一种以PAP为靶点的药物筛选动物模型的构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种以PAP为靶点的药物筛选动物模型，通过在雄性重度联合免疫缺陷小鼠皮下接种LNCaP.FGC细胞构建，并且通过CTL细胞有效性实验研究看出本发明专利技术构建的动物模型可以很好的应用于针对PAP靶点的药物筛选以及细胞治疗领域。而且本发明专利技术中的动物模型与传统的裸鼠模型相比，不会发生人源细胞排斥反应，更容易成瘤，可以不受任何限制的大规模开展试验。与PDX模型相比较，具有成功率高、周期短、成本低的优势。低的优势。

【技术实现步骤摘要】
一种以PAP为靶点的药物筛选动物模型的构建方法和应用


[0001]本专利技术属于动物模型领域，具体涉及一种以PAP为靶点的药物筛选动物模型的构建方法和应用。

技术介绍

[0002]前列腺癌(prostate cancer，PC)是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，是老年男性多发病，具有较高的发病率和死亡率。2018年美国新增肿瘤患病人数中前列腺癌占男性肿瘤的19％，致死人数占男性恶性肿瘤的9％，仅次于肺癌。进展期浸润型前列腺癌的5年生存率仅为29％。10％～20％的前列腺癌经过18～24个月的内分泌治疗后可逐渐进展为转移性去势抵抗性前列腺癌(metastatic castration
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resistant prostate cancer，mCRPC)，化疗药物和分子靶向药物治疗可作为mCRPC患者的治疗选择，但容易出现耐药性，mCRPC患者平均中位生存时间少于2年。因此开发出新的、有效的前列腺癌治疗方案十分迫切。
[0003]细胞治疗作为肿瘤治疗的新手段成为了研究热点，尤其是基于树突状细胞(dendritic cell，DC)疫苗的前列腺癌治疗取得了较好的临床效果。前列腺癌表达多种肿瘤相关抗原(TAA)，如前列腺特异性抗原(Prostate specific antigen，PSA)、前列腺特异性膜抗原(prostrate specific membrane antigen，PSMA)、前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phosphatase，PAP)、前列腺干细胞抗原(Prostate Stem Cell Antigen，PSCA)等，这些肿瘤相关抗原为免疫治疗提供了多种潜在靶点。通过前列腺癌相关抗原肽致敏DC，能诱导强效的抗肿瘤免疫效应。
[0004]PAP属于酸性磷酸酶家族。前列腺癌患者血清中PAP浓度增高，特别是已经发生骨转移的病人血清中PAP浓度显著升高，PAP在前列腺组织中的特异性表达使其成为前列腺癌免疫治疗的又一良好靶点。PAP—GM—CSF融合蛋白致敏自体抗原呈递细胞(Antigen
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presenting cells，APC)能够产生抗前列腺癌的免疫反应，而Sipuleucel—T就是以此为基础的产品。2010年，基于三项双盲随机三期临床试验，FDA批准Provenge(Sipuleucel
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T)用于治疗激素难治性晚期前列腺癌，成为首个肿瘤治疗性疫苗产品，Provenge的获批开启了细胞免疫疗法治疗癌症的时代。而DC疫苗要达到的关键目标就是引发机体的细胞介导的免疫反应，主要是激活肿瘤相关抗原(tumor
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associated antigen，TAA)特异性的杀伤性T淋巴细胞(Cytotoxic TLymphocyte，CTL)。利用表达纯化的前列腺癌肿瘤抗原PAP
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GM
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CSF融合蛋白刺激活化前列腺癌病人的DC细胞，并在体外通过致敏DC诱导PAP
‑
GM
‑
CSF抗原特异性CTL，从而获得大量高活性的抗原特异性的CTL细胞，用于前列腺癌的临床治疗，从而提高临床疗效。
[0005]而细胞治疗产品在用于临床之前，需要通过临床前的基础研究以及动物试验等进行改进和优化，所以建立一个合理的动物研究模型显得尤为重要。而人源肿瘤细胞系异种移植瘤模型(cell
