在该T/U寡核苷酸链的3'
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T或3'
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U之外；(c)使(a)的样本进行连接反应，以使该均质衔接子在两端与该3'
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A突出的NA片段连接，以产生衔接子连接的核酸片段(衔接子连接的NA片段)；(d)将(c)的样本与聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction，PCR)试剂以及检测试剂组合以提供准备好扩增/检测的样本，其中该PCR试剂包括用于扩增的具有该T/U寡核苷酸链的核酸序列的单一型引子，且该检测试剂包括产生荧光信号并与该NA片段特异性杂交的一或多种荧光探针；(e)将(d)的该准备好扩增/检测的样本分成复数个分区，每个分区包含该衔接子连接的NA片段的有限个复制；(f)以该衔接子连接的NA片段为模板，以该单一型引子作为正向及反向引子在每个分区中进行PCR，以扩增该衔接子连接的NA片段；以及(g)评估每个部分的荧光信号。2.如权利要求1的方法，其中步骤(g)包括检测包含扩增的衔接子连接的NA片段的所有分区的荧光颜色(信号)，并计数具有预期荧光颜色的分区的数量，进而确定该样本中的NA片段的预估量。3.如权利要求1的方法，其中在步骤(e)中，超过50％的分区含有不超过一个复制的衔接子连接的NA片段。4.如权利要求1的方法，其中在步骤(e)中，每个分区包含至少一个复制的该衔接子连接的NA片段。5.如权利要求1的方法，其中该NA片段包含可表示该个体的健康/疾病状态的核酸序列。6.如权利要求1的方法，其中步骤(b)的该均质衔接子不自体连接。7.如权利要求1的方法，其中步骤(b)的该均质衔接子在该T/U寡核苷酸链中具有3'
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T或3'
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U突出端，且在该P寡核苷酸链中具有3'
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非
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A突出端。8.如权利要求1的方法，其中步骤(b)的该均质衔接子的一端为3'
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T突出端，另一端为钝端。9.如权利要求1的方法，其中该样本是由体液样本所获得。10.如权利要求1的方法，其中该样本中的该NA片段为无细胞DNAs。11.如权利要求1的方法，其中在步骤(a)之前，进一步包括对该NA片段进行末端修复反应。12.如权利要求1的方法，其中步骤(f)的该PCR通过油乳剂或液滴PCR，或基于孔的PCR进行。
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【专利技术属性】
技术研发人员：邱国平，
申请(专利权)人：台湾地区中央研究院地址，
类型：发明
国别省市：