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line
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derived xenograft，CDX)与人源肿瘤组织来源移植瘤模型(Patient
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derived tumor xenograft，PDX)是我们现在应用最多的两种用于癌症治疗的动
物模型。相对于CDX模型，PDX模型虽然使得肿瘤的生长微环境更接近实际情况，但PDX模型成功率低、费用高、周期长。所以现阶段主要还是选择CDX模型用于肿瘤治疗的动物模型。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一个目的在于，针对现有技术中缺少以PAP为靶点的CDX模型的问题，提供一种以PAP为靶点的药物筛选动物模型的构建方法。
[0007]本专利技术的第二个目的在于，提供上述构建方法构建的动物模型在前列腺癌药物筛选中的应用。
[0008]本专利技术的第三个目的在于，提供上述方法构建的动物模型在免疫治疗有效性研究中的应用。
[0009]本专利技术的第四个目的在于，提供上述方法构建的动物模型在CTL细胞治疗有效性研究中的应用。
[0010]本专利技术的第五个目的在于，提供一种筛选前列腺癌药物的方法。
[0011]本专利技术所采取的技术方案是：
[0012]本专利技术的第一个方面，提供一种以PAP为靶点的药物筛选动物模型的构建方法，通过在雄性重度联合免疫缺陷小鼠皮下接种LNCaP.FGC细胞构建。
[0013]根据本专利技术第一个方面所述的构建方法，所述LNCaP.FGC细胞浓度为0.5～2
×
107cell/ml。
[0014]根据本专利技术第一个方面所述的构建方法，所述LNCaP.FGC细胞浓度为1
×
107cell/ml。
[0015]根据本专利技术第一个方面所述的构建方法，所述接种的细胞数量为1～4
×
106cell/只。
[0016]根据本专利技术第一个方面所述的构建方法，所述接种的细胞数量为2
×
106cell/只。
[0017]本专利技术的第二个方面，提供本专利技术第一个方面所述的方法构建的动物模型在药物筛选中的应用。
[0018]根据本专利技术第二个方面所述的应用，所述药物为前列腺癌药物。
[0019]根据本专利技术第二个方面所述的应用，所述前列腺癌药物为以PAP为靶点的前列腺癌药物。
[0020]本专利技术的第三个方面，提供本专利技术第一个方面所述的方法构建的动物模型在免疫治疗有效性研究中的应用。
[0021]本专利技术的第四个方面，提供本专利技术第一个方面所述的方法构建的动物模型在CTL细胞治疗有效性研究中的应用。
[0022]本专利技术的第五个方面，提供一种筛选前列腺癌药物的方法，使用本专利技术第一个方面所述的方法制备的动物模型进行药物筛选。
[0023]根据本专利技术第五个方面所述的方法，包括以下步骤：
[0024]S1：向所述动物模型中注射待筛选的药物；
[0025]S2：检测所述动物模型中的肿瘤体积。
[0026]根据本专利技术第五个方面所述的方法，步骤S2所述检测肿瘤体积的具体操作为：每周测量两次肿瘤大小，具体为瘤体的长径和短径(与长径垂直的短径)，计算肿瘤体积，计算
方法为：肿瘤体积＝0.5
×
长径
×
短径2。
[0027]本专利技术的有益效果是：
[0028]本专利技术通过在雄性重度联合免疫缺陷小鼠皮下接种LNCaP.FGC细胞构建以PAP为靶点的药物筛选动物模型。并且通过CTL细胞有效性实验研究看出本专利技术构本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种以PAP为靶点的药物筛选动物模型的构建方法，在雄性重度联合免疫缺陷小鼠皮下接种LNCaP.FGC细胞。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述LNCaP.FGC细胞浓度为0.5～2
×
107cell/ml。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，每只小鼠中接种的LNCaP.FGC细胞数量为1～4
×
106cell/。4.权利要求1至3任一所述的方法构建的动物模型在药物筛选中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物为治疗前...

【专利技术属性】
技术研发人员：安鸿，廖鹏云，周超，周玲，杜云彪，
申请(专利权)人：江门赛尔康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：